本发明专利技术涉及衍生自IgE的CH3结构域的新的肽表位，这些肽表位被特异性结合IgE的高亲和力抗体识别。这些新的肽可用于对对象进行主动免疫，所述主动免疫通过将这些肽给予对象而在对象体内产生高亲和力抗体实现；这些新的肽还可用于对对象进行被动免疫，所述被动免疫通过在非人宿主体内产生特异性结合IgE的这些区域的高亲和力抗IgE抗体实现。
【技术实现步骤摘要】
新的IgE表位的鉴别本申请为申请日为2004年7月29日、申请号为200480041292. 8、专利技术名称为“新的IgE表位的鉴别”的专利技术专利申请的分案申请。交叉相关申请本申请要求申请日为2004年2月2日的PCT申请PCT/US04/02892和PCT/US04/02894的优先权，这些PCT申请并入本文作参考。
技术介绍
变态反应(allergy)是由对外源因素如变应原(allergen)过大的免疫应答所诱导的过敏状态。特征在于与变应原接触后立即发生变态反应的速发型超敏反应(I型)是由B细胞介导的，并且基于抗原-抗体反应。迟发型超敏反应是由T细胞介导的，并且基于 细胞免疫性机制。近年来，术语“变态反应”越来越成为I型超敏反应的同义词。速发型超敏反应是基于B细胞产生E型免疫球蛋白(IgE抗体)的一种应答，所述B细胞暴露于变应原而分化为分泌抗体的浆细胞。IgE诱导的反应是在变应原进入机体的部位，即在粘膜表面和/或在局部淋巴结，发生的局部事件。局部产生的IgE首先使得局部肥大细胞敏感，即IgE抗体将其恒定区与肥大细胞表面上的Fe ε受体结合，然后“溢出(spill-over)” IgE进入循环并与整个机体的循环中的嗜碱细胞和组织固定的肥大细胞上的受体结合。当结合的IgE随后与变应原接触时，Fe ε受体通过变应原的结合而交联，导致细胞脱粒并释出许多变态反应介质，如组胺、前列腺素、白细胞三烯等等。这些物质的释放造成速发型超敏反应的典型临床症状，所述临床症状即呼吸道或肠道平滑肌收缩、小血管扩张及其对水和血浆蛋白的通透性增加、粘液分泌(导致例如变态反应性鼻炎、特应性湿疹和哮喘)、以及对皮肤神经末梢的刺激导致瘙痒和疼痛。另外，基于与变应原二次接触的反应是加强的，因为在首次与变应原接触后，通过在细胞表面上表达IgE，一些B细胞形成表面IgE阳性B细胞(slgE+B细胞)的“记忆库(memory pool) ”。IgE有两种主要受体高亲和力受体Fe ε RI和低亲和力受体Fe ε RII0 Fe ε RI主要在肥大细胞和嗜碱细胞表面表达，但在人朗格汉斯细胞、树突细胞和单核细胞上也发现低水平的Fe ε RI，在此其发挥IgE-介导的变应原呈递作用。另外，有报道在人嗜酸性粒细胞和血小板上发现 Fe ε RI (Hasegawa, S. et al.，Hematopoiesis, 1999,93 :2543-2551)。在B细胞、T细胞或嗜中性粒细胞上未发现Fe ε RI。Fe ε RI在朗格汉斯细胞和皮肤树突细胞上的表达对于变应性个体中IgE结合的抗原呈递在功能上和生物学上都是重要的(KlubalR. et al.，J. Invest. Dermatol. 1997,108 (3) :336-42)。低亲和力受体Fe ε RII (⑶23)是一种凝集素样分子，包含三个相同的亚基，其具有从细胞质膜伸出的长et-螺旋卷曲莖结构(stalk)延伸的头结构(head structure)(Dierks, A. E. etal.，J. Immunol. 1993，150 :2372-2382)。在与 IgE 结合的基础上，FceRII与B细胞上的⑶21结合，参与IgE合成的调节(Sanon, A. et al. , J. Allergy Clin.Tmmunol. 1990,86 :333-344, Bonnefoy, J. et al. , Eur. Resp. J. 1996,9 :63s_66s)。Fe ε RH长期以来被认为用于变应原呈递(Sutton and Gould，1993，Nature，366 :421-428)。与上皮细胞上的Fe ε RII结合的IgE导致特异性快速变应原呈递(Yang，P. P.，J. Clin. Invest.，2000,106 :879-886)。Fe ε RII存在于一些细胞类型上，包括B细胞、嗜酸性粒细胞、血小板、天然杀伤细胞、T细胞、滤泡树突细胞和朗格汉斯细胞。已经鉴别了与Fe ε RI和Fe ε RII相互作用的IgE分子上的结构实体。诱变研究表明 CH3 结构域介导 IgE 与 Fe ε RI (Presta et al.，J. Biol. Chem. 1994,269 :26368-26373 ；Henry A.J.et al. , Biochemistry,1997,36 15568-15578)和 Fe εRII(Sutton andGould, Nature,1993,366 :421-428 ；Shi, J. et al.，Biochemistry,1997,36 :2112-2122)的相互作用。高亲和力和低亲和力受体的结合位点均沿着经由两个CH3结构域的中心旋转轴而对称定位。Fe ε RI结合位点位于接近CH2结构域连接处的外侧的CH3结构域中，而Fe ε RH结合位点位于CH3的羧基末端。治疗变态反应的一个有希望的概念包括应用单克隆抗 体，所述抗体是IgE同种型特异性的，并因此能结合IgE。这个方案基于通过减量调节IgE免疫应答而对变态反应进行抑制，所述免疫应答是诱导变态反应最早出现的事件并使得变态反应状态得以维持。由于其他抗体类别的应答不受影响，因此得以实现对变态反应症状的即时和长期作用。对人嗜碱细胞密度的早期研究示出患者血浆中IgE水平与每个嗜碱细胞的Fe ε RI受体数目之间的关系(Malveaux et al. , J. Clin. Invest. , 1978,62 :176)。他们注意到变态反应和非变态反应人中的Fe ε RI密度为每个嗜碱细胞IO4-IO6个受体。后来示出用抗IgE治疗变态反应疾病使得循环中IgE的数量降低至治疗前水平的1% (MacGlashan et al. ,]. Immunol.,1997,158 =1438-1445) ο MacGlashan分析了得自用完整抗IgE抗体(其结合在患者血清中循环的游离IgE)治疗的患者的血清。他们报道了降低患者的循环IgE水平导致嗜碱细胞表面上存在的受体数目降低。因此，他们设想嗜碱细胞和肥大细胞表面上的Fe ε RI的密度受到循环IgE抗体水平的直接或间接调节。最近，WO 99/62550公开了 IgE分子及片段的应用，这些IgE分子及片段结合Fe ε RI和Fe ε RH的IgE结合位点以阻断IgE与受体的结合。然而，对这些变态反应疾病的不具有有害副作用的有效治疗方法还很有限。治疗变态反应疾病的一种治疗方法包括使用人源化抗IgE抗体治疗变应性鼻炎和哮喘(Corne，J. et al.，J. Clin. Invest. 1997,99 879-887 ;Racine_Poon，A. et al.，Clin.PharmcoI. Ther. 1997,62 :675-690 ;Fahy，J. V. etal.，Am. J. Resp. Crit. Care Med. 1997，155 :1824-1834 ； Boulet，L P. et al.，Am. J. Resp.Cr it. Care Med.，1997，155 :1835-1840 ；Milgrom, E. et al本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
2004.02.02 US PCT/US04/02892;2004.02.02 US PCT/US01.一种分离的抗体，其特异性结合氨基酸序列中的表位，所述表位选自下组Leu Pro ArgAla Leu XaaArg Ser Xaa ；Leu Pro Arg Ala Leu Met Arg Ser Thr ； His Pro His Leu Pro Arg Ala Leu Met Arg Ser Thr ;或者 Leu Pro Arg Ala Leu Met Arg Ser Thr Thr Lys Thr02.权利要求I的抗体,其进一步包含一种标记。3.权利要求I或2的抗体，其中所述抗体是 a)嵌合抗体， b)单链抗体， c)Fab片段， d)F(ab/)片段， e)人抗体，或者 f)人源化抗体。4.权利要求1-3任一项的抗体，其中所述抗体是多克隆抗体。5.权利要求1-3任一项的抗体，其中所述抗体是单克隆抗体。6.一种组合物，其包含权利要求1-5任一项的抗体及一种生理学可接受的载体、稀释剂、稳定剂和/或赋形剂。7.一种制备抗体的方法，所述方法包括 a)用包含抗-IgE表位的多肽在激发抗体应答的条件下免疫动物，其中所述表位由以下氨基酸序列组成Leu Pro Arg Ala Leu Xaa Arg Ser Xaa ；Leu Pro Arg Ala Leu Met Arg Ser Thr ； His Pro His Leu Pro Arg Ala Leu Met Arg Ser Thr ;或者 Leu Pro Arg Ala Leu Met Arg Ser Thr Thr Lys Thr, b)从所述动物分离抗体，和 C)鉴别特异性结合步骤(a)的多肽的抗体。8.—种可通过权利要求7的方法获得的抗体。9.一...
【专利技术属性】
技术研发人员：桑贾亚·辛格，黄丹阳，锡·钟·迈克尔·冯，
申请(专利权)人：泰勒公司，
类型：发明
国别省市：
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