早期胰腺腺癌的检测制造技术

本发明专利技术描述了使用抗胰腺癌抗体或其片段，例如鼠、嵌合、人源化或人PAM4抗体的组合物和方法。题述抗体表现出许多新的并且有用的诊断特征，例如以高特异性结合到胰腺癌和其它癌症上，但不结合到正常胰腺组织上，以及结合到高百分比的早期胰腺癌上。在优选的实施方案中，所述抗体结合到胰腺癌粘蛋白上。所述抗体和片段可用于检测和诊断早期胰腺癌。在优选的实施方案中，所述抗胰腺癌抗体可用于血清样品的免疫测定，其中所述免疫测定可以检测血清中早期胰腺癌的标记。更优选在免疫测定前用有机相例如丁醇萃取血清。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】早期胰腺腺癌的检测相关申请根据美国法典第35篇第119条(e)款，本申请要求2010年I月22日提交的美国临时申请61/297，303、2010年4月14日提交的61/323，944、2010年6月2日提交的61/350,567以及2010年8月19日提交的61/375，119的权益。上面引用的每篇优先权申请均以引用的方式整体并入本文。 有关联邦政府资助的研究或开发的申明这项工作部分由NIH基金R01-CA096924资助。美国政府可享有本专利技术的某些权利。专利技术背景专利
本专利技术涉及抗胰腺癌抗体的用途，所述抗体以高选择性结合到胰腺癌细胞上从而检测和/或诊断胰腺腺癌，优选地最早期的胰腺腺癌。更优选地，基于抗体的测定能够检测约85%或更多的胰腺腺癌，对健康对照的假阳性率为5%或更低。在特定实施方案中，所述方法和组合物可用来通过筛检来自受试者的血清样品来检测和/或诊断胰腺腺癌，并优选可通过血清样品分析检测60%或更多的I期胰腺癌以及80%或更多的II期胰腺癌。在优选实施方案中，所述抗胰腺癌抗体与PAM4抗体竞争结合到胰腺癌粘蛋白上，所述PAM4抗体包含轻链可变区互补决定区(OTR)序列⑶Rl (SASSSVSSSYLY，SEQ ID NO: I), CDR2 (STSNLAS, SEQID NO: 2)和 CDR3 (HQWNRYPYT, SEQ ID NO: 3),以及重链 CDR 序列 CDRl (SYVLH, SEQ ID NO: 4)、CDR2 (YINPYNDGTQYNEKFKG，SEQ ID NO: 5)和CDR3 (GFGGSYGFAY，SEQ ID NO: 6)。最优选地，所述抗胰腺癌抗体是人源化PAM4 (hPAM4)抗体，其包含轻链 CDR 序列 CDRl (SASSSVSSSYLY, SEQ ID NO: I)、CDR2 (STSNLAS, SEQ IDNO: 2)和 CDR3 (HQWNRYPYT, SEQ ID NO: 3),以及重链 CDR 序列 CDRl (SYVLH, SEQ ID NO: 4),CDR2 (YINPYNDGTQYNEKFKG，SEQ ID NO: 5)和 CDR3 (GFGGSYGFAY，SEQ ID NO: 6)，以及人抗体构架区(FR)和恒定区序列。相关领域胰腺癌是主要发生于胰腺导管细胞的胰腺恶性生长。这种疾病是排在第九位的最常见癌症形式，但它分别是排在第四和第五位的男性和女性癌症死亡的主要原因。胰腺癌几乎总是致命的，5年存活率小于3 %。胰腺癌最常见的症状包括黄疸、腹痛和体重减轻，这些症状与其它表现症状(presenting factor)都是非特异性的。因而，在肿瘤生长早期诊断出胰腺癌常常是困难的，需要大量的诊断性检查，时常包括探查术。内窥镜超声成像和计算机断层成像是目前可用的最好的非侵入性诊断胰腺癌的手段。然而，小肿瘤的可靠检测以及胰腺癌和局灶性胰腺炎的区分是困难的。目前，绝大多数胰腺癌患者处于晚期时才被诊断出来，此时肿瘤已从囊向外延伸，侵袭周围器官和/或已经广泛转移。Gold等，Crit. Rev. Oncology/Hematology, 39:147-54 (2001)。该疾病的晚期检测是常见的，早期胰腺癌诊断在临床上是罕见的。这很重要，因为胰腺癌的晚期检测导致存活率低下。可用的胰腺癌现行治疗程序没有导致治愈或明显提高存活时间。手术切除是提供存活机会的唯一方式。然而，由于肿瘤负荷大，仅10%至25%的患者是“治愈性切除”的候选者。对于接受手术治疗的那些患者，5年存活率仍然很低，平均仅约为10%。胰腺癌的早期检测和诊断以及对该疾病的适当分期将会提供提高的存活优势。许多实验室已试图基于肿瘤相关标记至血流中的释放以及活检样本内的标记物质的检测来开发诊断程序。对于胰腺癌，先前表征的最好的肿瘤相关标记是针对CA19. 9的免疫测定。在70%的胰腺癌患者中发现这种唾液酸化Lea表位结构水平升高，但并未在任何所检查的局灶性胰腺炎样本中发现。然而，发现CA19. 9水平在许多其它恶 和良性病状中也升高，所以目前该测定不能用于诊断。该测定对于监测有用，手术后CA19. 9血清水平持续增加指示不良预后。已经报道，用于在不同的发展期进行诊断的许多其它单克隆抗体(MAb)的免疫测定。这些抗体包括但不限于DUPAN2、SPANl、B72. 3、Ia3和各种抗-CEA (癌胚抗原，或CEACAM5)抗体。抗体，特别是MAb和工程化抗体或抗体片段已被全面测试，并被证明在检测和治疗包括癌症、自身免疫性疾病、感染性疾病、炎性疾病或心血管疾病在内的各种人病症中具有价值[Filpula 和 McGuire, Exp. Opin. Ther. Patents (1999) 9:231-245]。抗体或抗体源性试剂的临床应用主要取决于它们与特定病症相关的特异性靶抗原结合的能力。选择性对于在人病症的检测和治疗阶段期间将诊断剂或治疗剂递送至靶部位是有价值的，特别是如果所述诊断剂或治疗剂对机体正常组织有毒性时更是如此，所述诊断剂或治疗剂为例如药物、毒素、细胞因子、激素、激素拮抗剂、酶、酶抑制剂、寡核苷酸、生长因子、放射性核素、血管生成抑制剂或金属。放射性标记抗体已在包括卵巢癌、结肠癌、甲状腺髓样癌和淋巴瘤在内的许多恶性肿瘤的应用中取得了一些成功。这项技术也被证明对胰腺癌有用。然而，先前报道的抗胰腺癌抗原的抗体到目前为止还没有成功地用于胰腺癌的有效治疗或早期检测和/或诊断。本领域仍然需要与正常胰腺组织和其它正常组织相比对胰腺癌和其它类型的癌症表现出高选择性的抗体。特别地，仍然需要这样的抗体，其可用作胰腺癌，优选最早期胰腺癌的有效诊断和/或治疗工具，并且在靶抗原中的摄取增强，与健康个体血液中的组分的结合降低，并从而也为正常组织和细胞提供最佳的保护，使其免受当这些组分缀合到此类抗体上时有毒治疗剂的损害。将此类抗体用来检测体液(特别是血液)中的胰腺癌相关抗原，可以改进这种疾病的较早期诊断，只要它明显区别于良性疾病，并且还可以监测治疗反应，并且还可潜在地通过指示疾病负荷来改善预后。概述在各种实施方案中，本专利技术涉及结合到胰腺癌细胞上，而很少或不结合到正常细胞或非赘生性胰腺癌细胞上的抗体、抗原结合抗体片段和融合蛋白。优选地，所述抗体结合到最早期胰腺癌上，对PanIN-IA的检测率为约54%，对PanlB的检测率为75%，对PanIN_2的检测率为86%。更优选地，所述抗体结合到80%至90%或更多的人侵袭性胰腺腺癌、导管内乳头状粘液性瘤变(neoplasia)、PanlN-lA、PanIN-IB和PanIN-2病变上。最优选地，所述抗体可以区分早期胰腺癌和非恶性病状例如胰腺炎。此类抗体特别可用于癌症的早期检测以及早期胰腺癌和良性胰腺病状的鉴别诊断。在优选的实施方案中，此类抗体可用于体内或离体分析来自疑似患有早期胰腺癌或某些其它癌症的个体的样品。更优选地，所述抗体可用于通过分析血清样品检测和诊断早期胰腺癌。所述抗体、抗体片段或融合蛋白可以通过用粘蛋白免疫和/或选择而获得，并优选对人胰腺癌粘蛋白有反应性。因此，所述抗体、抗体片段或融合蛋白优选结合到与胰腺癌细胞相关的抗原上。更优选地，所述抗体、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.01.22 US 61/297,303;2010.04.14 US 61/323,944;1.一种检测或诊断胰腺癌的方法，其包括 a)从个体获取血液、血清或血浆样品；和 b)利用抗胰腺癌抗体进行免疫测定从而检测所述样品中胰腺癌粘蛋白的存在； 其中所述胰腺癌粘蛋白的存在指示所述个体患有胰腺癌，并且所述血清免疫测定可以检测早期胰腺癌。2.根据权利要求I所述的方法，其中所述血清免疫测定可以检测IA期、IB期和2期胰腺癌。3.根据权利要求I所述的方法，其中所述血清免疫测定可以检测80%或更多的总胰腺癌。4.根据权利要求I所述的方法，其中所述血清免疫测定可以检测60%或更多的I期胰腺癌。5.根据权利要求I所述的方法，其中所述血清免疫测定可以检测54%的IA期胰腺癌。6.根据权利要求I所述的方法，其中所述血清免疫测定可以检测75%的IB期胰腺癌。7.根据权利要求I所述的方法，其中所述血清免疫测定可以检测86%的2期胰腺癌。8.根据权利要求I所述的方法，其中所述血清免疫测定可以检测90%或更多的3期和4期胰腺癌。9.根据权利要求I所述的方法，其中所述血清免疫测定对于未患胰腺癌或胰腺炎的对照个体的假阳性率为5%或更小。10.根据权利要求I所述的方法,其中所述血清免疫测定对于患有慢性胰腺炎的个体的假阳性率为38%或更小。11.根据权利要求I所述的方法，其中所述血清免疫测定可以检测无症状个体的胰腺腺癌。12.根据权利要求I所述的方法，其中所述样品是血清样品，并且所述方法进一步包括在进行所述免疫测定之前对所述血清样品进行有机相萃取。13.根据权利要求12所述的方法，其中所述有机相是丁醇。14.根据权利要求I所述的方法，其中所述免疫测定检测PanIN-lA、PanIN_lB、PanIN-2、侵袭性胰腺腺癌、胰腺癌、粘液性囊性赘生物(MCN)、胰腺内粘液性赘生物(IPMN)和导管内乳头状粘液性瘤变的存在。15.一种检测或诊断胰腺癌的方法，其包括 a)向个体施用抗体构建体,所述抗体构建体包含与嵌合PAM4(cPAM4)抗体结合到相同的表位上或者与嵌合PAM4(cPAM4)抗体竞争结合到胰腺癌粘蛋白上的至少一种抗胰腺癌抗体或抗原结合片段，所述嵌合PAM4(cPAM4)抗体包含轻链可变区CDR序列CDRl(SASSSVSSSYLY,(SEQ ID NO:I)、CDR2(STSNLAS, SEQ ID NO:2)和CDR3(HQWNRYPYT，SEQID NO: 3)，以及重链可变区 CDR序列 CDRl (SYVLH, SEQ ID NO: 4)、CDR2 (YINPYNDGTQYNEKFKG，SEQ ID NO: 5)和 CDR3 (GFGGSYGFAY，SEQ ID NO: 6);和 b)检测结合到胰腺癌细胞上的所述抗体构建体。16.根据权利要求15所述的方法，其中使所述抗体构建体在体内或体外暴露于所述样品。17.根据权利要求15所述的方法，其中所述抗胰腺癌抗体或其片段结合到包含氨基酸序列WTWNITKAYPLP (SEQ ID NO: 29)的线性...

【专利技术属性】
技术研发人员：D·V·戈德，D·M·戈登堡，
申请(专利权)人：免疫医疗公司，
类型：发明
国别省市：