检测HER2基因表达水平的实时荧光定量PCR试剂盒，涉及一种PCR试剂盒。所述检测HER2基因表达水平的实时荧光定量PCR试剂盒包括HER2基因PCR反应液、ACTB基因PCR反应液、Taq酶系、对照品和包装物；采用的引物为环状引物，在5’端存在3-8个自行设计的碱基，在合适条件下可以和3’端序列相互结合为双链，可有效地避免了非特异扩增产物尤其是引物二聚体形成，并增加其专一性。利用相对定量实时RT-PCR的方法来检测乳腺癌患者中HER2基因表达水平，采用2-△△Ct值法对检测结果进行定量，可用于乳腺癌的早期及转移的诊断，辅助临床用药的选择和预后判断等多个领域。
Real time fluorescent quantitative PCR kit for detecting the level of HER2 gene expression
A real-time fluorescent quantitative PCR kit for detecting the level of HER2 gene expression relates to a PCR kit. The expression of HER2 gene was detected by real-time fluorescent quantitative PCR kit including HER2 gene ACTB gene PCR reaction solution, PCR reaction solution, Taq enzyme system, control products and packaging; the primers for the ring primers, 3-8 designed the base found in the 5 'end and 3' end sequences, with each other for double chain can be under suitable conditions, it can effectively avoid the non specific amplification products especially primer dimer formation in two, and increase its specificity. To detect the HER2 gene expression level in breast cancer patients by using the method of relative quantitative real-time RT-PCR, using 2- Delta Ct value method was used for quantitative analysis on the test results, can be used for early diagnosis and metastasis of breast cancer, multiple field assisted clinical medication choice and prognosis.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种PCR试剂盒，尤其是涉及一种检测HER2基因表达水平的实时荧光定量PCR试剂盒。
技术介绍
乳腺癌是女性第二大常见肿瘤，发病率仅次于非黑色素瘤皮肤癌，是导致患癌症妇女死亡的第二大主要原因，其发病率约占全部女性恶性肿瘤的16%，且它的发病常与遗传有关，据流行病学调查发现，59TlO%的乳腺癌是家族性的。20 世纪以来，乳腺癌的发病率在世界各地均有上升的趋势，据资料统计，仅2008年全球乳腺癌死亡人数就高达458，503人，占女性恶性肿瘤死亡人数的 13. 7%(Boyle P，Levin B. World Cancer Report 2008 [M].France :IARC, 2008)。近年来，我国女性乳腺癌的发病率也正以每年3% 4%的增长率急剧上升，每年约有20余万妇女患乳腺癌，其中，约209^30%的乳腺癌患者为人类表皮生长因子受体-2 (Her2/neu)阳性乳腺癌。Yang 等(Yang L, Parkin DM, Ferlay J, et al. Estimates of Cancer Incidencein China for 2000and Projections for 2005[J]. Cancer Epidemiol BiomarkersPrev, 2005, 14:243-250)根据全国肿瘤死亡率监测资料预测，我国女性乳腺癌的发病率将从2000年的19.9 / 10万上升到2005年的24. 8 / 10万。近年来的研究也发现，我国女性乳腺癌的发病年龄正趋于年轻化，近四成患者在4(T49岁之间被诊断为乳腺癌，这部分患者可能在治疗过程中经历绝经过程，这一特点与欧美国家三分之二以上患者发病时已经绝经形成鲜明对比，由中国癌症基金会发起的中国首个大规模乳腺癌流行病调研项目一 “中国乳腺癌流行病学调研项目”在2011年发布的整体调研结果显示，我国女性乳腺癌病人发病的中位年龄为48岁，比西方提早了 10年，因此乳腺癌的早期诊疗研究对于我国乃至全球女性生命健康具有非常重要的意义。HER2是原癌基因人类表皮生长因子受体_2 (Human Epidermal Growth FactorReceptor-2)基因，即c-erbB-2基因，定位于染色体17ql2_17q21上，编码相对分子质量为185kDa的跨膜受体样蛋白，具有跨膜酪氨酸激酶活性的生长因子受体，由胞外区(ECD)、跨膜区(TM)和胞内区(ID)三部分构成，胞外区主要由2个配体结合域(RLD)与 2 个富含半胱氨酸区构成(Lohrish C，Piccart M. An overview of HER-2[J]. SeminOncol, 2001, 28:3-11)。1987 年，Slamon 等(Slamon DJ, Clark GM, Wong SG, et al. Human BreastCancer:Correlation of Relapse and Survival with Amplification of the HER2/neu oncogene [J], Science, 1987，235 (4785) : 177-182)在对 189 名人乳腺癌患者的研究中，首次报道了 J1ER2基因在乳腺癌细胞中的表达，指出HER2基因在乳腺癌的生物学行为和发病机制中有重要作用，并认为J1ER2基因的扩增水平是比雌激素受体、肿瘤大小等更有价值的预后指标。此后，Ross 等(Ross JS, Fletcher JA. The HER-2/neu Oncogene inBreast Cancer-Prognostic Factor, Predictive Factor and Target for Therapy[J].Stem Cells, 1998，16:413-428)对涉及15248例病人的47组试验进行了回顾性研究，结果显示，对60%的试验组和67%的病人来说，HER2基因的扩增水平可以作为判断乳腺癌预后的独立指标。Schmidt 等(Schmidt M, Lewark B，Kohlschmidt N，et al. Long-termPrognostic Significance of HER-2/neu in Untreated Node-negative Breast CancerDepends on the Method of Testing [J]. Breast Cancer Res, 2005，7:256-266)通过对未经任何治疗的淋巴结阴性乳腺癌患者HER2状态的研究，发现HER2基因扩增比Her2蛋白表达对于预后的意义更加明确，因此，他们认为HER2基因扩增可作为一个独立的预后因子。Mrhalova 等(MrhalovdM, KodetR, KalinovdM,et al. Relative Quantification of ERBB2mRNA in Invasive Duct Carcinoma of the Breast: Correlation with ERBB—2 ProteinExpression and ERBB2 Gene Copy Number[J]. Pathol Res Pract, 2003, 199(7):453-461)通过对39例浸润性导管癌进行研究，发现HER2基因mRNA的表达水平(荧光定量逆转录PCR法Q-RT-PCR)与HER2蛋白表达水平(免疫组织化学法，IHC)及HER2基因拷贝数水平(荧光原位杂交法，FISH)存在较好的一致性，且在可疑病例的判断中有较出色的表现。Celine Bossard 等(Bossard C，Bieche I, Doussal VL, et al. Real-time RT-PCR:AComplementary Method to Detect HER-2 Status in Breast Carcinoma[J]. Anticancer Res, 2005, 25:4679-4684)也通过44例浸润性乳腺癌的研究证实了 Mrhalova等的研究，并对不相符病例产生的原因进行了阐述。2007年美国临床肿瘤学会(ASCO)发布HER2基因作为乳腺癌治疗指标的更新建议，其中指出，对每一例原发浸润性乳腺癌的诊断，以及复发病人选择曲妥珠单抗治疗前都应进行 HER2 基因表达水平的评估检测(Harris L, Fritsche H，Mennel R, et al. AmericanSociety of Clinical Oncology 2007 Update of Recommendations for the Use ofTumor Markers in Breast Cancer[J]. J Clin Oncol, 2007, 25 (33) :5287-5312)。乳腺肿瘤患者ffiR2阳性意味着乳腺肿瘤细胞表面的HER2蛋白数量增多，过度传递信号，刺激癌细胞疯狂增殖，HER2阳性的患者同其他乳腺癌病人相比，肿瘤恶性程度更高，进展更快，更容易复发和远处转移，且此类病人通常对内分泌治疗(他莫昔芬)不敏本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.检测HER2基因表达水平的实时荧光定量PCR试剂盒，其特征在于包括HER2基因PCR反应液、ACTB基因PCR反应液、Taq酶系、对照品和包装物； 所述HER2基因PCR反应液由PCR反应缓冲液、HER2基因特异性上游引物、HER2基因特异性下游引物和EVA Green荧光染料组成； 所述ACTB基因PCR反应液由PCR反应缓冲液、ACTB基因特异性上游引物、ACTB基因特异性下游引物和EVA Green荧光染料组成； 所述HER2基因特异性上游引物F序列为5’ -GTCCGTCCTACAACTACCTTTCTACGGAC-3 ； 所述HER2基因特异性下游引物R序列为5， -TGAGAAGGGCTTGCTGCACTTCTCA-3，； 所述ACTB基因特异性上游引物F序列为5， -CAGGATTCCTGGGCATGGAGTCCTG-3，； 所述ACTB基因特异性下游引物R序列为5， -CGCCAACAGACAGC ACTGTGTTGG...
【专利技术属性】
技术研发人员：曾骥孟，郑立谋，李怡，张换敬，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：
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