沙苑子及其黄酮提取物在制备增强自然杀伤细胞活性药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了沙苑子和/或沙苑子黄酮提取物在制备增强自然杀伤细胞活性药物中的应用。沙苑子黄酮提取物能促进NK细胞增殖，提高NK的杀伤能力，上调NK细胞表面活性分子和NK细胞活化受体的表达；本发明专利技术首次采用中药活性成分调节NK活性，具有重要的意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及沙苑子及其黄酮提取物的新用途，具体涉及利用其对自然杀伤细胞活性的增强作用在药物制备中的用途。
技术介绍
沙苑子为豆科植物扁莖黄苗(Astragalus complanatus R .Br)的干燥成熟种子，有温补肝肾，固精、缩尿、益肝明目的功能，为补益肝肾的传统中药，味甘、辛温、无毒。沙苑子主要含有黄酮类、三萜类、有机酸类、氨基酸、多肽、蛋白质、留醇、多糖及铁、锌、猛、铜等微量元素，其中沙苑子黄酮有沙苑子式(complanatuside),沙苑子新式 (neocompalnoside),沙苑子杨梅式(myricomplanoside),鼠李朽1 檬素-3_0_β -D-葡萄糖 ft (rhomnocitrin-3-O- β -D-glucoside),紫云英 ft (astragalin),山奈素-3-0-L 阿拉伯批喃糖式(kaempferol-3-0- a -L-arabinoside),山奈酌·(kaompferol),杨梅树皮素(myricetin),毛蕊异黄酮-7-0-葡萄糖式(calycosin-7-O-glucoside)等。药理研究表明，沙苑子具有保肝、降脂、降压、抑制血小板聚集、改变血液流变学指标、抗炎及增加非特异性和特异性免疫功能等作用。自然杀伤细胞(natural killer cell,NK细胞)是体内一类独特的淋巴细胞,具有无需预先致敏、无主要组织相容性体系(MHC)限制性、能直接杀伤靶细胞的功能特性。在机体抗感染、抗肿瘤、免疫调节和造血调控等方面发挥着重要的免疫功能，因此，NK细胞的临床治疗研究已经成为国内外学者研究的热点，通过各种途径扩增和激活NK细胞具有重要意义。而中药活性成分调节NK活性目前未见有文献报道
技术实现思路
本专利技术的专利技术目的是提供一种沙苑子及其黄酮提取物的新用途。为达到上述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案是沙苑子和/或沙苑子黄酮提取物在制备增强自然杀伤细胞活性药物中的应用。所述沙苑子黄酮提取物中以重量计黄酮含量> 50%。沙苑子黄酮提取物的制备属于现有技术，例如，可以采用下列方法制备沙苑子粗粉用80%乙醇提取，经AB-8大孔树脂纯化，无水乙醇重结晶，得黄色沙苑子黄酮提取物。上述技术方案中，所述沙苑子黄酮提取物包括黄酮及其医药上可接受的盐。所述药物含有治疗有效量的沙苑子和/或沙苑子黄酮提取物及药学上可接受的载体。沙苑子黄酮提取物可口服给药，每日剂量为3. Og-6. 0g，优选4. Og-5. 0g。由于上述技术方案运用，本专利技术与现有技术相比具有下列优点 I.研究证明，沙苑子黄酮提取物能促进NK细胞增殖，提高NK的杀伤能力，上调NK细胞表面活性分子和NK细胞活化受体的表达；2.本专利技术首次采用中药活性成分调节NK活性，具有重要的意义。附图说明图I是实施例二中沙苑子黄酮提取物(ACF)对NK细胞增殖活性的影响柱状对比图。图2是实施例三中沙苑子黄酮提取物(ACF)对NK细胞杀伤K-562细胞作用的影响图。图3是实施例三中沙苑子黄酮提取物(ACF)对NK细胞杀伤SMCC7721细胞作用的影响图。 具体实施例方式下面结合附图及实施例对本专利技术作进一步描述 实施例一沙苑子黄酮提取物(ACF)的制备 沙苑子粗粉lkg，用80%乙醇8000ml、7000 ml,7000 ml回流提取3次，每次I. 5 h，过滤，合并滤液，回收溶剂至无醇味后，加水稀释至1000 ml，通过AB-8大孔树脂，上样速度为l.Oml/min、上样浓度为10. Oml/min、样品液pH 5. O，水洗脱至淡黄色，40 %乙醇洗脱至浅黄色。收集40%乙醇洗脱液，减压浓缩至干，无水乙醇重结晶，结晶真空干燥，得黄色固体状沙苑子黄酮提取物，采用紫外分光光度法以沙苑子苷为对照品测定总黄酮含量D，结果D 彡 60%ο实施例二 沙苑子黄酮提取物(ACF)对NK细胞增殖活性的影响 实验方法将NK-92细胞调整密度为I X IO5个细胞/ml，于96孔板中加IOOul/孔，力口入用培养基配制的不同浓度ACF，使终浓度分别为200，100，50，25，12 μ g/ml，于37°C培养2411、4811和7211，每孔加入1(^1^皿17溶液，继续培养4h，加入100 μ I 10%SDS,待紫色结晶完全溶解后，测定570nm的OD值。实验结果培养24h、48h和7此后，ACF各剂量对NK-92细胞活性均有增强作用，并呈现一定的剂量依赖关系。与对照组比较，培养24h的ACF-B、48h的ACF-B和ACF_C、72h的ACF-A E组细胞活性显著增强(/7〈0. 01)，尤以100 μ g/ml的ACF-B组最明显，见图I。实验结果证明，沙苑子黄酮提取物(ACF)能显著促进NK细胞增殖，提高NK活性。实施例三沙苑子黄酮提取物(ACF)对NK细胞杀伤活性的影响 I.沙苑子黄酮提取物(ACF)对NK细胞杀伤K-562肿瘤细胞作用的影响实验方法以K-562为靶细胞，细胞浓度调至5 X IO4个细胞/ml，每孔100 μ I，加入96孔板中，不同浓度加药培养的ΝΚ-92细胞为效应细胞，效靶比为10: 1,5: I, I: 1，每孔100 μ 1，对照组加不含药培养的ΝΚ-92细胞，每个效靶比设4个复孔，各组设效应细胞和靶细胞对照孔。37°C，5%C02培养24h，吸弃100 μ I上清，加入MTT 10 μ I后继续培养4h，加入100ull0%SDS，待紫色结晶完全溶解后，测定570nm OD,根据以下公式计算NK细胞杀伤活性 杀伤活性(%) = {1_[(效应细胞+靶细胞OD值)一效应细胞OD值]/靶细胞OD值}X100% 实验结果NK-92细胞加ACF培养3天后，ACF能增强NK-92细胞对K-562细胞的杀伤作用。与对照组比较，ACF-A, ACF-B和ACF-C组能显著提高NK-92细胞对K-562细胞的杀伤活性(/KO. 01)，见图2。2.沙苑子黄酮提取物(ACF)对NK细胞杀伤SMCC7721肝癌细胞作用的影响 实验方法将3丽(-7721靶细胞调至5\104个细胞/1111，于96孔板中加入100 μ I/孔，培养12h后，按照效靶比为10:1，5: I, I: 1，加入不同浓度加药培养的NK-92细胞为效应细胞，对照组加不含药培养的NK-92细胞，每个效靶比设4个复孔，各组设效应细胞和靶细胞对照孔。37°C，5%C02培养24h，吸弃100 μ I上清，加入MTT 10 μ I后继续培养4h，加入100ull0%SDS，放置过夜，测定570nm 0D,计算NK细胞杀伤活性。实验结果NK-92细胞加ACF培养3天后，ACF能增强NK-92细胞对SMMC-7721细胞的杀伤作用。当效靶比为10 :1和5 :1时，与对照组比较，ACF-A、ACF-B和ACF-C组能显著提高NK-92细胞对SMMC-7721细胞的杀伤活性(/X0. 01 )，见图3。 实验结果证明，沙苑子黄酮提取物(ACF)能显著提高NK细胞对肿瘤细胞K562和SMMC-7721的杀伤活性。实施例四沙苑子黄酮提取物(ACF)对NK细胞表型及活化分子表达的影响 实验方法流式细胞术检测NK细胞表面分子。N本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.沙苑子和/或沙苑子黄酮提取物在制备增强自然杀伤细胞活性药物中的应用。2.根据权利要求I所述的沙苑子和/或沙苑子黄酮提取物在制备增强自然杀伤细胞活性药物中的应用，其特征在于所述沙苑子黄酮提取物中以重量计黄酮含量> 50%。3.根据权利要求I所述的沙苑子和/或沙苑子黄酮提...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘春宇，
申请(专利权)人：苏州大学，
类型：发明
国别省市：