用于快速恒温基因突变检测的聚合酶链反应方法技术

本发明专利技术中提供了一种用于快速恒温基因突变检测的聚合酶链反应方法，所述方法包括：A)针对待检测的靶基因DNA序列提供特定引物组；B)提供包含该引物组的反应体系，并加入待测DNA样品；C)在恒温下进行聚合酶链式反应；D)获得基因检测结果。本发明专利技术中还提供了所述的特定引物组、试剂盒、以及它们的用途。本发明专利技术的方法和产品可用于简单、敏感且快速的基因扩增和检测(尤其是突变基因检测)，在临床上具有广阔的前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物科技和医学领域，具体涉及一种简单、敏感且快速的实时核酸扩增的聚合酶链反应恒温基因扩增方法、以及用于该方法的特殊引物组及试剂盒。本方面的方法、引物及试剂盒可广泛应用于基础研究和临床诊断中的血液、细胞组织等各种生物样品中特定DNA基因野生型或突变样本的检测(例如包括但不限于EGFR、KRAS、BRAF、PI3K、ALK、C-Kit、PDGFR、ABL或其它癌基因等野生型或突变基因)，也可用于特定基因的恒温扩增。
技术介绍
A.基因检测的临床意乂基因检测主要是用于疾病的诊断，疾病的预防和指导个体化用药。例如，对结核杆菌感染的诊断，以前主要依靠痰、粪便或血液培养，整个检验流程需要在两周以上，现在采用基因诊断的方法，不仅敏感性大大提高，而且在I小时内就能得出结果。疾病的预防，就是检测健康人群的基因型，预测个人患病的风险，并向受检者提出生活上的指导，避免疾病的发生。比如结肠癌，APC基因、DCC基因和P53基因的缺陷与肠癌的发生有密切的关系。这几个基因存在缺陷的人具有患上结肠癌的高风险。通过基因检测，在上皮细胞的增生还没有真正演化成结肠癌的时候，就能够发现结肠癌的苗头，及早采本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于基因检测的恒温聚合酶链式反应方法，所述方法包括 A)针对待检测的靶基因DNA序列，围绕其扩增基因片段周围的5个不同区域提供如下5种引物 (a)基于靶基因3’端的外部引物； (b)基于靶基因3’端的外部引物内侧的转折引物； (C)基于靶基因中间部位的激励扩增引物； (d)基于靶基因外部引物内侧的折叠引物；和 (e)基于靶基因5’端的外部引物； B)提供包含A)中所述引物的聚合酶链式反应体系，并将待测DNA样品加入所述反应体系中，其中如果该样品所含为双链DNA，则在将其加入所述反应体系之前，对该样品进行变性； C)在50 70°C的恒温下进行聚合酶链式反应； D)通过将待检测DNA的恒温基因扩增反应数据或图谱与阳性对照比较，获得基因检测结果。2.如权利要求I所述的方法，其特征在于，所述待测DNA样品来自血液、组织或组织切片、培养细胞。3.如权利要求I所述的方法，其特征在于，所述引物是合成的核酸引物或肽核酸合成的引物。4.如权利要求I所述的方法，其特征在于，所述反应体系...

【专利技术属性】
技术研发人员：李立新，胡西陵，杨毅，
申请(专利权)人：李立新，胡西陵，杨毅，
类型：发明
国别省市：