本发明专利技术公开了用于预防流感病毒感染的免疫原性组合物，其中，所述免疫原性组合物包含流感病毒的免疫原例如血细胞凝集素，以及免疫增强剂例如人IgG的Fc片段，和任选地稳定化序列。所述免疫原与稳定化序列相连，所述稳定化序列进而与免疫增强剂相连。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开文本涉及用于预防流感感染的免疫原性组合物。
技术介绍
属于Orthomyxoviridae科的甲型流感病毒能在人、鸟类或驯养的食用动物中导致流感。可基于其表面糖蛋白，血细胞凝集素(HA)和神经氨酸酶(NA)，将所述病毒分为不 同亚型。在16种已知的HA和九种NA中，有三种HA亚型(H1、H2和H3)和两种NA亚型(NI和N2)最常在人中被发现。HlNl和H3N2是导致人季节性流行性感冒(flu)和流感全球流行的主要亚型。2009年的流感流行是猪源的甲型流感病毒HlNl导致的。其引起了对高度致病性的禽流感(HPAI)H5N1病毒流行潜势的日益増加的关注。因此，为预防流感的未来爆发，迫切需要开发针对不同的甲型流感病毒毒株的有效且安全的疫苗。
技术实现思路
本文公开了用于预防流感病毒感染的免疫原性组合物。公开的免疫原性组合物是三聚体蛋白，其包含1)免疫原，例如流感血细胞凝集素序列；2)三聚化或稳定化序列；和3)免疫增强剂序列。这三种序列是连续的，并且作为单个蛋白在哺乳动物表达系统中表达，或者，免疫原和免疫原和免疫增强剂以化学方式相连并被稳定。在一种实施方式中，本文公开了用于诱导针对流感病毒的免疫应答的免疫原性组合物，所述免疫原性组合物包含下述多肽，所述多肽包含免疫原和免疫增强剂。在另ー实施方式中，所述多肽还包含稳定化序列。在其它ー些实施方式中，免疫原是流感病毒的血细胞凝集素序列、流感病毒的神经氨酸酶序列或流感病毒的膜蛋白序列。在另ー实施方式中，免疫原是所述血细胞凝集素序列的片段，其选自HA1、HA2和RBD构成的组。在另ー实施方式中，免疫增强剂选自人IgG、C3d、Onchocerca volvulus ASP-1、clera 韋素和胞壁酸妝构成的组。在另ー实施方式中，稳定化序列是折叠子(foldon)或GCN4。在还ー实施方式中，多肽是融合蛋白。在另ー实施方式中，多肽是在哺乳动物表达系统中产生的。在另ー实施方式中，多肽选自HAl-hFc、HA-hFc、HAl+3-259-hFc、HAl-Fd-hFc、HA-Fd-hFc、HA2-Fd_hFc、HA-RBD-Fd-hFc 和 HAl+3-259-Fd_hFc 构成的组。在另ー实施方式中，免疫原与所述稳定化序列相连，并且其中，所述稳定化序列与免疫增强剂相连于单条多肽中。在还ー实施方式中，免疫原和免疫增强剂通过2，2_联吡啶-5-羧酸(BPY)被化学稳定。在又ー实施方式中，免疫原性组合物还包含佐剂。本文还公开了诱导针对流感病毒的保护性免疫应答的方法，所述方法包括将权利要求I的免疫原性组合物施用给需要其的宿主，并且其中，所述免疫原性组合物在宿主中诱导针对感染性试剂攻击的保护性免疫应答。在另ー实施方式中，免疫原性组合物还包含佐剂。附图说明图I示出了甲型流感H5N1病毒的血细胞凝集素(HA)蛋白[A/Anhui/1/2005 (H5N1)]的结构，还示出了含有HAl片段(氨基酸[aa]+3-322)的重组HAl-hFc和HAl-Fd-hFc蛋白、以及与人IgG Fe (hFc)融合的、包括H5N1病毒HA的aa+3-259的HAl片段的重组HA-3-259-Fd-hFc蛋白(有或没有Fd序列)的构建。图2示出了对表达的HAl-hFc和HAl-FchhFc蛋白的十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)(图2a)和Western杂交印迹(图2b)分析。图3示出了对表达的HAl-hFc和HAl-Fd-hFc蛋白的快速蛋白液相色谱(FPLC)分祈。蛋白的分子量示于每个峰上，还示出了对应于经计算的标准蛋白的结构。图4 示出了 用重组 HAI-hFc、HA-Fd-hFc 和 HA-3-259-Fd_hFc 蛋白对 BALB/c 小鼠免疫的示意图，对诱导的抗体和中和活性的检测，用活H5N1病毒对经疫苗接种小鼠的攻击，用于交叉保护评估。图5示出了在第O天(免疫前)和用重组HAl-hFc和HAl-Fd-hFc蛋白的第一次、第二次和第三次強化之后10天收集的小鼠血清(I 3000稀释)的结合反应活性。图 6 示出了 IgG 抗体(Ab)与 HAl-hFc、HAl-Fd-hFc 和 HA-3-259-Fd_hFc 融合蛋白结合的能力，这是在用HAI-hFc、HAl-Fd-hFc和HA-3-259-Fd-hFc蛋白进行最后一次免疫接种后10天收集的小鼠血清中检测的。图7示出了最后一次免疫接种后10天收集的小鼠血清的平均抗HAl-hFc、抗HA-Fd-hFc 和抗 HA-3-259-Fd_hFc IgG Ab 效价。图8示出了 IgG Ab与没有Fd和Fe的HAl蛋白结合的能力，这是在用HAl-hFc、HAl-Fd-hFc和HA-3-259-Fd-hFc蛋白进行最后一次免疫接种后10天收集的经系列稀释的小鼠血清中检测的。图9 示出了 IgG Ab 与 A/VietNam/1194/2004(VN/1194)_ 失活 H5N1 病毒结合的能力，这是在用HAl-hFc和HAl-Fd-hFc进行最后一次免疫接种后10天收集的经系列稀释的小鼠血清中检测的。图10示出了 IgGl亚型Ab与HAl蛋白结合的能力，这是在用HAl-hFc和HAl-Fd-hFc进行最后一次免疫接种后10天收集的经系列稀释的小鼠血清中检测的。图11示出了 IgG2a亚型Ab与HAl蛋白结合的能力，这是在用HAl-hFc和HAl-Fd-hFc进行最后一次免疫接种后10天收集的经系列稀释的小鼠血清中检测的。图12示出了对经HAl-hFc和经HAl-FchhFc免疫接种的小鼠中IgGl和IgG2a Ab应答的比较。图13示出了经HAl-hFc每次强化免疫接种后的小鼠血清针对表达XJ-HA、QH_HA、 AH-HA和HK-HA的H5N1假病毒的中和Ab效价(NT5tl)，这是通过假病毒中和检验测量的。图14示出了经HAl-Fd-hFc每次强化免疫接种后的小鼠血清针对表达XJ-HA、QH-HA,AH-HA和HK-HA的H5N1假病毒的中和Ab效价(NT5tl)，这是通过假病毒中和检验测量的。 图15示出了经HAl-hFc和HAl-Fd-hFc每次强化免疫接种后的小鼠血清针对表达同源AH-HA的H5N1假病毒的中和Ab效价(NT5tl)，这是通过假病毒中和检验测量的。图16示出了针对H5N1假病毒的异源(HK-HA、1194-HA、QH-HA和XJ-HA)和同源(AH-HA)毒株的HA的中和Ab效价(NT5tl)，这是在用HAl-hFc和HAl-Fd-hFc进行最后一次免疫接种之后10天在小鼠血清中检测的。图17示出了针对H5N1假病毒的异源(HK-HA、1194-HA)和同源(AH-HA)毒株的HA的中和Ab效价(NT5tl)，这是在用HA-3-259-Fd-hFc蛋白进行最后一次免疫接种之后10天在小鼠血清中检测的。图18 示出了针对H5N1 活病毒的异源毒株A/Hong Kong/156/97 (HK/156)、VN/1194和 A/Shenzhen/406H/06 (SZ/406H)的中和 Ab 效价(NT5tl)，这是在用 HAI-hFc 和 HAl-FchhFc进行最后一次免疫接种之后10天在小鼠本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2009.10.09 US 61/250,4421.用于诱导针对流感病毒的免疫应答的免疫原性组合物，所述组合物包含下述多肽，所述多肽包含 免疫原；和 免疫增强剂。2.权利要求I的免疫原性组合物,其中所述多肽还包含稳定化序列。3.权利要求I的免疫原性组合物，其中所述免疫原是所述流感病毒的血细胞凝集素序列。4.权利要求I的免疫原性组合物，其中所述免疫原是所述流感病毒的神经氨酸酶序列。5.权利要求I的免疫原性组合物，其中所述免疫原是所述流感病毒的膜蛋白序列。6.权利要求I的免疫原性组合物，其中所述免疫增强剂选自人IgG的Fe片段、C3d、Onchocerca volvulus ASP-1、clera毒素和胞壁酸妝构成的组。7.权利要求2的免疫原性组合物，其中所述稳定化序列是折叠子或GCN4。8.权利要求I的免疫原性组合物，其中所述多肽是融合蛋白。9.权利要求I的免疫原性组合物，其中所述多肽在哺乳动物表达系统中产生。10.权利要求3的免疫原性组合物，其中所述免疫原是选自HA1...
【专利技术属性】
技术研发人员：姜世勃，杜兰英，
申请(专利权)人：纽约血库公司，
类型：发明
国别省市：
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