一种淋巴细胞分离液的制备方法技术

本发明专利技术提出了一种淋巴细胞分离液的制备方法，包括如下步骤：使用羟乙基淀粉配制质量分数为40％的羟乙基淀粉550料液；使用泛影葡胺配制质量分数为60％的泛影葡胺料液；使用质量分数为40％的羟乙基淀粉550料液和质量分数为60％的泛影葡胺料液制取动物淋巴细胞分离液粗制品；通过过滤动物淋巴细胞分离液粗制品制取动物淋巴细胞分离液成品。本发明专利技术的淋巴细胞分离液的制备方法所用主要原料之一为羟乙基淀粉，替代右旋糖酐，生物安全性高，无细胞毒性，其内毒素含量低，使得分离的淋巴细胞状态好，活力高，除应用于科学研究外还可应用于临床诊断，具有良好市场前景；制备过程中不产生任何废料和污染物，也不产生噪音等，对环境没有影响。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医药
，特别是指
技术介绍
国内的淋巴细胞分离液已有二十多年的历史，主要以葡聚糖(右旋糖酐)和泛影葡胺(Ficoll-Hypaque)为主要原料进行配制，其分离原理是利用各类细胞本身的密度区另IJ，在具有一定密度的分离液中经过离心，使各类细胞分离开来。但由于葡聚糖是由葡萄糖经过菌种发酵而得，因此其内毒素水平较高，会影响淋巴细胞的表面蛋白活性，且分离液中含不通透的离子diatrizoate (泛影葡胺),会影响离子通透膜的Gibbs-Donnan平衡(吉布斯一道南膜平衡)。所以，传统的淋巴细胞分离液对细胞有毒性，分得细胞状态不好，影响细胞活性，不利于所提取细胞的后续培养及临床治疗的应用。
技术实现思路
本专利技术提出，解决了现有技术中淋巴细胞分离液对细胞有毒性，分得细胞状态不好，影响细胞活性，不利于所提取细胞的后续培养及临床治疗的应用的问题。本专利技术的技术方案是这样实现的，包括如下步骤使用羟乙基淀粉配制质量分数为40%的羟乙基淀粉550料液；使用泛影葡胺配制质量分数为60 %的泛影葡胺料液；使用质量分数为40%的羟乙基淀粉550料液和质量分数为60%的泛影葡胺料液制取动物淋巴细胞分离液粗制品；通过过滤动物淋巴细胞分离液粗制品制取动物淋巴细胞分离液成品。进一步地，使用羟乙基淀粉配制质量分数为40%的羟乙基淀粉550料液的具体步骤为称取羟乙基淀粉加热溶解于蒸馏水中，以双蒸水定容，制成质量分数为40%的羟乙基淀粉550料液。优选地，羟乙基淀粉的平均分子量为550万。进一步地，使用泛影葡胺配制质量分数为60%的泛影葡胺料液的具体步骤为称取泛影葡胺溶于双蒸水中，用氢氧化钠溶液调整PH至pH = 8. 0，制成质量分数为60%的泛影匍胺料液。优选地，氢氧化钠溶液的质量分数为10%。进一步地，使用质量分数为40%的羟乙基淀粉550料液和质量分数为60%的泛影葡胺料液制取动物淋巴细胞分离液粗制品的具体步骤为取质量分数为40 %的羟乙基淀粉550料液加入蒸馏水制成质量分数为9 %的羟乙基淀粉550溶液，备用；取质量分数为60 %的泛影葡胺料液，加入蒸馏水制成质量分数为34%的泛影葡胺溶液，备用；将质量分数为34 %的泛影葡胺溶液和质量分数为9 %的羟乙基淀粉550溶液混和均匀并将其降温至20°C ；用质量分数为60 %的泛影葡胺料液调整质量分数为34%的泛影葡胺溶液和质量分数为9%的羟乙基淀粉550溶液的混合液，使其在20°C下比重为I. 065 I. 090g/ml,即得动物淋巴细胞分离液粗制品。进一步地，通过过滤动物淋巴细胞分离液粗制品制取动物淋巴细胞分离液成品的具体步骤为用漏斗、亲水性微孔滤器装置以及隔膜真空泵过滤动物淋巴细胞分离液粗制品，将滤液灌装于棕色玻璃瓶中，高压灭菌后即得动物淋巴细胞分离液成品。 进一步地，用漏斗、亲水性微孔滤器装置以及隔膜真空泵过滤动物淋巴细胞分离液粗制品，将滤液灌装于棕色玻璃瓶中，高压灭菌后即得动物淋巴细胞分离液成品的具体步骤为用G3漏斗、含IOOnm亲水性滤芯的亲水性微孔滤器装置以及隔膜真空泵以(O. 06MPa的负压过滤动物淋巴细胞分离液粗制品，将滤液于百级工作台内灌装于棕色玻璃瓶中，120°C高压灭菌20分钟，即得动物淋巴细胞分离液成品。本专利技术的有益效果为I、本专利技术的淋巴细胞分离液所用的主要原料之一为羟乙基淀粉，替代了右旋糖酐，生物安全性高，无细胞毒性，其内毒素含量低，使得分离的淋巴细胞状态好，活力高，除应用于科学研究外还可广泛应用于临床诊断，具有良好的市场前景。2、本专利技术的淋巴细胞分离液在制备过程中不产生任何废料和污染物，也不产生噪音等，对环境没有影响。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图I为本专利技术的步骤流程图。具体实施例方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。如图I所示，，包括如下步骤I、使用羟乙基淀粉使用羟乙基淀粉配制质量分数为40%的羟乙基淀粉550料液，该步骤具体为称取40g羟乙基淀粉加热溶解于蒸馏水中，以双蒸水定容至100ml，制成质量分数为40 %的羟乙基淀粉550料液。其中，优先选择平均分子量为550万的羟乙基淀粉。2、使用泛影葡胺使用泛影葡胺配制质量分数为60%的泛影葡胺料液，该步骤具体为称取60g泛影葡胺溶于双蒸水中，用氢氧化钠溶液调整pH，用pH计测定pH，将pH调整至pH = 8. 0，制成质量分数为60%的泛影葡胺料液。其中，氢氧化钠溶液的质量分数优先选择为10%。3、使用质量分数为40%的羟乙基淀粉550料液和质量分数为60%的泛影葡胺料液制取动物淋巴细胞分离液粗制品，该步骤具体为3. I、取76. 8ml质量分数为40%的羟乙基淀粉550料液加入261. 96ml蒸馏水制成质量分数为9 %的羟乙基淀粉550溶液，备用；3. 2、取80ml质量分数为60 %的泛影葡胺料液，加入61. 16ml蒸馏水制成质量分数 为34%的泛影葡胺溶液，备用；3. 3、将质量分数为34%的泛影葡胺溶液和质量分数为9%的羟乙基淀粉550溶液混和均匀并将其降温至20°C ；3. 4、用质量分数为60%的泛影葡胺料液调整质量分数为34%的泛影葡胺溶液和质量分数为9%的羟乙基淀粉550溶液的混合液，加入60%泛影葡胺料液过程中使用比重计在20°C下监测比重，使该混合液在20°C下比重为I. 065 I. 090g/ml,即得动物淋巴细胞分离液粗制品。4、通过过滤动物淋巴细胞分离液粗制品制取动物淋巴细胞分离液成品，该步骤具体为用漏斗、亲水性微孔滤器装置以及隔膜真空泵过滤动物淋巴细胞分离液粗制品，将滤液灌装于棕色玻璃瓶中，高压灭菌后即得动物淋巴细胞分离液成品。具体地，用G3漏斗、含IOOnm亲水性滤芯的亲水性微孔滤器装置以及隔膜真空泵以彡O. 06MPa的负压过滤动物淋巴细胞分离液粗制品，将滤液于百级工作台内灌装于250ml规格的棕色玻璃瓶中，每瓶内滤液为200ml，120°C高压灭菌20分钟，即得动物淋巴细胞分离液成品。以上所述仅为本专利技术的较佳实施例而已，并不用以限制本专利技术，凡在本专利技术的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本专利技术的保护范围之内。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种淋巴细胞分离液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤 使用羟乙基淀粉配制质量分数为40%的羟乙基淀粉550料液； 使用泛影葡胺配制质量分数为60%的泛影葡胺料液； 使用质量分数为40%的羟乙基淀粉550料液和质量分数为60%的泛影葡胺料液制取动物淋巴细胞分离液粗制品； 通过过滤动物淋巴细胞分离液粗制品制取动物淋巴细胞分离液成品。2.根据权利要求I所述的一种淋巴细胞分离液的制备方法，其特征在于，使用羟乙基淀粉配制质量分数为40%的羟乙基淀粉550料液的具体步骤为称取羟乙基淀粉加热溶解于蒸馏水中，以双蒸水定容，制成质量分数为40%的羟乙基淀粉550料液。3.根据权利要求2所述的一种淋巴细胞分离液的制备方法，其特征在于，羟乙基淀粉的平均分子量为550万。4.根据权利要求2所述的一种淋巴细胞分离液的制备方法，其特征在于，使用泛影葡胺配制质量分数为60%的泛影葡胺料液的具体步骤为称取泛影葡胺溶于双蒸水中，用氢氧化钠溶液调整pH至pH = 8. 0，制成质量分数为60%的泛影葡胺料液。5.根据权利要求4所述的一种淋巴细胞分离液的制备方法，其特征在于，氢氧化钠溶液的质量分数为10%。6.根据权利要求5所述的一种淋巴细胞分离液的制备方法，其特征在于，使用质量分数为40%的羟乙基淀粉550料液和质量分数为60%的泛影葡胺料液制取动物淋巴细胞分离液粗制品的具体步骤为 取质量分数...

【专利技术属性】
技术研发人员：高旭，
申请(专利权)人：高旭，
类型：发明
国别省市：