一株通过发酵法提高北五味子主要活性成分含量的内生真菌，它涉及一株内生真菌。通过发酵法提高北五味子主要活性成分含量的内生真菌，它为帚状曲霉(Aspergillus?penicillioides)WT4，已在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC?No：M2012043，保藏地址为武汉市武汉大学，保藏日期为2012年2月29日。本发明专利技术中WT4能使北五味子中五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素等主要活性成分显著提高，因此在以获得五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素为目的的原料生产中可以选择北五味子内生真菌WT4发酵北五味子以提高得率，节省药源。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一株内生真菌。
技术介绍
北五味子[Schisandra chinensis (Turcz. ) Baill.],木兰科植物五味子的干燥成熟果实，是既食又药功能性保健食品。 北五味子的活性成分是以五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素等为代表的木脂素类成分，该类成分具有明显的抗癌、抗炎、镇静，抗焦虑，保护肝细胞，抗化学性肝损伤、抗菌等作用，现广泛应用于医药和食品行业。由于北五味子需求量上涨，森林面积逐渐减少以及盲目的采挖，使北五味子资源面临考验，目前北五味子是国家三级重点保护的濒危药用植物。发酵技术可以改变或增强食品的某些活性，保护食品中某些活性成分，节省资源，为食品、药品活性成分的获得提供新方法。关于北五味子发酵的相关研究目前未见报道。
技术实现思路
本专利技术提供了一株通过发酵法提高北五味子主要活性成分含量的内生真菌。本专利技术通过发酵法提高北五味子主要活性成分含量的内生真菌，它为帚状曲霉(Aspergillus penicillioides) WT4，已在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC No :M2012043，保藏地址为武汉市武汉大学，保藏日期为2012年2月29日；它在PDA固体培养基上培养7天后，菌丝质地丝绒状，具大量的分生孢子结构，暗绿色，边缘白色，无渗出液，有轻霉味，菌落反面呈不同程度的微黄到暗绿色，菌株分生孢子头呈疏松的圆柱状，分生孢子梗细长、顶囊烧瓶形，少数顶囊近棒形，分生孢子成熟时球形或近球形。本专利技术中通过发酵法提高北五味子主要活性成分含量的内生真菌，它为帚状曲霉(Aspergillus penicillioides) WT4,依据《真菌分类学》、《真菌鉴定手册》和《半知菌属图解》，可见WT4菌株的菌落特征和孢子形态与曲霉菌特征极为相近。本专利技术中通过发酵法提高北五味子主要活性成分含量的内生真菌，它为帚状曲霉(Aspergillus penicillioides) WT4,其 ITS 序列提交至 NCBI 网页，通过 Blast 搜索与所得到的序列相似性高的序列，并通过MEGA5. 03软件构建系统进化树，WJl菌株的ITS序列与曲霉属菌株的相似性达到了 98%以上，结合形态学观察结果，确定WT4菌株为帚状曲霉(Aspergillus penicillioides)。本专利技术通过发酵法提高北五味子主要活性成分含量的内生真菌，它为帚状曲霉(Aspergillus penicillioides) WT4，已在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC No :M2012043，保藏地址为武汉市武汉大学，保藏日期为2012年2月29日。本专利技术采用北五味子为底物，以北五味子内生真菌WT4发酵北五味子，旨在提高北五味子中4种主要木脂素成分含量，为高效利用北五味子，节省药源、为天然药物的研发和利用提供一条有利的途径，也为保护濒危药用植物提供切实的解决办法。以五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素4种北五味子主要活性成分作对照品，运用HPLC法测定北五味子经内生真菌WT4发酵前后其有效成分的动态变化，最后通过形态学观察和18S rDNA序列分析鉴定其种属。本专利技术中帚状曲霉(Aspergillus penicillioides)WT4,它能使北五味子中五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素等主要活性成分显著提高，因此在以获得五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素为目的的原料生产中可以选择北五味子内生真菌WT4发酵北五味子以提高得率，节省药源。附图说明图I为具体实施方式一中帚状曲霉(Aspergillus penicillioides)WT4的菌落形态图；图2为具体实施方式一中帝状曲霉(Aspergillus penicillioides) WT4的PCR扩 增的电泳图，其中M泳道表示Marker，WJl泳道表示WT4 ；图3为具体实施方式一中帚状曲霉(Aspergillus penicillioides)WT4的系统进化树图；图4为具体实施方式一中混合对照品的HPLC色谱图，其中I表示五味子醇甲，2表不五味子酯甲，3表不五味子甲素和4表不五味子乙素；图5为具体实施方式一中北五味子的HPLC色谱图，其中I表示五味子醇甲，2表示五味子酯甲，3表不五味子甲素和4表不五味子乙素；图6为具体实施方式一中北五味子经WT4发酵后的HPLC色谱图,其中I表不五味子醇甲，2表不五味子酯甲，3表不五味子甲素和4表不五味子乙素。具体实施例方式具体实施方式一本实施方式通过发酵法提高北五味子主要活性成分含量的内生真菌，它为帚状曲霉(Aspergillus penicillioides)WT4,已在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC No :M2012043，保藏地址为武汉市武汉大学，保藏日期为2012年2月29臼。本实施方式中帚状曲霉(Aspergillus penicillioides) WT4在PDA固体培养基上培养7天后，菌丝质地丝绒状，具大量的分生孢子结构，暗绿色，边缘白色，无渗出液，有轻霉味，菌落反面呈不同程度的微黄到暗绿色，菌株分生孢子头呈疏松的圆柱状，分生孢子梗细长、顶囊烧瓶形，少数顶囊近棒形，分生孢子成熟时球形或近球形(如图I所示)。本实施方式中帚状曲霉(Aspergillus penicillioides) WT4,其生长温度为28°C,生长pH值自然。本实施方式中帚状曲霉(Aspergillus penicillioides) WT4,该菌株分离自健康的药用植物北五味子植株的藤茎，采自黑龙江省帽儿山地区，并经黑龙江省中医研究院付克治研究员鉴定为木兰科植物五味子属Schisandra Chinensis (Turcz. )Baill.的植株,样本现存于黑龙江大学生命科学学院生物制药实验室；它按以下步骤进行分离培养取北五味子健康植株的藤茎，用水冲洗干净，取韧皮部，用75 %的酒精浸泡3-5min，无菌水冲洗4次，用无菌刀把藤茎切成0. 5cm的小块，然后将其置于马铃薯液体分离培养基表面，置于28°C恒温培养3-7天，待其切口边缘长出菌落后，挑取真菌尖端菌丝转到新的培养基中纯化，细菌菌落进行倍比稀释纯化培养；另外把最后一次冲洗北五味子的无菌水用无菌的涂布棒涂布在马铃薯固体分离培养基表面上，于28°C恒温培养，以此作为对照组。马铃薯液体分离培养基马铃薯培养基(PDA):每L由200g的马铃薯、20g的蔗糖和余量的水组成，pH自然，121°C高压灭菌30min ;其中马铃薯去皮，切成小块煮沸30min，用6层纱布过滤。马铃薯固体分离培养基马铃薯培养基(PDA):每L由200g的马铃薯、20g的蔗糖，16g的琼脂粉和余量的水组成，pH自然，121°C高压灭菌30min ;其中马铃薯去皮，切成小块煮沸30min，用6层纱布过滤。斜面固体培养基取5mL马铃薯固体培养基装于试管中，121°C高压灭菌30min后，铺成斜面冷却，以备保存菌种。试验用主要仪器设备和试剂见表I ;表I本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一株通过发酵法提高北五味子主要活性成分含量的内生真菌，其特征在于它为帚状曲霉(Aspergillus penicillioides)WT...
【专利技术属性】
技术研发人员：郑春英，刘玉洁，陆欣媛，
申请(专利权)人：黑龙江大学，
类型：发明
国别省市：
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