本申请至少部分涉及向人或动物患者的脊髓施用小干扰RNA(siRNA)的方法，并且还涉及治疗脊髓损伤和其他CNS疾病和疾患的方法。具体地，本申请公开了以有效剂量局部地、直接地和不需要转导载体地递送siRNA化合物和制剂到受损伤的脊髓以促进CNS功能恢复和或异常性疼痛减弱的方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本申请至少部分涉及向人或动物患者的脊髓施用小干扰RNA(SiRNA)的方法，并且还涉及治疗脊髓损伤和神经性疼痛的方法。具体地，本申请公开了预防和治疗神经性疼痛和异常性疼痛的方法和治疗受损伤的脊髓以促进CNS功能恢复的方法。背景siRNA代表有希望的治疗技术，然而在向患者施用siRNA中还存在待克服的障碍。已采用各种技术来将siRNA引入细胞中，包括阳离子脂质介导的转染、病毒递送和核转染。使用阳离子脂质的递送看来是最简单的转染方法，然而其效率通常是低的并限制于特定细胞类型。虽然病毒递送很好地用于一些困难的细胞、细胞系和用于体内递送(Garraway等，2007，J Pharmacol Exp Ther. 322 :982-8)，其具有增加的安全顾虑。未修饰的siRNA单链或双链体在血清中极不稳定，单链的半衰期小于I分钟，而双链体的半衰期为3. 3到5 分钟(Sioud,2005. Curr Drug Targets. 6 :647-53 ；Sioud 和 Iversen, 2005. Curr DrugTargets. 6 :647-53)。然而,siRNA的化学修饰已展现出稳定性显著改善；修饰的siRNA比未修饰的 siRNA 稳定性增加大约 900 倍(Morrissey 等，2005. Nat Biotechnol. 23 :1002-7)。转让给本专利技术申请人的PCT专利公布WO 2008/050329和WO 2009/044392公开了某些稳定的和活性的siRNA化合物，所述专利公布通过引用整体并入本文。由于血脑屏障(BBB)，siRNA向中枢神经系统(CNS)的递送是成问题的，并且最成功的策略是使用鞘内路径。经由微泵向啮齿类动物大脑中脑室内输注高浓度的裸露的siRNA已成功抑制了靶基因表达，然而，在远离输注位点的区域，靶基因表达的敲低显著下降(Thakker 等，2004. Proc Natl Acad Sci U S A. 101 :17270-5)。使用连接至微型渗透泵的腰椎留置插管，在脊髓中鞘内应用高剂量(400 y g/天)siRNA沉默了 ATP-门控的阳离子通道P2X3，并缓解了慢性神经性疼痛(Dorn等，2004. Nucleic Acids Res. 32 :e49)。其他研究在鞘内递送后实现了治疗作用以显著较低的剂量在ALS进展的慢性小鼠模型中使用植入的Alzet泵(Wang等，2008. J Biol Chem. 283 :15845-52)以及在急性疼痛模型中采用预治疗(Christoph 等，2006. Biochem Biophys Res Commun. 350 :238-43 ;Luo 等，2005.Mol Pain. I 29)。Rohl 和 Kerreck 综述了疼痛模型中的各种 RNAi 方法(J. Neurochem. 99 371-380)。Inoue 暗示神经性疼痛中 RhoA 的活化(Inoue 等，2004. Nat Med 10(7) :712-8)。对脊髓的挫伤性损伤产生对组织的初级损害，并启动称为次级损伤的级联事件，次级损伤经数天至数周以几个阶段进展(Beattie等,2000. J Neurotrauma. 17 :915-25)。脊髓内的小胶质细胞在损伤后被快速活化。在大鼠中，活化的巨噬细胞在脊髓损伤后3天 开始积累(Schwab等，2004. Glia. 47 :377-86)。在SCI后的前几天，损伤位点中和周围存在大量细胞死亡，以及神经元的轴突过程从损伤位点死亡。这些过程伴有复杂的分子变化，包括在神经细胞(D' Alessandri 等，1995. Curr. Eye Res. 14 :911-926 ;Dubreuil 等，2003. J Cell Biol. 162 :233-43 ；Erschbamer 等，2005. J Comp Neurol. 484 :224-33 ；Yune等，2007. J Neurosci. 27 :7751-61)和免疫细胞(Fu 等，2007. J Neurosci. 27 :4154-64 ；Pixley 等，2005J Cell Sci. 118 :1873-83 ;Schwab 等，2004) 二者中 RhoA 的上调和活化，这被认为促成了次级损害以及限制轴突再生和功能恢复。细胞穿透性Rho拮抗剂(如BA-210)，其抑制磷酸化的包括RhoA在内的Rho家族蛋白的活性，显示在啮齿类动物中改善脊髓损伤后的恢复(Lord-Fontaine 等，2008. J Neurotrauma. 25 :1309-22)，并正在临床测试中测试以促进轴突再生和功能恢复(Baptiste等,2009. Expert Opin InvestigDrugs. 18 :663-73)。RhoA蛋白水平上调数倍，在脊髓挫伤后 7天在大鼠脊髓中达到其最高水平，提供了用于SCI后治疗干预的窗口(Erschbamer等,2005同上)。然而,发现RhoA的BA-210抑制最多仅至急性治疗后4天而不是一周(Lord-Fontaine等，2008)，此时RhoA表达是稳健的(Erschbamer等,2005)。祀向递送siRNA至CNS的方法和祀细胞中增强的活性将是期望的。疼痛是疾病最常见的症状，并且是患者向医师呈现的最经常的不适。不适当的疼痛管理仍是大的公共健康问题。异常性疼痛/SCI相关的疼痛的目前可用的治疗选择是有·限的，并且因为许多SCI疼痛病症不易于治疗，特别是处于损伤水平(at-level)和损伤水平以下(below-level)神经性疼痛，管理变得主要是针对症状的。因此需要用于治疗异常性疼痛/SCI相关的疼痛的解决方案。专利技术概述本文提供了治疗中枢神经系统疾病、疾患和损伤的方法。本申请公开了在不存在转导载体(transduction vehicle)、递送载体(delivery carrier)或递送系统下向受治疗者中的受损或病态脊髓递送siRNA的方法，并提供了治疗中枢神经系统的疾病、疾患和损伤(包括脊髓损伤、神经变性和神经性疼痛)的方法。在一方面，提供了治疗患有与靶基因的表达有关的CNS疾病、疾患或损伤的受治疗者的方法，包括以有效治疗受治疗者的量局部地向受治疗者的脊髓施用定向至靶基因的双链RNA化合物。在一些实施方案中，实质内施用和/或通过腰椎注射施用双链RNA化合物。在一些实施方案中，实质内施用双链RNA化合物。在优选的实施方案中，通过腰椎注射施用双链RNA化合物。在一些实施方案中，通过在损伤或疾病发作后0至48小时腰椎穿刺向受治疗者施用双链RNA。在一些实施方案中，通过在损伤或疾病发作后0至42小时、0至36小时、0至30小时或0至24小时腰椎穿刺向受治疗者施用双链RNA。在一些实施方案中，受治疗者患有疼痛。在不同的实施方案中，疼痛是神经性疼痛。在特定的实施方案中，提供了治疗或预防受治疗者中的神经性疼痛的方法，包括以有效治疗或预防受治疗者中的神经性疼痛的量向受治疗者施用定向至选自RhoA或TLR4的革巴基因的双链RNA化合物。在优选的实施方案中，双链RNA化合物通过腰椎注射施用本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：埃琳娜·费因斯坦，马丁·格吕梅，
申请(专利权)人：夸克医药公司，新泽西州立拉特格斯大学，
类型：发明
国别省市：
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