一种环介导等温扩增技术快速检测单增李斯特菌的引物组和试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及生物检测试剂，具体涉及一种环介导等温扩增技术快速检测单增李斯特菌的引物组和试剂盒。环介导等温扩增技术快速检测单增李斯特菌的引物组，所述的引物为一套单增李斯特菌特征性引物组，一套引物组由两对引物组成，一对引物为外引物，一对为内引物。本发明专利技术的试剂盒由一套引物、反应液、BstDNA聚合酶、样品预处理液、显色剂和阳性对照液等组成；检测方法包括细菌DNA的提取、环介导等温核酸扩增和显色检测等。使用本试剂盒通过对样品简单的处理便可快速检测样品中的单增李斯特菌，具有灵敏度高、特异性强、操作简单、通过肉眼即可判定结果等优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物检测试剂，具体涉及ー种单增李斯特菌环介导等温扩增技术快速检测用引物、试剂盒和检测方法。技术背景单核细胞增生李斯特菌(Zisieria ァLm)(以下简称“单增李斯特菌”)是ー种重要的人畜共患病致病菌，广泛存在于土壤、动物和水产品等，主要通过奶及奶制品、蔬菜、水产品、肉制品等食物传播。该菌已被列为90年代4大食品致病菌之一，成为许多国家食品卫生的必检项目。传统的单增李斯特菌生化检测方法全过程至少需要7 10 d，检出限较低，费时费力。免疫法比较快，但单克隆抗体制备比较困难，易产生交叉反应，特异性差。而PCR或荧光定量PCR方法快速，特异、灵敏度很高，但需要昂贵的PCR仪。国外曾有少量文献报道利用mRNA模板针对iap基因以RT环介导等温扩增基因技术(loop-mediatedisothermal amplication,简称LAMP)(国际专利公开号WO 00/28082)是2000年Notomi等开发出的ー种核酸扩增新技术，针对待测靶基因序列的6个区域设计ー套两对特异引物，利用链置换DNA聚合酶(Bst DNApolymerase)在65°C左右等温条件下能够本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.ー种环介导等温扩增技术快速检测单增李斯特菌的引物，其特征在于所述的引物为ー套单增李斯特菌特征性引物组，ー套引物组由两对引物组成，一对引物为外引物，ー对为内引物，序列分别为 外引物 I :GGTAACGGACCAACTACA 外引物 2 TCATTTGACCATTACCAACAT内引物 I:TGTACGTGGAAGGGAGATACCTTTTTGATTGCTCTGGTTACACT内引物 2 :TCTGAATCTCAAGCAAAACCTGGTTTTTCGTGAGAAATTCCGCTACC。2.环介导等温扩增技术快速检测单增李斯特菌的试剂盒，其特征在于该试剂盒包括如权利要求I所述的引物组、反应液、Bst DNA聚合酶、样品预处理液和阳性对照液。3.根据权利要求2所述的环介导等温扩增技术快速检测单增李斯特菌的试剂盒，其特征在于所述的引物组由体积比为I :1 4 4的20-30 μ M外引物I、外引物2、内引物I与内引物2组成。4.根据权利要求2所述的环介导等温扩增技术快速检测单增李斯特菌的试剂盒，其特征在于所述的反应液是由体积比为5 :2 :1 :2的lOXThermop...

【专利技术属性】
技术研发人员：张明洲，陈宗伦，方美明，方结红，龚云飞，
申请(专利权)人：中国计量学院，
类型：发明
国别省市：