一种番茄青枯病拮抗菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种番茄青枯病拮抗菌，它的16SrRNA具有SEQIDNo.1所示的基因序列；本发明专利技术分离筛选出的番茄青枯病拮抗菌能够有效地防治番茄青枯病，对减少大量化肥、农药的使用，减轻农业面源污染具有重要的作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及番茄青枯病生防领域，尤其涉及一株番茄青枯病拮抗菌及其应用。
技术介绍
番爺青枯病是由爺青枯拉尔氏菌[Ralatoniasolanacearum (smith) Yabuuchiet al]引起的世界范围内的毁灭性土传病害，热带、亚热带的国家和地区，如南美洲、日本、印度、菲律宾，我国台湾、广东、浙江、福建、江苏、湖北、四川、重庆等都有严重发生。该病可造成植株大面积萎蔫死亡，一般田块发病率为10% 15%，重病田发病率高达80% 98. 5%，导致番茄产量严重下降，造成重大的经济损失。 R. solanacearum是一种土壤习居菌,能够在无寄主情况下的土壤中存活很长时间。R. 主要从根系侵入植株，也可从茎部伤口侵入并直接进入导管系统，在其中大量繁殖并产生代谢物质，阻碍植物体内水分运输，造成植株萎蔫。目前，针对番茄青枯病缺少有效的化学药剂，加之青枯菌对化学农药易产生抗药性，而且大量使用化学农药会造成环境污染和生产成本上升。休耕期撒施石灰可减轻病害发生，但易造成土壤板结。抗病育种工作，由于缺乏理想的抗源材料，进展缓慢。水旱轮作要求轮作年限长，且附近无其它宿主存在方可起到良好效果，因而实施起来较困难。土壤灭菌后形成了土壤生物真空，一旦土壤受到病原菌侵染，会导致病原菌的大爆发而造成更为严重后果。生物防治作物病害具有可利用资源丰富、成本低廉、能够避免环境二次污染，被认为是解决土传病害一条有希望的途径。利用病原菌拮抗微生物进行生物防治是生物防治的一个重要组成部分。
技术实现思路
本专利技术目的在于针对番茄青枯病缺少有效的化学药剂，加之青枯菌对化学农药易产生抗药性的不足，提供一种番茄青枯病拮抗菌及其应用。本专利技术目的通过以下技术方案来实现一种番茄青枯病拮抗菌，它的16S rRNA具有SEQ ID No. I所不的基因序列；该番爺青枯病措抗囷保存在中国专利局指定的保减单位中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保存编号为=CGMCC No. 3332。上述番茄青枯病拮抗菌在防治番茄青枯病方面的应用。本专利技术的有益效果是，本专利技术分离筛选出的番茄青枯病拮抗菌能够有效地防治番茄青枯病，对减少大量化肥、农药的使用，减轻农业面源污染具有重要的作用。本专利技术的番茄青枯病拮抗菌④-37已在中国专利局指定的保藏单位“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”保藏，保藏单位地址为北京市朝阳区大屯路；保藏日期为2009年10月9日，保藏编号为=CGMCC No. 3332 ;分类命名为蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)。附图说明图I为番茄青枯病生防效果图。具体实施例方式从浙江嘉善、丽水、杭州等番茄种植基地采集21个土样，利用牛肉膏蛋白胨培养基进行分离，共分离到细菌420多株；然后进行平板拮抗试验，得到对番茄青枯病茄青枯拉尔氏菌有较好拮抗效果初筛细菌27株；通过盆栽试验，进一步筛得对番茄青枯病茄青枯拉尔氏菌具有相对稳定的拮抗效果复筛细菌4株。该菌株④-37为其中一株细菌。根据菌株的形态特征、培养特征和生理生化特征，参照伯杰氏细菌鉴定手册，对该菌株④-37进行鉴定，初步确认为蜡状芽孢杆菌，该菌株取样来自浙江丽水。保藏菌株的形态、培养、生理、生化等特征 腊状芽孢杆菌④-37 :属腊状芽孢杆菌(feci77w5· Cerew1S);在牛肉膏蛋白胨培养基中生长良好，细胞杆状；在牛肉膏蛋白胨琼脂平板上培养时菌落表面湿润、光滑、边缘整齐且规则、圆形，菌苔厚、不透明、白色。菌株④-37理化试验结果见下表 试验项目结果试验项目结果 萆兰氏染色阳性利用_水化合樹产酸 缩胞形状杆状蔔萄糖+ 鋪胞直径>1μηι -木糖+ 形成芽孢+L-P可拉伯糖+芽孢膨大.甘露醇+芽形-乳It- 接触酶+ 利用葡萄糖产气 - 氧化酶+ 利用柠德酸錳+ 厌氧生长-50 0C生长+ VP试敦+ pH5.7生长+ VP<pH6+ 7%HaCl 生长+ VP>pH7-淀粉水解+ 甲基红试验+ 分解酪素+ 硝酸益还原_+ _胶水解_+ 经测定，菌株④-37的16S rRNA的基因序列如SEQ ID No. I所示。通过以下实施例对本专利技术作更详细说明，但以下实施例仅是说明性的，本专利技术并不受这些实施例的限制。对所涉材料的说明 蛋白胨生化制剂，国产； 牛肉膏生化制剂，国产； Yeast extract (酵母浸膏):生化试剂，国产； Casein hydrolysate (酪蛋白水解物)生化试剂，国产； 琼脂生化试剂，国产；NaCl :分析纯，国产 K2HPO4 :分析纯，国产； 葡萄糖分析纯，国产； MgSO4 7H20:分析纯，国产； 蔗糖分析纯，国产。 实施例I :细菌分离纯化 细菌按以下方法步骤分离纯化 I培养基牛肉膏蛋白胨琼脂培养基牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，琼脂粉15_20g，H2O 1000ml, pH 7· 0—7. 2。121. 3°C灭菌 20 分钟。2试验步骤 2. I培养基制备 配制牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，制备细菌斜面。2. 2 土壤稀释液的制备 (1)称取IOg土壤，加入装有IOOml无菌水带玻璃珠的500ml三角瓶中，振荡15分钟，即 10—1 ； (2)吸取土悬液10ml，加入装有90ml无菌水的500ml三角瓶中，即10_2； (3)从(2)中吸取10ml，加入装有90ml无菌水的500ml三角瓶中，即10_3； (4)从(3)中吸取5ml，加入装有45ml无菌水的250ml三角瓶中，即10_4； (5)从(4)中吸取5ml，加入装有45ml无菌水的250ml三角瓶中，即10_5； (6)从(5)中吸取5ml，加入装有45ml无菌水的250ml三角瓶中，即10_6； 2. 3细菌分离； (7)从(3)(4) (5)中分别吸取O. lml，加入到牛肉膏蛋白胨琼脂培养基平板中进行涂布培养(28-30°C培养2-3天)，各3个重复； (8)选择20-200菌落数的培养皿挑取菌落进行斜面培养(28-30°C培养2_3天)； 2.4多个土样 (9)共21个土样，每个土样重复上述I.2. I I. 2. 2步骤。2. 5结果分离到细菌420多株。实施例2 :分离细菌对番茄青枯病茄青枯拉尔氏菌平板拮抗试验 I.培养基 1.I固体培养基青枯病菌培养基配制MgS04 7Η200· 3g, K2HP042. Og, Yeast extract(酵母浸膏)4. Og, Casein hydrolysate (酪蛋白水解物)8. 0g, Sucrose (鹿糖)10. Og, Agar (琼脂)18g, Distilled water (蒸懼水)1000ml。牛肉膏蛋白胨琼脂培养基配制同实施例I中2. I 1.2液体培养基细菌液体摇瓶培养基牛肉膏蛋白胨培养基不加琼脂即可。番茄青枯病菌液体摇瓶培养基青枯病菌培养基不加琼脂即可。2、试验步骤 2.I培养基制备配制青枯病菌培养基(固体、液体)，制备病原菌茄青枯拉尔氏菌斜面；配制牛肉膏蛋白胨琼脂培养基(固体、液体)，制备细菌斜面。2. 2平板拮抗试验2.2. I菌种活化番茄青枯病菌和细菌进行菌种活化。2.本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种番茄青枯病拮抗菌，其特征在于，它的16S rRNA具有SEQ ID No. I所示的基因序列；该番爺青枯病措抗囷保存在中国专利局指定的保减单位...

【专利技术属性】
技术研发人员：姚燕来，朱凤香，薛智勇，王卫平，洪春来，陈晓旸，吴传珍，
申请(专利权)人：浙江省农业科学院，
类型：发明
国别省市：