一种制备高纯度磷脂酰胆碱的方法技术

本发明专利技术涉及一种制备高纯度磷脂酰胆碱的方法，其特征在于，所述方法包括：醇处理步骤：以粗磷脂为原料，低碳醇和水为混合溶剂，经萃取分离，分离出的醇可溶性产物；硅胶柱层析步骤：对前一步所得产物进行硅胶柱层析，用乙醇梯度洗脱，收集产物溶液干燥步骤：对所得产物溶液进行真空浓缩，冷冻干燥，得到高纯度磷脂酰胆碱。本发明专利技术的方法采用单一洗脱溶剂，使得生产过程无毒，无公害，无三废。分离填料可以循环使用，省时省力，无有害溶剂的进入，原料不局限在某个来源，可以来源于多种植物和动物的磷脂。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及。
技术介绍
磷脂普遍存在于动植物的原生质和生物膜中，对生物膜的生理活性和机体的正常代谢有重要的调整功能，同时它具有良好的乳化性和抗氧化性，普遍应用于食品，医药，化妆品等领域。磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine,简称PC)是其中重要的磷脂。卵磷脂是构成人体细胞膜的主要成分，是保持细胞正常功能的生命基础物质之一，对人体的正常代谢有重要的调节作用。保持心脏和脑血管壁的弹性和渗透性，软化血 管，增加高密度脂蛋白的含量，防止血液凝聚；使神经反应敏锐，提高记忆力，预防健忘和老年痴呆；可预防肝功能疾病和缓解糖尿病；可促进损伤细胞，提高机体免疫力。卵磷脂的缺乏是造成现代文明病的主要原因之一。卵磷脂分子结构中同时具有亲水基和疏水基，这种双极性质使卵磷脂表现出优良的表面活性，属于应用较广泛的磷酸型两性表面活性剂，具有乳化，增稠，稳定，分散，增溶，润湿，润滑等功能，可广泛用于食品，饲料，医药，化妆品，涂料，油墨，纺织，皮革，石油制品及植物保护等工农业生产。高纯度卵磷脂是指PC含量大于90%的卵磷脂产物。由于高纯度卵磷脂纯度高，无异味，乳化能力强，不仅在食品工业中可较大量的添加使用，还可做成保健品，医药品等。尤其在医药上，可用作静脉注射的脂质体，用作活性组分的载体，降低毒性，增加药效。同时高含量的磷脂酰胆碱有预防肝炎和脂肪肝的作用，降低胆固醇，预防心血管疾病的作用。目前制备高纯度的天然卵磷脂的原料主要来源于动物和植物。前者主要是蛋黄和动物组织，后者为一些植物油料，如大豆、菜籽。从蛋黄中提取高纯度卵磷脂的质量较好，但成本高。而植物油料中的磷脂是一种脂肪伴随物，随着油脂的提取而溶出，在油脂精炼的水化工序中作为油脚与油脂分离。这些油脚如不及时处理，极易滋生微生物而造成环境污染。油脚先经过脱水，得到浓缩磷脂，即植物来源的粗磷脂。植物来源的粗磷脂除了含磷脂酰胆碱以外，还含有甘油酯，单甘油酸三酯，二甘油酸酯，甘油酸三酯(这里指油类)，肽类，氨基酸，硬脂酸甘油酯，磷脂酰肌醇酯，磷脂酰乙醇胺，和碳水化合物。一般获得高纯度磷脂酰胆碱是以这样的粗磷脂为起始原料的。一般纯化磷脂的第一步是用丙酮脱油(U.S. Pat.No. 3，268，335)，然后第二步是用乙醇提取(U. S. Pat. No. 2，724，649)，第三步是溶解于乙醇部分的磷脂进行吸附层析，不超过35°C。在应用丙酮方法分离油时，产生了丙酮衍生物，如异丙叉丙酮，双丙酮醇，佛尔酮等其它的物质产生。这些副产物不但气味难闻，而且是有毒的。并且，在用丙酮脱油时产生的过氧化物对人体生理也会造成不好的影响。另外，工业生产丙酮的大量使用，存在安全隐患。在纯化磷脂酰胆碱时，去除溶血磷脂酰胆碱也一直是生产注射级磷脂酰胆碱的难题。溶血磷脂酰胆碱(Iysophosphatidylcholine),是卵磷脂被磷脂酶A水解生成的一种化合物，有强溶血作用，主要是通过破坏细胞膜，引起溶血。注射液中溶血磷脂酰胆碱的存在，引起病人出现溶血的征兆，危及生命。高纯磷脂酰 胆碱制备技术主要有乙酰化法、无机盐沉淀法、超临界流体提取法、膜分离法、薄层色谱法(TCL)、高效液相色谱法(HPLC)、柱色谱法等。无机盐沉淀法和乙酰化法只能获得磷酰胆碱，由于加入了反应试剂，后处理的技术难度加大；超临界流体法中较常用的是超临界C02，它溶油能力较强而溶解磷脂的能力较弱，只适合制备混合磷脂产物而不适合于磷脂的分级分离，且设备费用比较昂贵；膜分离法的设备费用也较高，实现磷脂的单一成分分级分离也存在着一定的困难；薄层色谱法(TCL)和高效液相色谱法(HPLC)均可获得纯度高、质量好的单一磷脂产物，但HPLC法的处理量不大，且设备及维护费用较高，而薄层色谱法不易更换展开剂，后处理较繁琐；这些方法不足以除去对人体有害的溶血磷脂酰胆碱，同时所用原料，一般通过用丙酮去除油脂，才能使磷脂酰胆碱的含量达到90%以上，费时费力，生产的产品中的溶血磷脂酰胆碱和丙酮的副产物得不到有效的控制，难以满足作为注射级磷脂的基本要求。此外，部分制备高纯度磷脂酰胆碱的工艺中，用到有毒试剂，如CN1709895A，用到乙酸乙酯，且硅胶需要活化，操作十分繁琐。
技术实现思路
为了解决现有技术中的问题，本专利技术提供了，该制备方法采用植物浓缩磷脂为原料，醇水为溶剂，解决了工业化生产中连续萃取、连续分离、连续层析分离等关键技术问题，解决了磷脂酰胆碱含量低的难题，能生产磷脂酰胆碱含量90%以上的磷脂，同时解决了磷脂酰胆碱作为注射级磷脂产品中有害杂质含量高的问题。此工艺技术生产磷脂酰胆碱含量90%以上的磷脂产品，且低溶血磷脂酰胆碱，低磷脂酰乙醇胺的磷脂产品。本专利技术设备简单，没有引入有毒试剂，分离效果理想，操作简便，能达到连续作业，便于扩大生产规模。且该法易于扩大化，是制备高纯度磷脂酰胆碱最有发展潜力的方法之一。本专利技术的高纯度磷脂酰胆碱的制备方法包括以下工艺过程醇处理步骤以植物浓缩磷脂为原料，醇和水为混合溶剂，经萃取分离，分离出醇可溶性产物；硅胶柱层析步骤对前一步所得产物进行硅胶柱层析，用醇梯度洗脱，收集产物溶液；干燥步骤对硅胶柱层析所得产物溶液进行真空浓缩，冷冻干燥，得到高纯度卵磷脂产物。本专利技术的高纯度磷脂酰胆碱的制备方法工艺过程中可以进一步加入氧化铝层析处理步骤，该处理步骤放在硅胶柱层析前是用氧化铝柱层析方法吸附醇可溶性产物，用醇和水梯度洗脱，收集产物溶液；然后硅胶柱层析，收集高含量磷脂酰胆碱溶液，进一步进行真空浓缩，冷冻干燥，得到高纯度卵磷脂产物。该处理步骤放在硅胶柱层析后是用氧化铝柱层析方法吸附硅胶柱层析收集的产物溶液，用醇和水梯度洗脱，收集产物溶液；进一步进行真空浓缩，冷冻干燥，得到高纯度卵磷脂产物。根据本专利技术所述的方法，其中，所述磷脂酰胆碱的纯度是90%以上。根据本专利技术所述的方法，其中，所述磷脂酰胆碱的纯度是95%以上。根据本专利技术所述的方法，其中，所述磷脂酰胆碱的纯度是98%以上。根据本专利技术所述的方法，其中，所述梯度洗脱用的醇浓度在40%-100%之间。在本专利技术的一个实施例中，以硅胶为吸附剂，采用60^,85^,95%的乙醇，在提高了磷脂酰胆碱的含量为90. 0 %的同时，除去了油，溶血磷脂酰胆碱(含量为5 % )，磷脂酰乙醇胺(含量为5 % )，使这些杂质含量降低；在本专利技术的另一个实施例中，采用40 %，80 %，100 %的甲醇 洗脱氧化铝柱，配合硅胶柱层析，在提高了磷脂酰胆碱的含量为96. 7%的同时，除去了油，溶血磷脂酰胆碱(含量为0. 1% )，磷脂酰乙醇胺(含量为0. 2% )，使这些杂质含量降低。根据本专利技术所述的方法，其中，所述含有磷脂酰胆碱的原料选自包括大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、菜油磷脂组成的组，如浓缩大豆卵磷脂，粉末大豆磷脂，脱色磷脂，向日葵磷月旨，菜油磷脂，花生磷脂。根据本专利技术所述的方法，其中，所述醇是包含甲醇，乙醇，丙醇，异丙醇，正丁醇，异丁醇的组。根据本专利技术所述的方法，其中，所述醇是甲醇，乙醇和异丙醇组成的组。根据本专利技术所述的方法，其中，所述高纯度磷脂酰胆碱产物中的溶血磷脂含量在3%以下。根据本专利技术所述的方法，其中，所述高纯度磷脂酰胆碱产物中的乙醇胺含量在5 %以下。根据本专利技术所述的方法，其中，所述预处理本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘清华，李艳梅，
申请(专利权)人：北京绿色金可生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：