用于将药物与细胞结合剂结合的连接体通过并入聚乙二醇间隔物而被修饰为亲水性连接体。所述细胞结合剂-药物缀合物在各种癌细胞类型中的效价或效能意外地增加若干倍，所述癌细胞类型包括在细胞表面表达低数量抗原的癌细胞或对治疗有抗性的癌细胞。本发明专利技术还提供了一种用于制备美登木素生物碱的方法，所述美登木素生物碱带有硫醚部分和允许将所述美登木素生物碱在基本上单个步骤中连接至细胞结合剂的反应性基团。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及新的连接体，所述新的连接体以连接体有助于增加药物活性的方式将药物(例如细胞毒剂)连接至细胞结合剂(例如抗体)。具体来讲，本专利技术涉及新型的亲水性连接体的用途，其中此类连接体在多种癌细胞类型中使细胞结合剂-药物缀合物的效价或效能增强若干倍，所述癌细胞类型包括在细胞表面表达低数量抗原的癌细胞或对治疗有抗性的癌症。本专利技术还涉及用于制备美登木素生物碱的方法，所述美登木素生物碱带有硫醚部分和允许将所述美登木素生物碱连接至细胞结合剂的反应性基团。
技术介绍
细胞毒性药物的抗体缀合物正在被开发为靶标特异性治疗剂。针对各种癌细胞表面抗原的抗体已与抑制各种主要细胞靶标的不同细胞毒剂缀合，所述细胞靶标如微管(美登木素生物碱、阿里他汀类(auristatins)、紫杉烷美国专利第5，208，020号；第 5，416，064 号；第 6，333，410 号；第 6，441，163 号；第 6，340，701 号；第 6，372，738 号；第 6，436，931 号；第 6，596，757 号；第 7，276. 497 号)、DNA(加利车霉素、阿霉素、CC-1065 类似物；美国专利第5，475，092号；第5，585，499号；第5，846，545号；第6，534，660号； 第6，756，397号；第6，630，579号)。与这些细胞毒性药物中的一些的抗体缀合物正在临床中积极地研究用于癌症治疗(Richart, A. D.和 Tolcher, A. W. , 2007, Nature Clinical Practice,4,245-255)。抗体-细胞毒剂缀合物通常通过对抗体上的反应性部分(如赖氨酸氨基或半胱氨酸基团(通过还原天然二硫键产生或通过使用分子生物学方法将其它非天然半胱氨酸残基构造到抗体上产生))的初始修饰来制备。因此，首先用异双功能连接体试剂(如前述的那些，示例为SPDB、SMCC和SIAB (美国专利第6，913，758号和美国专利公布第20050169933 号))修饰抗体以并入具有反应性基团(如混合的吡啶基二硫、马来酰亚胺或卤代乙酰胺) 的连接体。在抗体中并入的反应性连接体基团随后与含有反应性部分(如硫羟基)的细胞毒剂缀合。另一种缀合途径是通过含有硫羟反应性基团(如卤代乙酰胺或马来酰亚胺) 的细胞毒剂衍生物与细胞结合剂上的硫羟基的反应。通过还原天然二硫残基(R. Singh等人，Anal. Biochem.，2002，304，147-156)，或还原并入的二硫部分(经由SPDP、琥珀酰亚胺基3-(2-批唳基二硫)丙酸酯)，随后用二硫苏糖醇还原(D. G. Gilliland等人,Proc. Natl. Acad. Sci. USA.，1980，77，4539-4543)，或通过并入其它非天然半胱氨酸残基(J. B. Stimmel 等人，J. Biol. Chem.，2000，275，30445-30450)，将硫羟基团并入细胞结合剂(如抗体)，或通过与2-亚氨基四氢噻吩(R. Jue等人,Biochemistry, 1978,17, 5399-5406)或3-巯基丙亚胺酸甲酯(T. P. King等人，Biochemistry, 1978,17,1499-1506)反应并入硫轻基。为了在癌细胞内递送活性细胞毒剂，具有二硫键或硫醚键的抗体-细胞毒剂缀合物在细胞内(大概在溶酶体中)裂解(H. K. Erickson等人,2006, Cancer Research, 66, 4626-4433)。除了杀灭靶细胞之外，具有可还原二硫键的抗体-细胞毒剂缀合物还杀灭在体外抗原阴性和抗原阳性细胞混合种群中和体内异种移植模型中的邻近的抗原阴性细胞， 这显示靶细胞释放的细胞毒剂提高对具有异源抗原表达的肿瘤中的邻近非抗原表达细胞功效中的作用(Y. V. Kovtun 等人，Cancer Research，2006，66，3214-3221)。虽然抗体-细胞毒性药物缀合物显示体外细胞杀灭活性和体内抗肿瘤活性，但是其效价在许多情况下降低，特别是当在靶癌细胞上的抗原表达低时，或当靶细胞对治疗有抗性时。这在临床情形中是很常见的情况，导致在患者中产生低至中度抗肿瘤活性。试图克服抗性的可能方法是合成带有亲水性或疏脂性功能的新药(参见G. Szokacs等人，Nature Reviews, 5 ;219_235，2006)。然而，这种方法是繁杂的且必须合成若干类似物，并且药物结构的修饰经常引起生物活性的损失。因此需要一种不同的方法。本领域所述的用于制备细胞结合剂和药物经由不可裂解的连接体的细胞毒性缀合物的方法需要两个反应步骤(美国专利5，208，020和美国公布第2005/0169933号)。首先，用与细胞结合剂的反应性基团(如赖氨酸残基上的氨基或半胱氨酸残基上的巯基)反应的双功能交联剂修饰细胞结合剂(如抗体)以形成共价化学键。修饰细胞结合剂之后，纯化产物以从未反应的交联剂分离所需的修饰的细胞结合剂。在第两步骤(称为缀合步骤) 中，将反应性药物衍生物(如含有硫羟的美登木素生物碱)加入修饰的细胞结合剂以与修饰的细胞结合剂反应。这个反应之后，需要再纯化以从最终缀合物除去任何未反应的药物种类和其它副产物。所述多重反应和纯化步骤导致最终缀合物的低产率并且当考虑大规模地实现这些步骤时可能是昂贵和繁杂的。这些方法的其它缺点是当未反应的交联剂保持与未连接药物的细胞结合剂连接时引入的缀合物异质性。未反应的交联剂随后可能进行其它副反应(如水解和分子内或分子间反应)。因此，需要可以在基本上一个反应步骤中经由不可裂解的键共价连接至细胞结合剂(如抗体)的功能化的反应性药物衍生物(如美登木素生物碱)。专利技术概述本专利技术通过设计以连接体有助于增加药物活性的方式将药物连接至细胞结合剂的新的连接体来解决抗性问题。因此，本专利技术改善药物与细胞结合剂连接的方式，以致连接体设计提供对广谱的肿瘤(特别是在低抗原表达或抗药性肿瘤中)有活性的缀合物。本专利技术基于以下新发现当传统的连接体(例如描述于美国专利公布第 20050169933号中的SMCC、SIAB等)通过并入聚乙二醇 m (2)[D-Yp-(-CH2-CH2-O-) J1-Xjm-CB (2，)其中，CB表示细胞结合剂；D表示药物；X表示经由硫醚键、酰胺键、氨基甲酸酯键或醚键与所述细胞结合剂连接的脂族基、芳基或杂环基团；Y表示经由选自由硫醚键、酰胺键、氨基甲酸酯键、醚键、胺键、碳-碳键和腙键组成的组的共价键与所述药物连接的脂族基、芳基或杂环基团；I 是 O 或 I ;P 是 O 或 I ;m是2至15的整数；以及η是I至2000的整数。本专利技术的另一个方面是式(3)化合物或式(3’ )的特定化合物Z-X, _ (-CHg-CH2O-) n_Y_D (3)D-Y-(-CH2-CH2O-) n-Xi_Z (3，)其中Z表示可与细胞结合剂形成酰胺键或硫醚键的反应性官能团；D表示药物；X表示经由硫醚键、酰胺键、氨基甲酸酯键或醚键与所述细胞结合剂连接的脂族基、芳基或杂环基团；Y表示经由二硫键与所述药物连接的脂族基、非芳族杂环基或芳族杂环基团；I是O或I ;以及η是I至14的整数。本专利技术的另一个方面是式(4)本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
【专利技术属性】
技术研发人员：R·辛，S·D·威尔豪姆，R·V·J·查理，
申请(专利权)人：免疫基因公司，
类型：发明
国别省市：
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