本发明专利技术提供一种能比过去更精准地检测肝病的糖链标志物糖蛋白的测定方法。本发明专利技术提供一种能比过去更精准地检测肝病的肝病检查方法。本发明专利技术提供一种用于上述测定方法的糖蛋白定量用试剂。本发明专利技术还提供一种能够根据肝病病情发展区别肝病病情的肝病病情指标糖链标志物糖蛋白。本发明专利技术提供的糖蛋白测定方法是对采自受检者的试样中所含α-1-酸性糖蛋白(AGP)和Mac-2-结合蛋白（M2BP）至少其中之一的糖蛋白进行测定，当糖蛋白为AGP时，测定与选自AOL和MAL的第一凝集素结合的AGP，当糖蛋白为M2BP时，测定与选自WFA、BPL、AAL、RCA120和TJA-II的第二凝集素结合的M2BP。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及以下内容选自a-1-酸性糖蛋白(AGP)和Mac-2-结合蛋白(M2BP)中至少其中之一的糖蛋白测定方法；使用了选自AGP和M2BP中至少ー种糖蛋白的肝病的检查方法；以及能够根据糖链的不同检测出基础肝病(underlying liver)状态，即检测出肝细胞癌和炎症、纤维化等的糖链标记物糖蛋白。
技术介绍
肝癌大致可以分为在肝脏发生的原发性肝癌和转移性肝癌，普遍认为，原发性肝癌的90%都是肝细胞癌。在肝细胞癌患者的基础疾病中，大多是感染C型肝炎病毒或B型肝炎病毒，并从急性病毒性肝炎转为慢性病毒性肝炎、肝硬化，大多数情况下，从患病毒性肝炎起，再经过很长一段时间才会发生癌变。在肝硬化中，由于炎症和再生会反复进行，所以正常肝细胞减少，从而变为由纤维组织构成的器官。比如，仅日本就有300万的C型肝炎患者，在中国和非洲据说有1000多万人。B型和C型肝炎患者从慢性肝炎转为癌症的比率如下轻度慢性肝炎(Fl)的年率为0. 8%，中度慢性肝炎(F2)的年率为0. 9%，而重度慢性肝炎(F3)的年率达到3.5%，肝硬化(F4)转为癌症的概率则上升为年率7% (图1、2)。患肝病时，随着病情的发展，组织学图像会发生变化(图3)，如首先在慢性肝炎中，肝功能开始消失，然后，在肝硬化中出现病态结构，肝脏逐渐纤维化等。在癌症治疗中，癌症的早期发现非常重要，在肝细胞癌中也是同样，早期发现癌症对治疗和术后预后有很大影响。进行了肝切除治疗后的5年存活率在I期为80%，在IV期则不过38%。迄今为止已知的肝癌标记物有甲胎蛋白(AFP)和通过维生素K缺乏或拮抗剂II诱导的蛋白质(PIVKA-II)(专利文件1、2)，但其特异性和灵敏性都不够。因此，现在为了尽早发现肝癌，在检查和诊断中往往使用肝癌标记物、以及超声波检查、计算机断层摄影(CT)、核磁共振成像法(MRI)等图像检查。非专利文件I所记述的内容中做了以下尝试用AAL凝集素測定血清中的岩藻糖基化AGP，检测出肝硬化。然而，从其表2所述结果可以看出，在非专利文件I中的技术中，灵敏性为66%左右，特异性为87%，正确诊断率为77%左右，其肝病检测功能不能令人十分满o非专利文件2中记述有如下实验通过使用RCA凝集素的免疫色谱法，测定健康人、急性肝炎患者、慢性肝炎患者、肝硬化患者和肝细胞癌患者的血清中的缺乏唾液酸基的AGPCasialo AGP)，以验证能否对各种肝病作出阳性判断。然而，从其表2所述结果可以看出，非专利文件2中的技术中，肝硬化的灵敏度为88%左右，但是慢性肝炎患者中的假阳性率达到了 63%，从肝病检测功能上来看不能令人满意。在先技术文献 专利文件专利文件I :特开平10-26622号 专利文件2 :特开平8-184594号。非专利文件 非专利文件I :Ingvar Ryden等，a I-酸性糖蛋白岩藻糖基化在接受肝活检患者中的肝硬化诊断准确性，《临床化学》48:12,2195-2201 (2002) (Diagnostic Accuracy ofa I—Acid Glycoprotein Fcosylation for Liver しirrhosis in Patients UndergoingHepatic Biopsy, Clinical Chemistry 48:12，2195-2201 (2002)) 非专利文件2 :Eun Young Lee等，用于检测肝病患者的血清缺乏唾液酸基的a I-酸性糖蛋白的快速免疫色谱法试纸的进展，《免疫法杂志》，308 (2006) 116-123 (Developmentof a rapid, immunochromatographic strip test for serum asialo a 1-acidglycoprotein in patients with hepatic disease, Journa丄 of Immunological Methods 308(2006) 116-123)。
技术实现思路
专利技术要解决的课题 本专利技术的课题在于提供一种能够比过去更精准地检测肝病的糖链标记物糖蛋白的测定方法。本专利技术的课题在干提供一种能够比过去更精准地检测肝病的肝病检查方法。本专利技术的课题在于提供一种用于上述測定方法的糖蛋白定量用试剂。本专利技术的课题还在于提供一种肝病病情指标糖链标记物糖蛋白，该糖链标记物糖蛋白能够区分开与肝病的进展情况相应的肝病病情。解决课题的手段 选自以下物质中的至少ー种的糖蛋白测定方法，其中上述物质为采自受检者的试样中所含a-I-酸性糖蛋白(AGP)和Mac-2-结合蛋白(M2BP)，在该糖蛋白測定方法中，当糖蛋白为AGP时，測定与第一凝集素结合的AGP，其中所述第一凝集素选自AOL和MAL，当糖蛋白为M2BP时，测定与第二凝集素结合的M2BP，其中所述第二凝集素选自WFA、BPL、AAL、RCA120和 TJAII。专利技术的效果 用本专利技术的測定方法可以简便地測定糖链标记物糖蛋白，其中该糖链标记物糖蛋白能够高可信度地检查肝硬化等肝病。用本专利技术的肝病病情指标糖链标记物糖蛋白所进行的检查中，其正确诊断率比现有的标记物高，且用微量血清即可检查，通过本专利技术的肝病病情指标糖链标记物糖蛋白，不仅能监视肝纤维化的进展情况，把握病情发展，还能够对进行了干扰素等抗病毒疗法后的肝纤维化和炎症的改善进行评估。附图说明 显示的是从感染C型肝炎到患肝细胞癌的时间推移和肝状态的变化； 为由慢性肝炎转为肝细胞癌的比率的示 为肝硬化转为肝细胞癌的比率示 为基础肝组织的变化与患癌的关系 为从感染到患癌的肝结构变化的示 显示的是肝的状态变化与诊断治疗方案的关系；为以凝集素微阵列为基础的生物标记物候选分子的验证实验的步骤流程 是ー张结果图，其显示的是通过抗体铺覆凝集素微阵列对肝病病情指标标记物糖蛋白之一的a I酸性糖蛋白(AGP)进行比较糖链分析的结果； 是ー张结果图，其显示的是通过抗体铺覆凝集素微阵列，对肝病病情指标标记物糖蛋白之一的90K/Mac-2-结合蛋白(M2BP)进行比较糖链分析的结果； 的附图显示的是以下两者之间的相关性肝脏的纤维化进展、以及通过AGP的抗体铺覆凝集素阵列分析获得的凝集素信号强度变化； 显示的是根据肝病病情指标糖链标记物，即AGP的抗体铺覆凝集素微阵列分析而制定的肝硬化检测方案； 是将AGP作为能够监视肝脏的纤维化进展的标记物的干扰素的治疗的效果判断 为在第一快速測定法中使用DSA时的稀释线性示意 为在第一快速測定法中使用MAL时的稀释线性示意 为在第一快速測定法中使用AOL时的稀释线性示意 为在第一快速測定法中，对市场出售的样本使用MAL时的测定结果示意 为在第一快速測定法中，对市场出售的样本使用AOL时的测定结果示意 为在凝集素阵列法中，对市场出售的样本使用MAL时的测定结果示意 为在凝集素阵列法中，对市场出售的样本使用AOL时的测定结果示意 为在第二快速測定法中使用DSA时的稀释线性示意 为在第二快速測定法中使用MAL时的稀释线性示意 为在第二快速測定法中使用AOL时的稀释线性示意 为在第二快速測定法中，对市场出售的样本使用M本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：成松久，池原让，久野敦，曾我部万纪，田中靖人，沟上雅史，伊藤清显，松原俊介，鹤野亲是，高浜洋一，香川孝司，永井慎也，
申请(专利权)人：独立行政法人产业技术综合研究所，公立大学法人名古屋市立大学，独立行政法人国立国际医疗研究中心，希森美康株式会社，
类型：发明
国别省市：
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