一种用于化疗减毒增效的乌骨鸡肽的制备方法及其应用，在于包括以下三个步骤：(1)乌骨鸡可溶性蛋白提取；(2)控制酶解；(3)干燥。本发明专利技术涉及的乌骨鸡肽制备方法首先提取乌骨鸡可溶性蛋白，进而对可溶性蛋白实施酶解。其中可溶性蛋白提取得率显著高于传统方法。本发明专利技术方法制备的乌骨鸡肽氨基酸组成中，甘氨酸质量占氨基酸总质量的23.54±2.27%，谷氨酸质量占氨基酸总质量的14.51±2.14%，脯氨酸质量占氨基酸总质量的12.00±2.52%，丙氨酸质量占氨基酸总质量的8.51±1.88%，精氨酸质量占氨基酸总质量的8.35±2.04%，天冬氨酸质量占氨基酸总质量的7.63±2.21%。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种用于化疗减毒增效的乌骨鸡肽的制备方法及其应用。
技术介绍
全球癌症发病率持续升高，死亡率也逐年攀升。除了癌症本身，放化疗副作用是导致癌症死亡率逐年攀升的重要原因。化疗在杀伤肿瘤细胞的同时，也将正常细胞一同杀灭。故化疗引起的正常细胞损伤已经成为放化综合治疗实施的障碍，甚至会延长治疗周期，影响治疗效果，缩短肿瘤病人的寿命。乌骨鸡是我国特有珍禽，被列为国家级珍贵品种资源。乌骨鸡不仅是一种营养丰富的滋补食品，还是一种特有的药用鸡种，具有食用安全性，被历代医家延用。乌骨鸡肽的制备方法也有报道。如授权公告号为CN 100569794C的《一种乌骨鸡活性肽的制备方法》以乌骨鸡为原料，通过酶解、初滤、精滤、超滤或超滤和纳滤，制得分子量小于6000 Da的乌骨鸡多肽。其制备乌骨鸡多肽的步骤繁琐，能耗大。授权公告号为CN1168394C的《一种乌鸡营养成分的提取工艺》将乌鸡去毛及内脏后，加3 4倍量水煮沸2小时，降温至5(T60 °C，调pH值5. 5^7. 0，加木瓜蛋白酶对乌鸡肉糜酶解，酶解时间为5小时，而后灭酶，去渣，虫蜡去脂，活性炭脱苦，过滤，加防腐剂，得营养液。该方法将乌鸡加水煮沸后，以乌鸡肉糜为酶解底物，底物复杂多样，大大降低了酶解效率。且步骤繁琐，生产周期长，不适合工业化生产。以上传统酶解方法均是对乌骨鸡肉糜实施酶解，得率较低，因此，研究生产流程简单，产物得率高、活性高的适合工业化生产的乌骨鸡肽的制备方法具有重要经济意义。目前，已有文献报道乌骨鸡肽具有某些生理功能，但其在化疗减毒增效方面的作用还未见报道。临床上也未见乌骨鸡肽用于肿瘤化疗辅助治疗的报道。
技术实现思路
针对上述现有情况，本专利技术提供一种用于化疗减毒增效的乌骨鸡肽的制备方法，由此方法得到的乌骨鸡肽，以及该乌骨鸡肽在化疗减毒增效中的应用。本专利技术的技术方案为以乌骨鸡为原料，采用蒸煮的方法提取乌骨鸡可溶性蛋白，对可溶性蛋白实施控制酶解，酶解液浓缩、干燥处理，得乌骨鸡肽。其具体步骤为(1)乌骨鸡可溶性蛋白提取乌骨鸡宰杀，去毛、内脏、头、爪，洗净，用绞肉机制成肉泥。取乌骨鸡肉泥，蒸煮处理。蒸煮后，将可溶性蛋白与剩余固形物分离，除油，得乌骨鸡可溶性蛋白。(2)控制酶解对分离后的可溶性蛋白实施酶解。酶解后升温灭酶，得酶解液。(3)干燥酶解液浓缩、干燥，得乌骨鸡肽。步骤(1，乌骨鸡可溶性蛋白的提取可以是如下两种方法，但不限于此第一种，将乌骨鸡宰杀，去毛、内脏、头、爪，洗净，用绞肉机制成肉泥。取一定量乌骨鸡肉泥，按固液比1:广1:5的比例加水，置于高压锅内，在100 0C ^135 °C温度下，高压20mirTl20 min。分离可溶性蛋白与剩余固形物，除油，可溶性蛋白收集备用。按此方法共高压提取r4次。第二种，将乌骨鸡宰杀，去毛、内脏、头、爪，洗净，用绞肉机制成肉泥。取一定量乌骨鸡肉泥，按固液比1:广1:5的比例加水，于普通锅中，在80 0C 100°C温度下，水煮20mirTl20 min。分离可溶性蛋白与剩余固形物，除油，可溶性蛋白收集备用。按此方法共水煮提取广4次。步骤(I)中，可以采用真空抽滤、板框过滤分离可溶性蛋白与剩余固形物，采用管式离心除油，得可溶性蛋白，但不限于此。 步骤(2)采用复合酶解的方式，具体地采用木瓜蛋白酶、复合蛋白酶、风味蛋白酶两两组合的复合酶解方式。加酶量为可溶性蛋白质量的0.5 %广5 %。，两种酶的质量份数比为10%:90% 90%:10%，酶解温度为40 0C "65 °C，酶解时间为I 8 h。酶解后升温灭酶，得酶解液。步骤(3)干燥可以采用真空干燥或喷雾干燥或冷冻干燥，浓缩可以采用多级闪蒸，但不限于此。由步骤(I)制备乌骨鸡可溶性蛋白，其平均提取率为10. 45%，远远高于传统酶解方法制备乌骨鸡肽8%左右的提取率。对比活性试验证实，本专利技术方法制备的乌骨鸡肽是确定能够起到化疗减毒增效作用的。具体表现为能够有效减轻化疗药物一5-氟尿嘧啶对人成纤维细胞的损伤、抑制多种癌细胞的增殖、协同5-氟尿嘧啶抑制多种癌细胞的增殖。传统酶解方法制得的乌骨鸡肽以及可溶性蛋白提取剩余固形物酶解产物在对比活性试验中没有显示出化疗减毒增效作用。本专利技术方法制备的乌骨鸡肽氨基酸组成中含量较高的前6种氨基酸质量占氨基酸总质量的72. 18%，含量从高到低依次为甘氨酸、谷氨酸、脯氨酸、丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸。传统酶解方法制备的乌骨鸡肽、可溶性蛋白提取剩余固形物酶解产物以及乌骨鸡鲜肉氨基酸组成中含量较高的前6种氨基酸质量分别占氨基酸总质量的59. 82%,60. 00%、58. 30%。本专利技术方法制备的乌骨鸡肽中，甘氨酸谷氨酸脯氨酸丙氨酸精氨酸天冬氨酸为31% 20% 16% 12% 11% 10% ;传统酶解方法制备的乌骨鸡肽中，谷氨酸亮氨酸赖氨酸甘氨酸天冬氨酸丙氨酸为23% :18% :16% 15% 15% 13% ;可溶性蛋白提取剩余固形物酶解产物中，谷氨酸甘氨酸亮氨酸天冬氨酸精氨酸丙氨酸为24% :19% :17% 16% 12% 12% ;乌骨鸡鲜肉中谷氨酸脯氨酸赖氨酸天冬氨酸甘氨酸亮氨酸为24% 18% 16% 15% :14% :13%。本专利技术方法制备的乌骨鸡肽氨基酸组成中含量较高的前6种氨基酸分别占氨基酸总质量的百分比如表I。测定5个不同批次制备的乌骨鸡肽，结果显示甘氨酸、谷氨酸、脯氨酸、丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸质量分别占氨基酸总质量的23. 54±2. 27%，14.51 ±2. 14%, 12. 00 ±2. 52%, 8. 51 ± I. 88%, 8. 35 ±2. 04%, 7. 63 ±2. 21%。表I本专利技术方法制备的乌骨鸡肽氨基酸组成测定结果权利要求1.一种用于化疗减毒增效的乌骨鸡肽的制备方法，包括以下三个步骤(1)乌骨鸡可溶性蛋白提取；(2)控制酶解对分离后的可溶性蛋白进行酶解，酶解后升温灭酶，得酶解液；(3)干燥酶解液浓缩、干燥，得乌骨鸡肽；其特征是步骤(I)中乌骨鸡可溶性蛋白提取的方法为将乌骨鸡宰杀，去毛、内脏、头、爪，洗净，用绞肉机制成肉泥，取一定量乌骨鸡肉泥，按固液比1:广1:5的比例加水，置于高压锅内，在100 0C ^135 °C温度下，高压20mirTl20 min,分离可溶性蛋白与剩余固形物，除油，可溶性蛋白收集备用，按此方法共高压提取广4次。2.根据权利要求I所述的一种用于化疗减毒增效的乌骨鸡肽的制备方法，其特征是步骤(2)控制酶解，采用木瓜蛋白酶、复合蛋白酶、风味蛋白酶两两组合的复合酶解，加酶量为可溶性蛋白质量的0. 5 %0 5 %。，两种酶的质量份数比为10%:90% 90%:10%，酶解温度40V 65 °C，酶解时间I 8 h。3.—种权利要求I所述的一种用于化疗减毒增效的乌骨鸡肽的应用，其特征是乌骨鸡肽用于化疗减毒增效。4.根据权利要求I所述的一种用于化疗减毒增效的乌骨鸡肽的制备方法，其特征是制备乌骨鸡可溶性蛋白还可以为将乌骨鸡宰杀，去毛、内脏、头、爪，洗净，用绞肉机制成肉泥，取一定量乌骨鸡肉泥，按固液比1:广1:5的比例加水，于普通锅中，在80 0C ^lOO °〇温度下，水煮20 mirTl20 min，分离可溶性蛋白与剩余固形物，除油，可溶性蛋白收集备用，按此方本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：田颖刚，王春艳，张丽，谢明勇，
申请(专利权)人：南昌大学，
类型：发明
国别省市：
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