本发明专利技术涉及新型小RNA，mir-499。本发明专利技术也涉及寡核苷酸治疗剂(反义寡核苷酸和/或双链寡核苷酸，例如dsRNA)及其在治疗肌肉和心血管疾患中的用途。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及在肌肉和心血管病症中涉及的新的小RNA(microRNA)、mir-208-2。 本专利技术还涉及寡核苷酸治疗剂(反义寡核苷酸和/或双链寡核苷酸)及其在治疗由 mir-208-2失调导致的肌肉和心血管病症中的用途。
技术介绍
小RNA(miRNA)是一类非编码的RNA基因，其终产物是约22nt的功能性RNA分子。 它们是从内源编码的不完全发夹前体加工而成的单链RNA。它们似乎通过对靶标mRNA的 3’-非翻译区(UTR)碱基配对经由翻译抑制而起作用(Griffith-Jones等人,2006、Nucleic Acids Research,卷 34、D140-D144)。小RNA(miRNA)的生物生成是个复杂、多步骤的过程。由RNA聚合酶II转录的初级miRNA转录物大小范围在几百至几千个核苷酸长度(pri-miRNA)。MiRNA可以追溯为两种基因组来源。一些miRNA位于蛋白质编码基因的内含子区域内。其它的位于非编码RNA 的内含子或外显子之中。有趣的是，pri-miRNA能够编码单个miRNA，也可以含有成簇的多个miRNA。其后,通过核内核糖核酸酶III (RNaseIII)内切核酸酶Drosha将pri-miRNA加工为 70nt发夹(pre-miRNA)。然后通过Exporin5/RanGTP将pre-miRNA从核内运输出来进入细胞质。在细胞质中，第二 RNaselll，Dicer，连同其dsRBD蛋白质配偶体一起切割 pre-miRNA的发夹的茎区域，由此释放 21核苷酸的RNA-双螺旋。miRNA双螺旋的一条链进入抑制靶基因表达的蛋白质复合体，即，RNA-诱导的沉默复合体(RISC)，而另一链被降解。链的选择依赖于该miRNA双螺旋的局部热力学稳定性。其5’末端较不稳定配对的链被载入RISC复合体。载入RISC复合体的miRNA似乎通过碱基配对于靶标mRNA的3’-非翻译区(UTR)经由翻译抑制起作用。Du、T. Zamore>P. D.等人micro-Primer the biogenesis and function of microRNA. Development (2005) 132、4645_4652。目前在miRBase (http:// microrna. sanger. ac. uk)保藏了 462条人miRNA序列，且看来这一目录将达到800。迄今为止，大量miRNA的鉴定表明，它们可能在调节和精细调节生物过程中起到复杂的作用。事实上，已经有几种miRNA牵涉到细胞增殖控制(mir-125b和let_7)、造血B-细胞谱系命运 (mir-181)、B_细胞存活(mir_15a和mir-16-l)、脑模式发育(mir_430)、胰细胞胰岛素分泌 (mir-357)、脂肪细胞发育(mir_375)和肌肉增殖和分化(miR-1和miR-133)。许多miRNA 位于涉及癌症的基因组区。例如，在大多数B-细胞慢性淋巴细胞性白血病中含有mir-16-l 和 mir-15 的族缺失或下调(B-CLL ;Calin、G.A.,等人。MicroRNA-cancer connection The beginning of a new tale. Cancer Res. (2006)66、7390_7394)。对于可能由失调的microRNA引起的疾病或病症，一直存在着尚未满足的对其进行有效治疗的需要。本专利技术提供满足这一需要并赋予其它益处的化合物。本专利技术的化合物是能够特异性靶向和治疗失调的小RNA的核酸。一类是反义DNA或RNA ;另一类是双链 RNA(dsRNA)，其也包括称为短干扰RNA(siRNA)的类型。siRNA是新型的治疗剂，其已经显示可以以一种称为RNA干扰(RNAi)的高度保守的调节机制阻断基因表达。W099/32619(Fire 等人)公开了使用长度至少为25个核苷酸的dsRNA在秀丽隐杆线虫(C.elegans)中抑制基因表达。已经表明，siRNA可以在其它生物体中降解靶标RNA，包括植物(见，例如， WO 99/53050, Waterhouse 等人；和 WO 99/61631, Heifetz 等人)，果妮(Drosophila)(见， 例如，Yang, D.等人，Curr. Biol. (2000) 10 :1191_1200)，和哺乳动物(见 WO 00/44895、 LimmerjPDE 101 00 586. 5,Kreutzer等人)。这一天然机制现在已经成为开发用于治疗由异常或不需要的基因调节引起的病症的新型治疗剂的焦点。尽管在RNAi领域的显著进展，仍然需要各种类型的、能够治疗由新的分子病理学，例如失调的小RNA引起的疾病的药剂。专利技术概述本专利技术人已经鉴定到满足以上需要的新的miRNA,mir-208-2。因此,本专利技术涉及少于500个核苷酸的分尚的核酸分子,其特征在于所述分尚的核酸分子包含mir-208-2 (SEQ ID NO 7) ο在一个实施方案中，例如，对于靶向pri-miRNA，包含mir-208-2 (SEQ ID NO:7)的该分离的核酸分子长度少于200个核苷酸。在另一实施方案中，例如，对于革巴向 pre-miRNA，包含mir-208-2 (SEQ ID NO 7)的该分离的核酸分子长度少于80个核苷酸。本专利技术的特定实施方案是选自由SEQ ID NO USEQ ID NO :2、SEQ IDNO :3和SEQ ID N0:4组成的组，或由SEQ ID NO 7组成的组的分离的核酸分子。本领域技术人员将立即意识到，本专利技术的范围也包括由少于500个核苷酸的核酸序列组成的分离的核酸分子，所述核酸序列与上述之一互补。例如，由SEQ ID NO :8组成的分离的核酸。本专利技术的另一实施方案是长度在8和50个核苷酸之间的分离的核酸分子，所述分子能够在生理条件下，例如，在细胞内(细胞质或核)，或在模拟这类条件的条件下，杂交于上述分离的核酸分子，由此抑制mir-208-2 (SEQ ID NO 7)的功能，例如mir-208-2对其靶标的结合。这类分子的具体的实例是选自由SEQ ID N0:10至SEQ ID NO :77组成的组的分离的核酸分子。对于本领域技术人员而言，显而易见的是上述分离的核酸分子能够带有一个或多个化学修饰，例如，选自aW帽子、bW帽子、c)修饰的核苷间键，或d)修饰的糖或碱基部分。包含上述核酸和至少一个载体增殖序列的核酸载体也是本专利技术的实施方案。本专利技术还涉及包含上述核酸和至少一个载体增殖序列的核酸载体。本专利技术的分离的核酸分子，或本专利技术的核酸载体可以在例如基于液体或聚合物的治疗递送体系中做为药物使用。本专利技术的这类药物可以在患有肌肉病症的受试者中用于治疗肌肉病症。这类肌肉病症的一个具体的实施方案是心血管病症。因此，本专利技术的药物用于在受试者中治疗心血管病症，或用于制备治疗肌肉病症或心血管病症的药物。本专利技术还包括用于诊断心血管病症或确定其治疗策略的试剂盒。典型的，所述试剂盒包含核酸试剂，该核酸试剂含有RNA、DNA、混合的RNA或DNA形式的本专利技术核酸分子， 和任选地任何化学修饰。根据本专利技术的核酸分子也本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
...
【专利技术属性】
技术研发人员：I·伯文克，J·哈尔，J·魏勒，C·施内尔，M·米勒，M·申克布劳恩，F·塞卢卡，
申请(专利权)人：诺瓦提斯公司，
类型：发明
国别省市：
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