一种T细胞受体(TCR)，其具有结合gp?100YLEPGPVTA肽-HLA-A2复合物的特性并包含TCR?α可变域和/或TCR?β可变域，其特征在于：(i)相对于具有胞外α和β链序列SEQ?ID?No：2和3的TCR，所述TCR在SEQ?ID?No：2所示其α链可变域氨基酸1到109和/或在SEQ?ID?No：3所示其β链可变域氨基酸1到112发生突变；和(ii)所述α可变域与SEQ?ID?No：2的氨基酸序列1到109有至少90％序列相同性，和/或所述β可变域与SEQ?ID?No：3的氨基酸序列1到112有至少90％序列相同性；和(iii)所述TCR对YLEPGPVTA-HLA-A2复合物的结合亲和力和/或结合半衰期是参比TCR的至少两倍，所述参比TCR具有胞外α链序列SEQ?ID?No：45和胞外β链序列SEQ?ID?No：46。还描述了此类TCR在过继性治疗中的应用，和此类TCR与治疗剂的融合体。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】T细胞受体本专利技术涉及结合YLEPGPVTA肽(衍生自gplOO蛋白)的T细胞受体(TCR)，所述肽以肽-HLA-A2复合物呈递，相对于天然gplOO TCRa和/或β可变域，所述TCR发生突变并且对所述复合物的结合亲和力和/或结合半衰期至少是参比gplOO TCR的两倍。
技术介绍
YLEPGPVTA (SEQ ID No 1)肽对应于人糖蛋白100(gpl00)的氨基酸残基号 280-288. GplOO在黑色素瘤癌细胞上广泛而显著地过量表达。例如，一项研究(Trefzer 等.，(2006)Melanoma Res. 16(2) :137-45)发现观位黑色素瘤患者的192例黑色素瘤转移灶中有82%表达gplOO。几项研究报道了黑色素瘤组织中gplOO表达水平较高(Hofbauer 等.，(2004)J Immunother. 27 (1) :73-8, Barrow 等.，(2006)Clin Cancer Res. 12 764-71)。YLEPGPVTA (SEQ ID No :1)肽由 gpl00+/HLA-A2 癌细胞上的 I 类 HLA 分子呈递。 (Salgaller 等·，(1996)Cancer Res 56 :4749-4757)。因此，YLEPGPVTA HLA-A2复合物提供本专利技术TCR能靶向的癌症标记物。例如，本专利技术TCR可用于将细胞毒性剂递送至癌细胞的目的，或可转化入T-细胞，从而使得它们能破坏呈递HLA复合物的肿瘤细胞，以便在称为过继性治疗的治疗过程中给予患者。然而，为前一目的，如果TCR具有较高的亲和力和/或较慢的解离速率，从而该TCR能长期驻留在所靶向的肿瘤细胞上，则是理想的。为后一目的，如果TCR对肽-HLA复合物相比于具有该复合物特异性的天然TCR具有较高的亲和力和/或较低的解离速率，但不如前一目的的亲和力那样高，则是理想的。亲和力的急剧增加与TCR基因-修饰的CD8T细胞中抗原特异性丧失相关，从而能导致这些TCR-转染⑶8T细胞的非特异性激活，因此中等亲和力TCR是过继性治疗所优选的(参见 Zhao 等·，(2007) J Immunol. 179 :5845-54 ；Robbins 等·，(2008) J Immunol. 180 :6116-31 ；还参见公布的WO 2008/038002)。本专利技术提供此类TCR。采用国际免疫遗传学(IMGT) TCR命名法描述TCR，将其与TCR序列的IMGT公开数据库相关联。天然α-β异源二聚TCR具有α链和β链。广义上，各链包含可变区、连接区和恒定区，β链通常还在可变区和连接区之间含有短的多变区，但该多变区常视作连接区的一部分。各可变区包含嵌合在框架序列中的3个CDR(互补决定区)，其中一个是称为 ⑶R3的超变区。根据框架、⑶Rl和⑶R2序列以及部分确定的⑶R3序列，α链可变(Va ) 区可分成几类，β链可变(νβ)区可分成几类。在IMGT命名法中，通过唯一的TRAV编号指代Va类型。因此，“TRAV17”限定了具有独特框架及⑶Rl和⑶R2序列和⑶R3序列的 TCR Va区，所述⑶R3序列部分由TCR之间保守性的氨基酸序列确定，但其还包含TCR之间不同的氨基酸序列。“TRBV19”以相同方式限定了具有独特框架及⑶Rl和⑶R2序列的TCR V β区，但仅包含部分确定的⑶R3序列。通过独特的IMGT TRAJ和TRBJ命名法类似地确定TCR的连接区，通过IMGT TRAC 和TRBC命名法确定恒定区。IMGT命名法通过缩写TRBD指代β链多变区，如上所述，连锁的TRBD/TRBJ区常一起视作连接区。a i3TCR的α和β链常视作各自具有两个“结构域”，即，可变域和恒定域。可变域由连锁的可变区和连接区构成。因此，在本申请的说明书和权利要求书中，术语“TCR α可变域”指连锁的TRAV和TRAJ区，术语TCR α恒定域指胞外TRAC区或C-末端截短的 TRAC序列。类似地，术语“TCR β可变域”指连锁的TRBV和TRBD/TRBJ区，术语TCR β恒定域指胞外TRBC区或C-末端截短的TRBC序列。TCR领域的工作人员广为知晓并可得到IMGT命名法确定的独特序列。例如，可在 IMGT公开数据库中找到。“《Τ细胞受体手册(Τ cell receptor Factsbook)))", (2001)， LeFranc 和 LeFranc，学术出版社(Academic Press), ISBN 0-12-441352-8 还公开了 IMGT 命名法确定的序列，但由于其公布日期和随后的时间滞后，有时需要参考IMGT数据库验证其中的信息。我们证实了天然gp 100 TCR克隆具有以下α链和β链V、J和C基因应用α 链-TRAV17/TRAJ29/TRAC (天然 gplOO TCR α 链的胞外序列见 SEQ ID No :2)。β 链-TRBV19*01/TRBD1/TRBJ2-7*01/TRBC2(天然 gplOO TCR β 链的胞外序列见SEQ ID No 3)。(注意TRBV19序列具有3个等位基因变体，在IMGT命名法中分别称为 TRBV19*01、*02和*03，上述天然gplOOTCR克隆具有*01变异。同样，TRBJ2-7序列具有两个已知的变异，上述TCR克隆中存在的是*01序列。还应注意，缺乏”*”限定符表示相关序列仅已知一种等位基因。)术语“野生型TCR”、“天然TCR”、“野生型gplOO TCR”和“天然gplOOTCR”在文本同义使用，指代具有胞外α和β链SEQ ID No 2和3的该天然产生的TCR。专利技术详述本专利技术提供具有结合YLEPGPVTA(SEQ ID No 1) HLA-A2复合物特性的包含TCR α 可变域和/或TCR β可变域的T细胞受体(TCR)，其特征在于所述TCR (i)相对于具有胞外 α和β链序列SEQ ID No 2和3的天然gplOOTCR，在其α链可变域(SEQ ID No 2的氨基酸1-109)和/或其β链可变域(SEQ ID No 3的氨基酸1-112)中发生突变；和(ii)对 YLEPGPVTA-HLA-A2复合物的结合亲和力和/或结合半衰期是参比gplOO TCR的至少两倍， 所述参比gplOO TCR具有胞外α链序列SEQ ID No :45和胞外β链序列SEQ ID No :46。注意，SEQ ID No 45是天然α链胞外序列ID No :2，除了 C157取代了 Τ157(即， TRAC的Τ48)和Κ113取代了 Ν113。类似地，SEQ ID No 46是天然β链胞外序列ID No :3， 除了 C169 取代了 S169(即，TRBC2 的 S57)，A187 取代了 C187，D201 取代了 N201。相比于天然α和β链胞外序列，这些半胱氨酸取代能形成稳定重折叠的可溶性TCR的链间二硫键， 艮口，通过重折叠胞外α和β链形成的TCR。利用稳定的二硫键连接的可溶性TCR作为参比 TCR能更方便地评估结合亲和力和结合半衰期。与天然α和β链SEQ ID No :2和3相比， α链SEQ ID Νο:45和β链SEQ ID No :46中的其它突本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：B·K·雅各布森，N·哈伍德，N·R·利迪，
申请(专利权)人：英美偌科有限公司，
类型：发明
国别省市：
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