本发明专利技术公开一种抗口蹄疫病毒复制与感染的重组腺病毒及其制备与应用。本发明专利技术通过将siRNA-3D的转录模板、siRNA-L的转录模板、siRNA-2B的转录模板与siRNA-VP1的转录模板分别与U6启动子连接，克隆入载体pAdeno-X，得到能分别转录、串联结构的质粒，再将该质粒线性化后通过包装细胞包装，得到重组腺病毒rAdeno-3D-L-2B-VP1。该重组腺病毒rAdeno-3D-L-2B-VP1的防治效果优于重组腺病毒rAdeno-2B-VP1应用的效果。可见，本发明专利技术提供的重组质粒能有效抑制口蹄疫病毒复制和抗口蹄疫病感染。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于口蹄疫防治
，特别涉及一种抗口蹄疫病毒复制与感染的重组腺病毒及制备与应用。
技术介绍
口蹄疫(Foot-and-mouth disease, FMD)是由口蹄疫病毒 (Foot-and-mouthdisease virus, FMDV)引起偶蹄类动物的一种急性、热性、高度接触性传染病。该病感染率高，感染后发病率最高可达100%，易感动物多达70余种，其中重要的经济畜种如猪、牛、羊等均易感。鉴于FMD不仅降低动物生产性能，造成巨大的直接经济损失， 而且还影响动物及动物产品的国际贸易，因此所造成的间接损失更大，同时还会影响一个国家的国际形象，故素有“政治经济病”之称。各国学者对FMDV进行了广泛而又深入的研究。FMDV属小RNA病毒科 (Picornaviridae) 口蹄疫病毒属(Aphthovirus)成员。该病毒有7个血清型,分别为A型、 O型、C型、Asia I型、SAT I型、SAT II型和SAT III型，且血清型间无血清交叉反应和交叉免疫现象。各血清型又根据抗原亲缘关系分为不同的亚型，其亚型间抗原也有很大的差巳目前，FMD是严重威胁畜牧业发展的重要传染病，发达国家主要采取扑杀为主的防控措施，发展中国家主要采取疫苗接种和扑杀相结合的方法。但是疫苗接种后需要至少七天的时间才能产生保护作用，同时由于FMDV血清型多，各血清型之间几乎没有交叉保护性，所以现在应用的单血清型疫苗难以达到对不同血清型和亚型的变异毒株产生保护作用。RNA干扰(RNAinterference, RNAi)现象的发现为疾病防控开启了希望之门。RNA 干扰(RNA interference, RNAi)是由功能性双链 RNA (double-strandedRNA, dsRNA)引发的序列特异性转录后同源靶基因沉默现象，是近几年迅速发展起来的一项用于抑制病毒复制的新技术。科研人员将RNAi技术应用于多种病毒性疾病的治疗研究，如艾滋病病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、禽流感病毒等；RNAi技术也为抗FMDV 感染方面的研究提供了新的思路。
技术实现思路
本专利技术的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种抗口蹄疫病毒复制与感染的重组腺病毒。本专利技术的另一目的在于提供所述抗口蹄疫病毒复制与感染的重组腺病毒的制备方法。本专利技术的再一目的在于提供所述抗口蹄疫病毒复制与感染的重组腺病毒的应用。本专利技术的目的通过下述技术方案实现一种抗口蹄疫病毒复制与感染的重组腺病毒，为腺病毒重组质粒pAdeno-3D-L-2B-VPl线性化后，经过包装细胞包装得到；所述的腺病毒重组质粒pAdeno-3D-L-2B-VPl的载体为pAdeno_X，重组基因片段为四个串联的、能分别独立转录的基因片段；所述的四个串联的、能分别独立转录的片段为U6启动子与SiRNA-3D的转录模板融合基因片段、U6启动子与SiRNA-L的转录模板融合基因片段、U6启动子与siRNA_2B的转录模板融合基因片段和U6启动子与SiRNA-VPl的转录模板融合基因片段；所述的重组基因片段优选为U6启动子与siRNA_3D的转录模板融合基因片段、U6 启动子与SiRNA-L的转录模板融合基因片段、U6启动子与siRNA-2B的转录模板融合基因片段和U6启动子与SiRNA-VPl的转录模板融合基因片段依次串联得到；siRNA-3D的转录模板的核苷酸序列如下所示正义链为(5，-3，)GTTGATCTCCGTGGCAGGAttcaagaga atcctgccacggagatcaac反义链为(5，-3，)GTTGATCTCCGTGGCAGGATtctcttgaa TCCTGCCACGGAGATCAACSiRNA-L的转录模板的核苷酸序列如下所示正义链为(5，-3，)ACACCGGAATCGGCACCGCttcaagaga GCGGTGCCGATTCCGGTGT反义链为(5，-3，)ACACCGGAATCGGCACCGCtctcttgaa GCGGTGCCGATTCCGGTGTsiRNA-2B的转录模板的核苷酸序列如下所示正义链为(5，-3，)CCAGATGCAGGAAGACATG ttcaagaga CATGTCTTCCTGCATCTGG C；反义链为(5，-3，)GCCAGATGCAGGAAGACATGtctcttgaa CATGTCTTCCTGCATCTGG ；siRNA-VPl的转录模板的核苷酸序列如下所示正义链为(5，-3，)GAGTCTGCGGACCCCGTGACT ttcaagaga AGTCACGGGGTCCGCAGACTC C 反义链为(5，-3，)GGAGTCTGCGGACCCCGTGACT tctcttgaa AGTCACGGGGTCCGCAGACTC ；以上序列的小写部分为茎环结构，粗体部分和斜体部分互补，以以上序列为模板， 转录得到的siRNA为具有loop结构的dsRNA ；所述的抗口蹄疫病毒复制与感染的重组腺病毒的制备方法，优选包含以下步骤(I)将如下所示的siRNA-3D的转录模板、siRNA-L的转录模板、siRNA_2B的转录模板和siRNA-VPl的转录模板分别克隆入PSIREN-shuttle穿梭载体，位于U6启动子的下游，得到重组质粒 pShuttle_3D、pShuttle-L、pShuttle_2B 和 pShuttle-VPl ；siRNA-3D的转录模板的核苷酸序列如下所示正义链为(5，-3，)6(mmTTGATCTCCGTGGCAGGA^rn^TCCTGCCACGGAGATCAA rcmTmoM}反义链为(5，-3，)AATTCTCTAGAAAAAAGTTGATCTCCGTGGCAGGATtctcttgaa TCCTGCCAC GGAGATCAAC CGSiRNA-L的转录模板的核苷酸序列如下所示正义链为(5，-3，)omACACCGGAATCGGCACCGC^mGCGGTGCCGATTCCGGTGTCTTTTTTTCTAGAG反义链为(5，-3，)AATTCTCTAGAAAAAAAGACACCGGAATCGGCACCGCtctcttgaa GCGGTGC CGATTCCGGTGT CGsiRNA-VPl的转录模板的核苷酸序列如下所示正义链为(5，-3，)(MD3GAGTCTGCGGACCCCGTGACTttoTO^GrC^CGGGGrCCGC^ GArTrmmnm-.反义链为(5，-3，)AATTCTCTAGAAAAAAAGGAGTCTGCGGACCCCGTGACT tctcttgaaAGTCAC GGGGTCCGCAGACTC CGsiRNA-2B的转录模板的核苷酸序列如下所示正义链为(5，-3，)OWCCAGATGCAGGAAGACATGt^mmCATGTCTTCCTGCATCTGG cmjmmm·.反义链为(5，-3，)AATTCTCTAGAAAAAAAGCCAGATGCAGGAAGACATG tctcttgaaCATGTCTT CCTGCATCTGG CG正义链寡核苷酸的5’端突出部分是BamHI酶切位点粘性末端，反义链寡核苷酸的 5’端突出部分是EcoRI酶切位点粘性末端，加粗部分为s本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈金顶，李银光，赵明秋，徐艳芳，刘文俊，代曼曼，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：
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