本发明专利技术属于水产养殖技术领域，具体涉及一种适用于介入式虾类卵巢催熟药物及其制备方法与应用，其特征包括提取白芨多糖作为载体，制备虾类血淋巴液特征的白芨多糖溶胶，配制催熟用介入药剂三步骤。试验表明，同等养殖条件下，对于卵黄发生前期的克氏原螯虾，应用本发明专利技术的药物45天内抱卵率不低于切除眼柄组。处理一周内死亡率趋近于零。相对于同等条件下切除双侧眼柄的一周内死亡率71.67％，及切除单侧眼柄组的一周内死亡率57.5％。本发明专利技术药物处理卵黄发生期克氏原螯虾45天后抱卵率为84.82％，一周内死亡率仅为1.67％，稳定且显著降低死亡率，P＜0.01，并促进卵巢同步发育成熟。本发明专利技术原材料来源稳定，方法简单易行，具有作为移除眼柄催熟虾类卵巢方法的替代方法应用的前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于水产养殖
，具体涉及一种一种适用于介入式虾类卵巢催熟的药物及其制备方法与应用。利用本专利技术的介入药剂在某个时段解除眼柄对卵巢发育过程的神经内分泌抑制作用，达到促进虾类卵巢更好发育和人工催熟的目的。
技术介绍
生产实践中普遍采取用于诱导经济甲壳动物卵巢发育和性成熟的方法是移除眼柄及其衍生技术。这些技术包括(1)摘除眼柄(2)烧灼眼柄；(3)结扎或箍缩眼柄基部 (T. subramoniam, 1999)。移除眼柄一方面具有显著的催熟效果，另一方面也无法避免以下一些负面的影响(1)移除眼柄(即使通过结扎或箍缩眼柄基部)后亲本有很高的死亡率、 侥幸存活并产卵的个体也会产生永久的伤害，有些珍贵的亲本资源无法重复利用(2)去除眼柄后，性腺持续发育，产出的卵和孵出的子代的质量明显下降(Laufer等1999)。所以， 寻求一种低死亡率的方法促进性腺的健康成熟和产卵成为一种客观需求，甲壳动物繁殖的神经内分泌调控机制一直都是研究热点(Fingerman 1995 ；Subramoniam 1999 ；Nagaraju 2007)。MO是螯虾卵巢发育和产卵中发挥重要的内分泌器官，分泌一种倍半萜类激素 MF (Nagaraju2007)。MO合成MF的活动与促进卵黄发生密切相关(赵维信等，2001)。MO合成MF接受眼柄内神经分泌因子的调节。目前，已经从眼柄中分离鉴定出了培养MO实验中， 对MO具有抑制作用的两种CHH家族神经肽MOIH-I MOIH-II。DA和5-HT也被越来越多的证据证明在繁殖中发挥重要而肯定的作用 (Richardson 等，1991 ；KuIkarni 等，1992 ；Sarojini 等 1995 ；Vaca 等，2000 ；蔡生力等， 2000 ；叶海辉等，2003 ；崔青曼等.2005 ；叶海辉等.2006 ；Tinikul 等· 2008 ；Santhoshi 等.2009)。其中，5-HT对卵巢的发育和产卵具有促进作用，DA对卵巢的发育和5-HT的功能有抑制作用。其中，眼柄是最重要的DA产生与分泌部位。介入法是一种前沿生理功能干扰的医学方法。本专利技术通过采用特殊的介入的药物部分封闭剂阻断眼柄内XO-SG分泌产物MOIH输出，并同时缓释DOM解除DA的抑制功能达到到促进虾类卵巢更好发育和人工催熟的目的。这种处理方法易于实施，处理后的亲虾成活率显著高于移除眼柄，具有替代移除眼柄的应用前景。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的缺陷，利用中药白芨的提取物的促血凝和能够被生物体缓慢吸收的特性，作为不易扩散的封闭剂和缓释剂，在一定时段内干扰眼柄内 XO-SG分泌产物大颚器抑制激素(MOIH)输出，同时缓释多潘立酮(DOM)解除多巴胺(DA)的抑制功能，达到到促进虾类卵巢更好发育成熟熟，并获取极高的成活率的目的。实现本专利技术的技术方案如下一种适用于介入式虾类卵巢催熟的药物，其包括如下步骤(1)白芨多糖提取将干燥的白芨去皮，切成1. 2mm小块，按体积/质量比加入20 倍的三蒸水，于4°C下浸泡36小时，再置于70°C水浴中煎煮4-8h，用Imm滤网过滤，滤液置于4°C下静置，滤渣按体积/质量比加入5倍体积三蒸水置于70°C中水浴2h，重复煎煮3 次，用Imm滤网过滤，合并滤液；将上述滤液以超声波震荡30min，然后6000g离心20min，收集上清液，并检查上清液是否能通过30G注射器针头；向所得的上清液中加入10倍体积的无水乙醇，搅拌至全部生成细腻的白色絮状物，静置48h，抽滤，收集白色絮状物，用500目钢丝滤网挤干；用2倍体积的无水乙醇重复洗涤3次，抽滤，收集白色絮状物，挤干，揉碎至 0. Imm粉末，于70°C下热风干燥，得到白芨多糖提取物，置4°C下保存，备用；(2)白芨多糖盐溶胶制备按质量计，取分析纯NaC132g，分析纯KC10. lg，分析纯 MgCl2 · 6H20 0. 5g，分析纯和HEPESO. 12g，溶解于IL三蒸水中，得到溶液1，向所述的溶液 1中加入步骤(1)制备的白芨多糖提取物80g，得到白芨多糖盐溶胶；(3)卵巢催熟用介入药剂的配制向步骤( 所述的白芨多糖盐溶胶中每次使用前按体积比为1 50加入多潘立酮注射液，用超声波混勻得到催熟用介入药剂；其中步骤⑴和(3)所述的超声波条件如下Φ25πιπι固定探头，工作时间10s，间隙20s，振幅30um，容器置冰水混合物中。一种适用于介入式虾类卵巢催熟药物的制备方法，其包括如下步骤(1)白芨多糖提取将干燥的白芨去皮，切成1.2mm小块，按体积/质量比加入20 倍的三蒸水，于4°C下浸泡36小时，再置于70°C水浴中煎煮4-8h，用Imm滤网过滤，滤液置于4°C下静置，滤渣按体积/质量比加入5倍体积三蒸水置于70°C中水浴2h，重复煎煮3 次，用Imm滤网过滤，合并滤液；将上述滤液以超声波震荡30min，然后6000g离心20min，收集上清液，并检查上清液是否能通过30G注射器针头；向所得的上清液中加入10倍体积的无水乙醇，搅拌至全部生成细腻的白色絮状物，静置48h，抽滤，收集白色絮状物，用500目钢丝滤网挤干；用2倍体积的无水乙醇重复洗涤3次，抽滤，收集白色絮状物，挤干，揉碎至 0. Imm粉末，于70°C下热风干燥，得到白芨多糖提取物，置4°C下保存，备用；(2)白芨多糖盐溶胶制备按质量计，取分析纯NaC132g，分析纯KC10. lg，分析纯 MgCl2 · 6H20 0. 5g，分析纯和HEPESO. 12g，溶解于IL三蒸水中，得到溶液1，向所述的溶液 1中加入步骤(1)制备的白芨多糖提取物80g，得到白芨多糖盐溶胶；(3)卵巢催熟用介入药剂的配制向步骤( 所述的白芨多糖盐溶胶中每次使用前按体积比为1 50加入多潘立酮注射液，用超声波混勻得到催熟用介入药剂；其中步骤⑴和(3)所述的超声波条件如下Φ 25mm固定探头，工作时间10s，间隙20s，振幅30um，容器置冰水混合物中。本专利技术的虾类卵巢催熟药物的给药方法用27G-30G的针头，以普通或高压注射器将步骤A所得的催熟用介入药剂注射至眼柄基部窦腺处。与现有技术相比，本专利技术的积极效果是(1)本专利技术建立的方法稳定显著促进卵巢同步发育成熟。(2)本专利技术建立的方法相对于移除眼柄能极显著提高亲虾的养殖成活率。(3)原材料来源稳定，方法简单易行，能够作为移除眼柄的替代方法使用。具体实施例方式下面结合实例，对本专利技术作进一步详细说明，但实施方式并不限于此。实施例1 卵黄未发生期克氏原螯虾卵巢的催熟A、药品制备1、将干燥白芨20g去皮，切成1. 2mm小块，加入20倍(V/M)三蒸水，于4°C环境浸泡36小时后，置于70°C水浴煎煮4-8小时，以Imm滤网过滤，滤液置于4°C环境静置，滤渣在加入5倍(V/M)三蒸水置于70°C水浴2小时，重复煎煮3次，以Imm滤网过滤，合并滤液。2、将上述滤液以超声波(超声波条件如下Φ25πιπι固定探头，工作时间10s，间隙 20s，振幅30um，容器置冰水混合物中)震荡30分钟，然后6000g离心20分钟，收集上清液， 并检查上清液是否能通过30G注射器针头。3、向上清液中加入10倍体积无水乙醇，搅拌至全部生成本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘胜利，龚世园，黄文虎，李金梅，孙瑞杰，袁汉文，李强，林郁葱，闫建林，袁兆嘉，龚文杰，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：
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