一种ER拮抗剂的新用途制造技术

本发明专利技术公开了一种ER拮抗剂的新用途，该用途为在制备用于治疗肿瘤细胞对紫杉醇耐药的药物中的应用，所述的肿瘤为乳腺癌，所述的ER拮抗剂为ER拮抗剂ICI182,780。通过实验证实ER（雌激素受体）高水平表达是乳腺癌细胞耐药的一个重要相关指标，ER拮抗剂具有的优点是抑制ER蛋白表达水平，阻断雌激素对乳腺癌发生与发展的影响，其新用途在紫杉醇耐药的乳腺癌细胞模型中发挥了良好的逆转肿瘤耐药的作用，在治疗人乳腺癌对紫杉醇耐药的药物中具有广泛的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物医药
，具体涉及一种ER拮抗剂的新用途。
技术介绍
乳腺癌是女性中最常见的恶性肿瘤，全世界每年有百万妇女罹患乳腺癌。在我国， 乳腺癌已成为上升幅度最快的恶性肿瘤之一，现已居女性恶性肿瘤死亡率的首位。化疗是乳腺癌的主要辅助治疗手段，紫杉醇类化合物是近十年来治疗乳腺癌有效的化疗药物。随着紫杉醇类抗癌药为主的化疗方案的逐步应用，乳腺癌病人的治愈率已经有了相当的提高，但仍有相当部分的乳腺癌病人疗效不佳，其主要原因是由于肿瘤的耐药性造成了化疗失败，甚至导致患者病情恶化和死亡。肿瘤细胞对紫杉醇的多药耐药性(multi-drug resistance，MDR)是指肿瘤细胞对紫杉醇产生耐药后，对其他化学结构和机理不同的化疗药物也产生交叉耐药。目前研究已表明肿瘤细胞对紫杉醇的多药耐药主要机制之一是MDRl (ABCBl)高表达引起的。该基因编码的细胞膜转运蛋白PgP蛋白，能利用ATP能量将细胞内的底物泵出细胞外，使得肿瘤细胞内药物的绝对浓度降低，从而引起肿瘤细胞对抗肿瘤药物的耐药。近年来许多临床资料及文献回顾显示雌激素受体阳性(ER+)的乳腺癌患者对化疗的敏感性要比雌激素受体阴性(ER-)的患者差。因此，探索乳腺癌化疗耐药机制，并研究出能提高化疗药物敏感性的新药物迫不及待。
技术实现思路
专利技术目的针对现有技术的不足，本专利技术的目的是提供一种ER拮抗剂的新用途， 以实现有效解决。技术方案为了实现上述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案如下 ER拮抗剂在制备用于治疗肿瘤细胞对紫杉醇耐药的药物中的应用。所述的肿瘤为乳腺癌。所述的ER拮抗剂为ER拮抗剂ICI182，780。乳腺癌是女性中常见的恶性肿瘤之一，现有的化疗药物紫杉醇治疗效果欠佳，而肿瘤的多药耐药性是影响乳腺癌疗效的主要因素之一。临床上已经观察到雌激素受体(ER) 表达水平与乳腺癌对紫杉醇化疗的敏感性有着相关性，同时学术研究证实，在MCF-7细胞中ER蛋白可以与Spl转录因子形成复合体参与多种基因的转录调控，而多药耐药基因MDRl 受到转录调控因子Spl的调控。因此，ER拮抗剂在制备用于治疗肿瘤细胞对紫杉醇耐药的药物中的具有广泛的应用前景。提出以下假设ER能够通过促进MDRl基因转录，增强细胞对药物的抗性，紫杉醇治疗的同时应用ER拮抗剂可以提高乳腺癌细胞化疗敏感性，拟通过 cell culture,MTTaransfection,western blot等方法对以上假设进行验证，从而为乳腺癌治疗及其多药耐药的逆转提供新的思路。有益效果本专利技术通过实验证实ER高水平表达是乳腺癌细胞耐药的一个重要相关指标，ER拮抗剂具有的优点是抑制ER蛋白表达水平，阻断雌激素对乳腺癌发生与发展的影响，其新用途在紫杉醇耐药的乳腺癌细胞模型中发挥了良好的逆转肿瘤耐药的作用，在治疗人乳腺癌对紫杉醇耐药的药物中将具有广泛的应用。附图说明图1是RT-PCR鉴定MDRl和ER转录水平在耐药与敏感株中表达结果图； 图2是western blot鉴定Pgp和ER蛋白水平在耐药与敏感株中表达结果图； 图3是ER过表达质粒pcDNA3. 1⑴-ER α的PCR鉴定结果图4是ER干扰质粒pSUPER-ER α -shRNA的BglII酶切鉴定结果图5是western blot验证ER过表达的结果图6是过表达ER后耐药基因MDRl表达水平结果图7是过表达ER后细胞对紫杉醇耐受性结果图8是western blot验证ER干扰的效果图9是干扰ER后耐药基因MDRl表达水平结果图10是干扰ER后细胞对紫杉醇耐受结果图11是MTT检测ER拮抗剂ICI182，780对细胞增殖的影响结果图12是ER拮抗剂与低浓度/高浓度紫杉醇联合用药后对MCF-7/PTX细胞的治疗效果图。具体实施例方式下面结合附图对本专利技术做进一步的说明。为证实ER拮抗剂在制备用于治疗肿瘤细胞对紫杉醇的耐药性药物中的具有广泛的应用，提出以下假设ER能够通过促进MDRl基因转录，增强细胞对药物的抗性，紫杉醇治疗的同时应用ER拮抗剂可以提高乳腺癌细胞化疗敏感性。以下实施例通过cell culture, MTTaransfection.western blot等方法对以上假设进行验证，从而证实ER拮抗剂在制备用于治疗肿瘤细胞对紫杉醇耐药的药物中将具有广泛的应用。实施例1模拟临床给药方式建立耐紫杉醇的乳腺癌MCF-7细胞系(MCF-7/PTX)，应用MTT方法进行细胞耐药性分析。MCF-7细胞系，ATCC公司购买。细胞培养采用常规的紫杉醇间歇给药法建立耐药细胞株MCF-7/PTX。将细胞分为四组，在对数生长期的细胞培养物中加入紫杉醇至终浓度分别为10nM、50nM、200nM、 ΙΟΟΟηΜ。较多细胞脱壁、死亡，贴壁存活细胞缓慢生长，当细胞达80%饱和度时传代。并以相同药物浓度每周给药，持续刺激10次，脱药培养6个月。光吸收值检测将对数生长期细胞消化、离心后，用含10%胎牛血清的MEM培养基配成单个细胞悬液，以1 X IO4个/孔接种于96孔培养板中，每孔体积IOOul，24h后分别加入不同浓度的、由MEM培养基稀释的紫杉醇(设6个浓度梯度，各浓度之间相差8倍；每个浓度设6个平行孔)，并设不加细胞仅加培养基的空白对照组和接种细胞但不加药物的对照组；7 后，每孔加入MTT溶液(5mg/mL) IOul ；继续培养4h之后，弃上清，各加入150ul DMS0，震荡lOmin。选择570nm波长，在酶联免疫检测仪上测定各孔光吸收值(Α)。根据A 值计算细胞存活率(vital rate, VR) =VR (%)=(用药组A值-空白对照组A值)/ (对照组A值-空白对照组A值)X 100%。根据各药物VR，由药物浓度的对数值与VR线性回归求出各药物的半数抑制浓度(50%inhibitory concentration, IC50,并计算相对耐药指数RI (resistanceindex) :RI=IC50 (耐药细胞)/ IC50 (诱导前细胞)。最后取3次平行实验的平均值。结果如表1所示，从数据可以看出，成功建立了紫杉醇耐药的乳腺癌细胞系MCF-7/ PTX，测其耐药指数(IC50)较同代数的敏感细胞系MCF-7增加了 5. 5倍，因此乳腺癌细胞系 MCF-7/PTX可以被用来研究ER拮抗剂应用于制备治疗肿瘤细胞对紫杉醇耐药的药物。表1乳腺癌细胞对紫杉醇的半数致死浓度表_权利要求1.ER拮抗剂在制备用于治疗肿瘤细胞对紫杉醇耐药的药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的肿瘤为乳腺癌。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的ER拮抗剂为ER拮抗剂 ICI182, 780。全文摘要本专利技术公开了一种ER拮抗剂的新用途，该用途为在制备用于治疗肿瘤细胞对紫杉醇耐药的药物中的应用，所述的肿瘤为乳腺癌，所述的ER拮抗剂为ER拮抗剂ICI182,780。通过实验证实ER(雌激素受体)高水平表达是乳腺癌细胞耐药的一个重要相关指标，ER拮抗剂具有的优点是抑制ER蛋白表达水平，阻断雌激素对乳腺癌发生与发展的影响，其新用途在紫杉醇耐药的乳腺癌细胞模型中发挥了良好的逆转肿瘤耐药的作用，在治疗人乳腺癌对紫杉醇耐药的药物中具有广泛的应用前景。文档编号A6本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：孙玉洁，时俊锋，韩晓，
申请(专利权)人：南京医科大学，
类型：发明
国别省市：