本发明专利技术属中药制药领域，涉及中草药益母草水提物在制备药物组合物中的应用，尤其是在制备通过促进新生血管的生长治疗缺血性心脏病药物中的应用。经体外实验和体内动物实验结果证明，益母草水提物具有较高的血管新生活性，能促进新生血管尤其是冠状毛细血管的生长，满足缺血性心肌的氧供需求。本发明专利技术益母草的活性成分可作为药物原料，直接或与药学上通常用于制剂的固体或液体混合制成适宜制剂，包括胶囊、片剂、散剂以及复方制剂。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属中药制药领域，涉及中草药益母草水提物在制备药物组合物中的应用， 尤其是在制备通过促进新生血管的生长治疗缺血性心脏病药物中的应用。
技术介绍
缺血性心肌病，是近几十年来在发达国家和发展中国家导致死亡的首要原因。 降低此类疾病的发病率和死亡率非常重要。心脏的内源性抗氧化系统包括超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、过氧化氢酶(catalase，CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GPx)禾口其它抗氧化齐LU 体内活性氧(Reactive oxygen species, R0S)产生增加，超过了内源性抗氧化系统的清除能力，导致氧化应激，可加速人体的衰老、增加肿瘤的发生率，也可引起心血管系统的损伤，加重心肌破坏的程度。动脉粥样硬化、糖尿病、中风等疾病过程中，氧化应激的机制也不容忽视。中草药益母草(唇形科植物，Herba Leonuri，Chinese Motherwort)，最早收载于《神农本草经》、《本草纲目》等古籍中，有活血调经、利尿消肿的功效。中华人民共和国药典(2000年版)中用于月经不调、痛经、经闭、恶露不尽、水肿尿少、急性肾炎水肿等治疗。未见有关治疗缺血性心脏病的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供中药益母草(Herba Leonuri，Chinese Motherwort，以下简称HL)的活性成分在治疗缺血性心脏病药物中的新用途，尤其是在制备通过促进新生血管的生长治疗缺血性心脏病药物中的应用。本专利技术通过大量的化学和药理研究测得，中药益母草含有丰富的生物碱类和羟基黄酮类成分，可作为药物制剂的原料。本专利技术通过下述方法提取活性成分①取原药材益母草，除去残根、粗梗等杂质，洗净，粉碎后用80-100度的水煎煮。②水煎药液经滤过、浓缩后用高效液相色谱-质谱联用技术(High-performance liquid chromatography-mass spectrometry, HPLC-MS)，使用光电二极管阵列探测器和电喷雾质谱检查，其中含有水苏碱(Machydrine)、山萘素(Kaempferol)和槲皮素 (quercetin)等主要成分。本专利技术益母草的活性成分可作为药物原料，直接或与药学上通常用于制剂的固体或液体混合制成适宜制剂，包括胶囊、片剂、散剂以及复方制剂。经体外实验和体内动物实验结果证明，益母草水提物具有较高的血管新生活性， 能促进新生血管尤其是冠状毛细血管的生长，满足缺血性心肌的氧供需求。附图说明图1是益母草水提物HPLC色谱图，其中，益母草水提物50mg/ml，进样体积10 μ 1，碎片电压100V.标记峰*为水苏碱和山萘素，**为槲皮素。图2是体内试验中HL的抑制细胞凋亡作用和促进毛细血管新生的作用，其中，p53(A) ,Fas(B)，Bcl-xl (C)，Bcl-xs (D)禾Π VEGF (E)的 mRNA 水平的半定量分析，以GAPDH的基因表达为内参，* 与给水心梗治疗组相比，有统计学意义，P < 0. 05. # 与假手术组相比有统计学意义，P < 0. 05 ；第一列HL心梗治疗组；第二列给水心梗治疗组；第三列假手术组。图3是体外试验中HL的抑制细胞凋亡作用和促进毛细血管新生的作用，其中，P53(A)，Fas (B)，Bcl-xl (C)，Bcl-xs (D)和 VEGF (E)的 mRNA 水平的半定量分析，以GAPDH的基因表达为内参，每组包括6孔细胞(标准六孔板)并且每组试验重复两次， 标准差已标识，* 与给水心梗治疗组相比，有统计学意义，P < 0. 05 ；第一列给水低氧治疗组；第二列HL低氧治疗组；第三列给水非低氧对照组； 第四列HL非低氧对照组。图4是体外台盼兰染色不相容试验细胞活力测定的比较，其中，每组包括六孔细胞(标准六孔板)每组试验重复两次，标准差标识如图；* 与给水心梗治疗组相比，P < 0. 05。具体实施例方式以下例举实施例更具体地说明本专利技术，实施例所示成分、比率、操作条件和顺序等可在不脱离本专利技术精神的限定内适当变更。实施例1益母草水煎药液经滤过、浓缩后用高效液相色谱-质谱联用技术，使用光电二极管阵列探测器(DAD)和电喷雾(ESI)质谱检查，其中含有水苏碱(Machydrine)、山萘素 (Kaempferol)和槲皮素(quercetin)等主要成分。实施例2取益母草水提物，添加适量微晶纤维素、淀粉或其他赋形剂，按常规方法分别制成胶囊剂、片剂、散剂、颗粒剂、丸剂等内服剂型。实施例3HL的抑制细胞凋亡作用和促进毛细血管新生的作用体内试验体内试验检测凋亡基因和VEGF基因的表达常规方法进行p53(A)，Fas(B)， Bcl-xl (C), Bcl-xs (D)和VEGF(E)的mRNA水平的半定量分析，以GAPDH的基因表达为内参，结果显示HL心梗治疗组的凋亡基因Pra和Fas的表达明显低于给水心梗治疗对照组，P < 0. 05。相反，该组的凋亡抑制基因Bcl-xl的表达却明显高于对照组。Bcl-xs的基因表达水平则在两组间没有明显的差异性。四例被检测样本中有三例证实HL对凋亡有抑制作用，表明HL在体内对全身各系统有潜在抑制凋亡的作用。VEGF的基因在AMI组虽有表达， 但在假手术组并未检测到该基因的表达(图1)。结果表明组织损伤或低氧等状态可以诱导VEGF基因表达的突然增加，引发血管新生以满足氧供需求得增加。HL心梗治疗组的VEGF 的基因表达明显高于对照组(P < 0. 05)，说明前者有较高的血管新生活性。进一步进行冠状毛细血管的计数，使用工具药治疗的心梗对照组的左心室毛细血管数221. 2士22. 5)明显低于HL心梗治疗组(316. 8士 16. 5) (ρ < 0. 05)。三组的心肌组织切片在梗死区均有坏死现象存在。 对照组的血管数量普遍较少。HL治疗组左心室非心梗区的血管数也比较少。实施例4HL抑制细胞凋亡作用和促进毛细血管新生作用的体外试验，体外试验检测凋亡基因和VEGF表达水平的变化与体内试验结果相似，HL低氧治疗组的P53，Fas, Bcl-xs的mRNA低于对照组，P < 0. 05 (图2)。同时，Bcl-xl基因表达水平在HL低氧治疗组和对照组之间没有明显的差异。低氧介导的VSMC凋亡现象不依赖的 Bcl-xl基因的表达。此外，HL非缺氧治疗组(HLC)和对照组(WC)之间的上述四个基因的表达没有明显差异，说明HL提取物对于生理状态下的VSMC没有细胞凋亡和血管新生作用， 说明了 HL有较少的负作用。本试验与体内试验结果一致，HL缺氧治疗组的VEGF基因表达水平明显高于低氧对照组P < 0. 05，但两个非缺氧不同处理组之间该基因的表达没有明显差异性。上述实验结果证实HL可能在缺氧的条件下通过进一步上调VEGF基因表达促进毛细血管的新生，但在非缺氧的条件下正常剂量的HL并不发挥该作用。在上述体外试验中，细胞的基因相对表达水平没有根据细胞的数量进行校正。在利用Material等人描述的胰蛋白酶-EDTA的方法检测细胞活力之后，这类细胞就不能再次用来提取RNA和进行后本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：朱依谆，朱依纯，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：
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