一种繁缕水提取物及其制备方法和液相色谱的含量、指纹图谱、分子量分布测定方法及应用本发明专利技术公开了一种用较大孔径的凝胶柱进行繁缕水提取物的高效液相色谱含量测定方法、分子量分布测定方法及其指纹图谱，该测定方法可应用于提取物的工艺研究、稳定性研究、制订质量标准，并可经与标准品紫外吸收谱对照推定化合物成份类型；用该含量测定方法测得的高效液相色谱指纹图谱，采用国家药典委员会规定的中药色谱指纹图谱相似度评价系统对其进行评价，用水提取物样品的图谱与本品的质控标准图谱的共有模式来计算相似度可作为本品的一种质量控制标准，对有效控制组合物的质量具有重要意义。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于药物制备及分析领域，涉及一种繁缕水提取物及其制备方法、高效液相色谱含量、指纹图谱、分子量分布测定方法及应用。通过高效液相色谱法用凝胶柱测定繁缕水提取物中较大分子量成份含量和分子量分布的测定方法，并可推定各类成份的化合物类型，及将该方法应用于制定繁缕水提取物的质量标准和在繁缕水提取物组合物质量控制中应用。
技术介绍
据文献报道，繁缕属植物的化学成分主要是总酚酸类物质、肽类、氨基酸类、环缩氨酸类、黄酮及黄酮甙类、皂甙及皂甙原类、阿魏酸及其酯类、绿原酸、新绿原酸、咖啡酸、奎宁酸、抗坏血酸类、草酸及草酸钙、单酰基半乳糖类脂物、生物碱类等等，其提取物具有抑制艾滋病病毒、肝炎病毒、流感病毒、副流感病毒、腺病毒、疱疹病毒等分属RNA和DNA两大类的多种病毒的作用。繁缕水提取物成分复杂，含有较多繁缕糖肽、多糖、总黄酮、酚酸性物质等，文献报导过多种方法提取的繁缕水提取物，其分子量分布范围在300 2，000, OOODa0为了更全面、有效的控制繁缕水提取物的质量控制水平，和国际接轨，实现临床用药安全并保证抗病毒疗效稳定可靠，因此对繁缕水提取物采用更为先进的质量控制手段很有必要。鉴于繁缕水提取物为多组分复杂体系，提取方法不同也会导致成分发生变化，因此评价其质量应采用与之相适应的，能提供丰富鉴别信息的检测方法。繁缕水提取物中存在分子量越大的化学成份其抗病毒疗效越好的相应联系，因此，研究繁缕水提取物中各类大分子量化学成份的含量测定方法、其分子量分布以及各类成份的化合物类型，并作为繁缕水提取物的质量控制标准，对有效控制繁缕水提取物产品的质量具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种用高效液相色谱法进行繁缕水提取物中大分子量化学成份的含量测定方法、计算其分子量分布及推定化合物类型，并可采用国家药典委员会规定的中药色谱指纹图谱相似度评价系统来达到控制繁缕水提取物产品质量的目的。本专利技术另一个目的是将这种繁缕水提取物的含量测定方法应用于质量控制标准， 从而可进行繁缕水提取物的含量测定、生产工艺研究、有效成份含量大于50%的测定及其稳定性研究等。本专利技术的目的是通过下列措施实现的—种繁缕水提取物，该提取物含有糖肽，进一步，该提取物还含有黄酮和/或多糖，更进一步，该提取物的分子量分布范围是100至100，OOODa0所述的繁缕水提取物，该提取物是通过下列方法制备得到的方法1 a.取繁缕鲜草进行粉碎、离心并用水洗涤残渣，收集汁液，将收集得到的汁液在40 60°C保温1 8小时，静置，当出现绿色沉淀物时停止加热，静置，待液体温度降至 10-30°C时离心或/和过滤去除绿色沉淀杂质，收集棕红色溶液；或将收集得到的汁液在 1 25°C静置12 96小时出现绿色沉淀物时离心或/和过滤去除绿色沉淀杂质，收集棕红色溶液；或将收集得到的汁液在1 25°C用滤纸过滤，收集棕红色溶液；或取繁缕干草粉碎，加药材重2 5倍量的水，在1°C至60°C浸泡1 3次，每次1 4小时，合并滤液，过滤或/和离心得棕红色溶液；b.将上述棕红色溶液在10 60°C减压浓缩至10 30°C时比重1. 01 1. 30，得到浓缩液，离心或过滤后弃去沉淀物，浓缩液优先采用冷冻干燥、进一步可采用40 60°C 真空干燥、更进一步还可采用出口温度为50 70°C的喷雾干燥得到繁缕水提取物粉末；方法2:a.取繁缕鲜草进行粉碎、离心并用水洗涤残渣，收集汁液，将收集得到的汁液在 40 60°C保温1 8小时，静置，当出现绿色沉淀物时停止加热，静置，待液体温度降至 10-30°C时离心或/和过滤去除绿色沉淀杂质，收集棕红色溶液；或将收集得到的汁液在 1 25°C静置12 96小时出现绿色沉淀物时离心或/和过滤去除绿色沉淀杂质，收集棕红色溶液；或将收集得到的汁液在1 25°C用滤纸过滤，收集棕红色溶液；或取繁缕干草粉碎，加药材重2 5倍量的水，在1°C至60°C浸泡1 3次，每次1 4小时，合并滤液，过滤或/和离心得棕红色溶液；b、将上述棕红色溶液用切割分子量为500 1500Da的膜进行纳滤或超滤，收集含有大分子量物质的溶液，弃去含有小分子量物质的溶液，反复进行此项操作浓缩含有大分子量物质的溶液使浓缩液在10 30°C时比重达到1. 01 1. 30，若纳滤或超滤的浓缩液不能达到较大比重时再在10 60°C时采用减压浓缩，使浓缩液比重在10 30°C时达到1. 01 1. 30，离心或过滤后弃去沉淀物，浓缩液优先采用冷冻干燥、进一步可采用40 60°C真空干燥、更进一步还可采用出口温度为50 70°C的喷雾干燥得到繁缕水提取物粉末；方法3:a.取繁缕鲜草进行粉碎、离心并用水洗涤残渣，收集汁液，将收集得到的汁液在 40 60°C保温1 8小时，静置，当出现绿色沉淀物时停止加热，静置，待液体温度降至 10-300C时离心或/和过滤去除绿色沉淀杂质，收集棕红色溶液；或将收集得到的汁液在 1 25°C静置12 96小时出现绿色沉淀物时离心或/和过滤去除绿色沉淀杂质，收集棕红色溶液；或将收集得到的汁液在1 25°C用滤纸过滤，收集棕红色溶液；或取繁缕干草粉碎，加药材重2 5倍量的水，在1°C至60°C浸泡1 3次，每次1 4小时，合并滤液，过滤或/和离心得棕红色溶液；b.将上述棕红色溶液用切割分子量为500 1500Da的膜进行纳滤或超滤，收集含有大分子量物质的溶液，弃去含有小分子量物质的溶液，反复进行此项操作浓缩含有大分子量物质的溶液使浓缩液在10 30°C时比重达到1. 01 1. 30，若纳滤或超滤的浓缩液不能达到较大比重时再在10 60°C时采用减压浓缩，使浓缩液比重在10 30°C时达到 1. 01 1. 30，离心或过滤后弃去沉淀物，再向浓缩液加入95%乙醇使溶液含醇浓度达60 85%，静置12 M小时，离心或过滤收集沉淀物(必要时可用无水乙醇或丙酮洗涤沉淀物至近干)，沉淀物优先采用冷冻干燥、进一步可采用40 60°C真空干燥、更进一步还可采用7出口温度为50 70°C的喷雾干燥得到繁缕水提取物粉末。所述繁缕水提取物的制备方法，该方法包括以下步骤a.取繁缕鲜草进行粉碎、离心并用水洗涤残渣，收集汁液，将收集得到的汁液在 40 60°C保温1 8小时，静置，当出现绿色沉淀物时停止加热，静置，待液体温度降至 10-300C时离心或/和过滤去除绿色沉淀杂质，收集棕红色溶液；或将收集得到的汁液在 1 25°C静置12 96小时出现绿色沉淀物时离心或/和过滤去除绿色沉淀杂质，收集棕红色溶液；或将收集得到的汁液在1 25°C用滤纸过滤，收集棕红色溶液；或取繁缕干草粉碎，加药材重2 5倍量的水，在1°C至60°C浸泡1 3次，每次1 4小时，合并滤液，过滤或/和离心得棕红色溶液；b.将上述棕红色溶液在10 60°C减压浓缩至10 30°C时比重1. 01 1. 30，得到浓缩液，离心或过滤后弃去沉淀物，浓缩液优先采用冷冻干燥、进一步可采用40 60°C 真空干燥、更进一步还可采用出口温度为50 70°C的喷雾干燥得到繁缕水提取物粉末；或者将上述棕红色溶液用切割分子量为500 1500Da的膜进行纳滤或超滤，收集含有大分子量物质的溶液，弃去含有小分子量物质的溶液，反复进行此项本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
...
【专利技术属性】
技术研发人员：朱耕新，
申请(专利权)人：朱耕新，
类型：发明
国别省市：
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