本发明专利技术涉及一种能诱导抗鸡β2-微球蛋白抗体的多肽，该多肽序列为TPSSGSTYACKVEHETLKEPQVYKWDPEF；用该多肽免疫动物如Balb/c小鼠等，制取的抗体不仅能够与转染chβ2M的293T细胞特异性结合，而且能够与禽类巨噬细胞系HD11和CEF细胞中天然的chβ2M特异性反应；该抗体可以用于胸腺，脾脏和法氏囊等组织中的chβ2M分析，也可以用于以流式细胞仪分析不同细胞中的chβ2M。该发明专利技术经济快速，方便，适用于相关研究中快速制备抗体工具。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及合成多肽制备抗体的
，主要是一种利用合成多肽制备抗体的方法。提供了制备鸡β2-微球蛋白(chi32M)抗体的多肽序列用其应用。
技术介绍
β 2-微球蛋白(β 2-Μ)是人们比较熟悉的由100个氨基酸组成的非糖基化多肽， 分子量12kDa。所有有核细胞均能合成β2-Μ并与MHC I类分子形成复合物，成为MHC-I类分子的β链(轻链)。MHC I类分子在肿瘤免疫中有着十分重要的作用，通过MHC I类分子细胞毒T细胞可以识别由蛋白酶降解的肿瘤细胞产生的多肽。人们已经发现某些肿瘤细胞上MHC I类分子抗原的表达，且肿瘤细胞表面MHC I类分子的下调或缺失常与肿瘤发展的进程相关，因为部分类型的癌细胞能够逃避宿主免疫监测和细胞毒T细胞的清除作用。MHC-I类分子将细胞表面的内源性抗原提呈给⑶8+ CTL细胞，然后⑶8+ CTL 杀死含病原的感染细胞，从而清除感染。在病毒感染的细胞中，许多病毒通过利用自身编码的MHC I类似物来保护病毒感染细胞免于被消灭，例如鼠或人的巨细胞病毒；病毒蛋白也与β2-Μ相互作用，作用的机制同病毒与细胞的MHC-I重链分子作用相类似，如人痘病毒-触染性软疣病毒也编码一种MHC I类似物，并能与β 2-Μ形成复合体；特纳河痘病毒 (Tanapox virus，TPV)通过病毒编码的TNF抑制因子与β 2-M形成复合体以逃避抗原识别。 若将I类基因转染给肿瘤细胞株，则恶变细胞可发生逆转，且浸润性与转移性消失或降低。 这可能是由于MHC- I类抗原缺失的肿瘤细胞不能弥补TC识别，从而导致肿瘤免疫逃逸。 H. D. Hunt等报道MDV感染0U2细胞后，MHC I分子表达被封闭，MDV诱导的淋巴瘤细胞中MHC-I的表达几乎完全缺失，β2-Μ的表达下调。Alon M. Levy也证明了致肿瘤性MDV (RBlB)能够显著降低MHC I类分子的表达，但这种作用可以被IFN消除；Sarson AJ发现 MHC I类分子和DNA修复及程序死亡蛋白、多聚ADP-ribose、聚合酶(PARP)在MDV感染早期均下调。然而，最近的研究发现，虽然MDV感染早期MHC I类分子表达下调，但在感染后期，MHC I类分子表现为上调，Dalgaard T、Niikura M分别证明MDV感染后期诱导MHC I 分子的表达，MHC class I在⑶4(+)细胞和⑶8(+)细胞表面表达均有明显升高，同时， 这些细胞上的MHC II类分子也有升高。Abdul-Careem MF发现MHC I类分子在感染鸡羽囊中显著提高。本课题组研究发现在MDV感染的鸡法氏囊组织中β2-Μ表现为下调，但在羽囊中却表现为上调，这可能是在淋巴器官——法氏囊中，MDV通过某种途径抑制了细胞中β2-Μ的产生，减少自身与β 2-Μ形成复合体来逃避抗原识别，使得病毒能潜伏在淋巴细胞中而不被清除。而病毒感染鸡皮肤中β 2-Μ表达显著上调，可能是浸润在皮肤组织中的肿瘤细胞表达了 β2-Μ所致。马立克氏病毒通过降低感染细胞表面的MHC-I来逃避细胞免疫，使得其能顺利建立起潜伏感染及之后的重新激活。正常细胞和癌细胞表达的β 2-Μ蛋白以及在临床上的应用已成为近年来人们研究的热点。目前，有关β 2-Μ直接致有丝分裂活性和在致癌中的细胞信号传导功能尚未见报道。β 2-Μ是一种癌细胞和炎性细胞合成和分泌的可溶性因子，几种癌症疾病患者的血清和尿液可以发现高浓度β2-Μ，另外β 2-Μ的水平也是某些肿瘤包括肾脏肉瘤转归的重要指标，因此，可以假设β 2-Μ不仅是承载肿瘤的一个重要指标，而且也是癌细胞生长和转归的一个重要调节信号分子。明确β 2-Μ在MDV肿瘤发展过程中的作用，了解β2-Μ下游信号通路的特点对全面了解MDV的致病机制，有效控制MD，为人类癌症新的治疗靶位发现提供借鉴，有十分重要的理论意义。而研究ch β 2Μ的生物学功能，必须有相应的抗体工具，快速制备抗ch β 2Μ抗体，对进行相应研究具有重要作用。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种能诱导鸡32-微球蛋白((1^210抗体的多肽序列以及它在抗体制备中的应用。本专利技术所述的能诱导鸡β2_微球蛋白(chi32M)抗体，它的氨基酸序列为 TPSSGSTYACKVEHETLKEPQVYKWDPEF ；如 SEQ ID NO. 1 所示；它来源于鸡 ch β 2M 的碳端多肽序列。本专利技术所述多肽序列，是由四个氨基酸组成的多肽片段。该多肽可以刺激动物产生抗ch β 2Μ特异性抗体。另外，根据抗原表位由3-5个氨基酸组成的基本原理，由这四个氨基酸序列中的任何连续15个氨基酸的可衍生的多肽序列，也可以刺激动物产生抗ch β 2Μ特异性抗体。由这些多肽制备的多抗或单克隆抗体能够与转染chi3 2Μ的细胞特异性结合，也能与禽类巨噬细胞系HDll和CEF细胞中天然的ch β 2Μ特异性反应；由这些多肽制备的多抗或单克隆抗体可以应用于免疫组化分析，检测到胸腺，脾脏和法氏等组织中的chi3 2Μ ；或应用于流式细胞仪对不同细胞中(Λβ 2M的检测。附图说明图1，鸡β 2-微球蛋白western blot鉴定Μ:蛋白 Mark;￡i，d:未转染 ch β 2M 细胞；b，e:转染 ch β 2M 293Τ 细胞；c, f: HDll 裂解用抗原;a-c: 6E7; d_e: 3D1。图2鸡β 2-微球蛋白间接免疫荧光鉴定(X 40)Α+/Α-分别为HDll细胞阳性/阴性对照；Β+/Β-:分别为CEF细胞阳性/阴性对照； C+/C-分别为转染/未转染PCDNA3. 1-(Λβ2Μ 293Τ细胞对照。图3鸡胸腺，脾脏，法氏囊冰冻切片免疫组织化学观察QOO μπι)a/d:胸腺阳性/阴性对照；b/e:脾脏阳性/阴性对照；C/f 法氏囊阳性/阴性对照。图4是流式细胞检测图谱。具体实施例方式下述实施例中的方法，如无特别说明，均为常规方法。质粒、菌株、细胞与试验动物载体pGEM-Teasy、真核表达载体PCDNA3. 1(+)及其宿主菌DH5 α购自hvitrogen ；禽类巨噬细胞系HDl 1，人肾癌细胞系细胞与骨髓瘤细胞sp2/0均由江苏省动物预防医学重点实验室保存；SPF Balb /c小鼠和SPF鸡由扬州大学实验动物中心购买。主要试验试剂rTaq酶等分子生物学相关试剂购自大连宝生物生物技术有限公司；DMEM等细胞培养试剂购自GIBCO公司；辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗鼠IgG、FITC标记的山羊抗鼠 IgG购自Sigma公司，McAb亚类鉴定试剂盒购自PIERCE公司；Protein G柱购自GE公司等。引物根据已登录的鸡β 2-微球蛋白(GenBank ΑΥ989898, Ζ48921)设计引物用于扩增含信号肽的chi3 2M⑶S全长序列，其引物如下上游引物 Ml: 5’-TTGAATTCATGGGGAAGGCGGCGGC-3' (SEQ ID NO. 2)EcoR I下游引物 M2: 5'- TTCTCGAGTCAGAACTCGGGATCCCA-3' (SEQ ID NO. 3)XhO I引物由上海英俊生物工程公司合成。β 2M的克隆与分析按常规方法分离鸡外周血淋巴细胞，提取总RNA，并反转录本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：秦爱建，钱琨，郁川，刘秋，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：
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