一种IgG含量的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种IgG含量的检测方法，属于医药分析检测领域。它包括样品处理、样品与SPA产生免疫复合物以及补体结合检测步骤。本发明专利技术所述的IgG含量的检测方法检测结果精确，成功弥补了IgG检测领域中不同检测方法误差大的缺点，能精确地检测初乳IgG的含量，对产品的开发和品质有着至关重要的作用，同样此方法可以应用到其他免疫蛋白的检测中，对其他生物制药行业及保健品行业有着重要的推动作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医药分析检测领域，特别涉及一种牛初乳中IgG含量的检测方法。技术背景牛初乳是母牛产仔后72小时内分泌的乳汁，在以往生产实践中，往往被当成没有作用的东西抛弃，在现今科学研究中证明，初乳中的IgG含量非常的高，可到达59-80mg/ ml，有很高的利用价值。目前国内主要的检测IgG含量的方法有单项免疫扩散法、HPLC法、电泳法，但是精确度并不高，有着较大的误差。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种精确度高、操作简单的IgG含量的检测方法。，它包括如下步骤1、将标准IgG溶于缓冲液中配制成多个浓度的标准溶液，并分别检测每个标准溶液中的红细胞基数后制作标准曲线2、将样品IgG与过量浓度的SPA混合反应，制备IgG-SPA复合物；3、将IgG-SPA复合物与过量猪血清补体反应，产生的补体结合物与红细胞发生溶血反应，计算红细胞基数，与标准曲线对照即得样品IgG含量。其中，优选地，所述步骤1中标准曲线图的制作方法如下首先制备IgG标准溶液在缓冲液中溶解IgG标准物质分别配制成为lmg/ml、0. 5mg/ml、0. 25mg/ml、0. lmg/ml、 0. 05mg/ml的标准溶液，然后通过IgG-SPA结合反应及补体结合反应得到红细胞数量，从而制备标准曲线图。其中，优选地，步骤2中制备IgG-SPA复合物的方法为首先采用缓冲液配制与步骤1中标准溶液对应浓度的样品溶液，放入超声波清洗机中超声2-20min，精确吸取 20-200ul样品备用；然后采用缓冲液配制5倍以上IgG样品溶液浓度的SPA溶液，放入超声波清洗机中超声2-20min，精确吸取20_200ul SPA备用；将备用的IgG与备用的SPA溶液进行对应混合，反应生成IgG-SPA复合物。其中，优选地，步骤3中将IgG-SPA复合物与过量猪血清补体反应，产生的补体结合物与红细胞发生溶血反应的步骤为首先采用缓冲液配制5倍以上IgG样品溶液浓度的血清补体溶液，放入超声波清洗机中超声2-20min，精确吸取20_200ul血清补体溶液备用； 然后将步骤2中的IgG-SPA复合物与备用的血清补体溶液反应生成补体结合物；再精确吸取20-200ul补体结合物与标准红细胞发生溶血反应。其中，优选地，所述的缓冲液为PH6. 0的0. 2mol/L磷酸盐缓冲液(Phosphate Buffer, PB)。有益效果本专利技术通过IgG分子的Fc段与SPA (Staphylococcal protein Α)葡萄球菌A蛋白发生结合，产生的复合物可与标准猪血清中的补体发生补体结合反应，使特定浓度的红细胞标准液发生溶血反应，通过红细胞计数对比来检测IgG含量，该检测方法检测结果精确，成功弥补了 IgG检测领域中不同检测方法误差大的缺点，能精确的检测初乳 IgG的含量，对产品的开发和品质有着至关重要的作用，同样此方法可以应用到其他免疫蛋白的检测中，对其他生物制药行业及保健品行业有着重要的推动作用。附图说明图1为实施例1的标准曲线图，其以标准液浓度C(mg/ml)为横坐标，以红细胞基数N (个)为纵坐标，其中，A点为实施例1中红细胞基数与对应浓度的坐标点；图2为实施例2的标准曲线图，其以标准液浓度C(mg/ml)为横坐标，以红细胞基数N (个)为纵坐标，其中，B点为实施例2中红细胞基数与对应浓度的坐标点；图3为实施例3的标准曲线图，其以标准液浓度C(mg/ml)为横坐标，以红细胞基数N (个)为纵坐标，其中，C点为实施例3中红细胞基数与对应浓度的坐标点。具体实施方式下述实施例中缓冲液的配制方法0. 2mol/L的磷酸氢二钠和0. 2mol/L磷酸二氢钠，按照7 1的体积比混合成0. 2mol/L的磷酸盐缓冲液，PH值调至6. 0。标准IgG采用Sigma公司提供的纯度彡95%的IgG标准品。IgG标准溶液采用标准IgG与磷酸盐缓冲液按照浓度lmg/ml、0. 5mg/ml、0. 25mg/ ml、0. lmg/ml、0. 05mg/ml 分别配置。实施例1，其包括如下步骤标准曲线的制定将标准IgG溶于缓冲液中配制IgG标准溶液，浓度分别为Img/ ml、0. 5mg/ml、0. 25mg/ml、0. lmg/ml、0. 05mg/ml，采用 IgG-SPA 补体结合法测定，红细胞基数分别为177、403、742、1632、2980。最低检出含量为0. 005mg。将样品IgG用缓冲液精确配制成lmg/ml的IgG样品溶液，精确吸取IOOul置于样品管中，放入超声波清洗器中混合15min。配制5倍IgG样品溶液浓度的SPA溶液，在样品管中与IgG样品溶液充分混合，进行IgG-SPA复合反应，为了加快反应，可以放入超声波清洗器中混合IOmin生成IgG-SPA复合溶液。同时配制5倍IgG样品溶液浓度的猪血清补体液，与上述IgG-SPA复合溶液混合，进行补体结合反应，为了加快反应，可以放入超声波清洗器中混合8min，精确吸取IOOul补体结合反应后溶液与标准红细胞检测液发生溶血反应，并进行红细胞基数为611，对照图1中的标准曲线图，基数611对应的标准品浓度为0. 3mg/ml,即lmg/ml的IgG样品溶液与0. 3mg/ml的IgG标准溶液中IgG含量相同， 即 0. 3mg/ml*0. 95 = 0. 285mg/lm，0. 285/1*100%= 28. 50%，即待测样品液中 IgG 含量为 28. 5%。实施例2，其包括如下步骤标准曲线的制定将标准IgG溶于缓冲液中配制IgG标准溶液，浓度分别为Img/ ml、0. 5mg/ml、0. 25mg/ml、0. lmg/ml、0. 05mg/ml，采用 IgG-SPA 补体结合法测定，红细胞基数分别为204、398、750、1666、3202。最低检出含量为0. 008mg。将样品IgG用缓冲液精确配制成0. 5mg/ml的IgG样品溶液，精确吸取200ul置于样品管中，放入超声波清洗器中混合5min。配制7倍IgG样品溶液浓度的SPA溶液，在样品管中与IgG样品溶液充分混合，进行IgG-SPA复合反应，为了加快反应，可以放入超声波清洗器中混合20min生成IgG-SPA复合溶液。同时配制7倍IgG样品溶液浓度的猪血清补体液，与上述IgG-SPA复合溶液混合，进行补体结合反应，为了加快反应，可以放入超声波清洗器中混合lOmin，精确吸取IOOul补体结合反应后溶液与标准红细胞检测液发生溶血反应，并对红细胞基数为1140，对照图2中的标准曲线图，基数1140对应的标准品浓度为 0. 152mg/ml,即0. 5mg/ml的IgG样品溶液与0. 152mg/ml的IgG标准溶液中IgG含量相同， 即 0. 152mg/ml*0. 95 = 0. 1444mg/lm，0. 1444/0. 5*100%= 28. 88%,即待测样品液中 IgG 含量为28. 88%。实施例3，其包括如下步骤标准曲线的制定将标准IgG溶于缓冲液中配制IgG标准溶液，浓度分别为Img/ ml、0. 5mg/ml、0. 25mg/ml、0. lmg/ml、0. 05mg/ml，采用 IgG-SPA 补体结合法测定，红细胞基数分别为Ig本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张慧东，卜英俊，王彬，陈芳，顾培华，
申请(专利权)人：江苏星驰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：