一种海洋真菌汤姆青霉及其提取物和应用制造技术

本发明专利技术公开了一种海洋真菌汤姆青霉及其提取物和应用。海洋真菌汤姆青霉(Penici?llium?thomii)FS77于2011年11月24日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址：中国武汉市武汉大学，其保藏编号为CCTCC?M2011414。其发酵提取物对金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus?aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus?subtilis)和绿脓杆菌(Pseu?domonas?aeruginosa)具有抑制效果，同时，该发酵提取物对植物病原真菌链格孢(Altern?aria?alternata)、胶孢炭疽菌(Colletotrichum?gloeosporioides)和柱枝双孢霉(Cylindrocladiu?m?scoparium)也具有拈抗作用。因此，本发明专利技术的实现，为研究与开发新的抗菌药物、生物农药提供了候选药物，为开发利用海洋真菌来源的天然活性物质提供了科学依据。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种海洋真菌汤姆青霉(Penicillium thomii)FS77，以及从该菌株的液体培养发酵液中制备的发酵提取物，和该提取物在制备抗细菌、生物农药中的应用。
技术介绍
陆生微生物长期以来一直是医药和农药上的重要资源，但近年来随着陆地资源的不断开发，筛选新的微生物资源、寻找新的活性代谢产物难度越来越大，且抗药性问题日益严重，使得新药的开发面临严峻挑战。海洋约占地球表面积的71%，蕴含丰富的微生物资源，特殊的海洋环境(低温、高压、高盐、高寒、寡营养等)及海洋物种间的生态作用，赋予海洋微生物产生不同于陆地微生物的特殊产物，包括抗菌、抗植物病原菌、抗肿瘤、抗病毒等活性物质。海洋真菌是海洋微生物的重要组成部分，这类真菌种类多，分布广，因此，从海洋真菌的次生代谢产物中寻找有别于陆栖微生物的生理活性物质进而开发成药物，对于新的抗菌药物和新型生物农药开发具有十分重要意义，是当前微生物药物研发的一个重要方向。
技术实现思路
本专利技术的第一目的是提供一种海洋真菌汤姆青霉(Penicillium thomii) FS77，该菌株于2011年11月M日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址中国武汉市武汉大学，其保藏编号为CCTCC NO =M 2011414。本专利技术的海洋真菌汤姆青霉(Penicillium thomii)FS77是从南海 (106° 30.四5' E,10° 0.941' N) 1675m深处的海泥中分离、纯化得到。其分离纯化方法为将海泥样品用含30%粗海盐的无菌水稀释到10%，27°C振荡20min，取0. ImL均勻涂布在改良PDA固体培养基中J6 恒温箱培养，待菌落长出后，挑取菌落划线纯化。所述改良PDA固体培养基是在每升PDA培养基中加入KH2P043g、MgSO4O. 75g、维生素B1IOmgJl 海盐30g，琼脂20g，余量为水。通过形态学研究，并根据《真菌鉴定手册》(魏景超，1979)，该菌株鉴定为汤姆青霉(Penicillium thomii)，命名为汤姆青霉(Penicillium thomii)FS77，于 2011 年 11 月 24日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址中国武汉市武汉大学，其保藏编号为 CCTCCNO :M 2011414。其形态特征如下在改良PDA固体培养基上菌落灰绿色，边缘白色，表面具辐射状沟纹，产孢区颜色为青灰色。帚状枝单轮生，分生孢子梗生自基质或气生菌丝；瓶梗梭形或瓶形，7-10 X 2-2. 5μ m ；分生孢子链状排列，椭圆形，3. 0-3. 5X2-2. 5 μ m。按照常规方法提取该菌株的DNA，并利用真菌的ITS区的通用引物扩增其ITS 区，其ITS区的碱基序列如下SEQ IDN0. 1所示，提交至GeneBank，其基因登录号为 JQ034359。通过在GenBank中进行blast检索，与其相似度最高的两条序列均为汤姆青霉(Penicillium thomii)，相似度达99. 4%，因此，也确定该菌株属于汤姆青霉(Penicillium thomii)ο本专利技术的第二个目的是提供一种具有抗菌作用的海洋真菌汤姆青霉 (Penicillium thomii)FS77发酵提取物，其特征在于，以海洋真菌汤姆青霉(Penicillium thomii) FS77作为发酵菌株，液体发酵获得发酵培养物，分离菌丝体和发酵液，取发酵液用乙酸乙酯萃取，萃取液经浓缩后即得海洋真菌汤姆青霉(Penicillium thomii)FS77发酵提取物。所述的液体发酵，优选是将海洋真菌汤姆青霉(Penicillium thomii)FS77菌接种到改良PDA液体培养基中，120r/minJ6°C培养7d，获得海洋真菌汤姆青霉(Penicillium thomii) FS77发酵培养物，所述改良PDA培养基是在每升PDA培养基中加入KH2P043g、 MgSO4O. 75g、维生素B1IOmg和粗海盐30g。本专利技术通过实验发现，本专利技术的海洋真菌汤姆青霉(Penicillium thomii)FS77 发酵提取物在500 μ g片滤纸浓度下，对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、金黄色葡萄 J<|if (Staphyloccocus aureus)lif (Pseudomonas aeruginosa) (^WMM^M.-fi'Ti'M 为 9. 6mm>4. 6mm>4. 6mm。选择 25mg/mL, 12. 5mg/mL, 6. 25mg/mL, 3. 125mg/mL, 1. 5625mg/mL, 0. 7812mg/mL,0. 3906mg/mL 7个浓度下进行最低抑菌浓度(MIC值)试验，确定该发酵提取物对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、金黄色葡萄球菌(Maphyloccocus aureus)和绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)的 MIC 值分别为 1. 56mg/mL、6. 25mg/mL、6. 25mg/mL。由此可见，本专利技术海洋真菌汤姆青霉(Penicillium thomii)FS77的提取物具有抗细菌活性， 可用来制备抗细菌药物。因此本专利技术的第三个目的是提供海洋真菌汤姆青霉(Penicillium thomii)FS77 发酵提取物在制备抗细菌药物中的应用。所述的抗细菌药物优选为抗枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、金黄色葡萄球 |if (Staphyloccocus aureus) S^^MIf lif (Pseudomonas aeruginosa)本专利技术的第四个目的是提供一种抗细菌药物，其特征在于，该抗细菌药物包含海洋真菌汤姆青霉(Penicillium thomii)FS77发酵提取物作为活性成分。本专利技术通过实验发现，本专利技术的海洋真菌汤姆青霉(Penicillium thomii)FS77发酵提取物在50mg/mL浓度下，对链格孢(Alternaria alternata)的抑制率为50 60%、 对胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)的抑制率为50 60%、对柱枝双孢霉 (Cylindrocladium scoparium)的抑制率为 20 30%。选择 25mg/mL，12. 5mg/mL，6. 25mg/ mL，3. 125mg/mL, 1. 5625mg/mL，0. 7812mg/mL，0. 3906mg/mL 7 个浓度下进行抗菌最低浓度 (MIC值)试验，确定海洋真菌汤姆青霉(Penicillium thomii)FS77发酵提取物对链格孢 (Alternaria alternata)、月交子包炭 1 (Colletotrichum gloeosporioides)禾口tt枝双3 (Cylindrocladium scoparium)的 MIC 值分别为 3. 12mg/mL、3. 12mg/mL、6. 25mg/mL。结果表明本专利技术的海洋真菌汤姆青霉(Penicillium thomii)FS77发酵提取物对植物病原菌具有本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李浩华，章卫民，王磊，陈玉婵，
申请(专利权)人：广东省微生物研究所，
类型：发明
国别省市：