本发明专利技术涉及白念珠菌生长相关因子Cas5突变体的构建和应用。具体而言，本发明专利技术涉及含有SEQ?ID?NO：2的第1～133位氨基酸的序列、编码该序列的多核苷酸序列、含有该多核苷酸序列的表达载体以及这些序列和表达载体的应用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于白念珠菌相关领域，具体而言，本专利技术涉及白念珠菌生长相关因子 Cas5突变体的构建和应用。
技术介绍
白念珠菌是一种人体机会性致病真菌。在健康人体中，白念珠菌通常不具有致病性，而是作为一个温和的共生菌生活在一系列体内环境中，主要是口腔、生殖道和胃肠道的黏膜表面(Soil，2002，Acta Trop，81 :101-110.)。人体微环境的改变可能导致白念珠菌从共生菌向致病菌转变饮食的因素，例如某种营养成分的过量或者缺乏，可能改变体内的微环境；机械的因素，例如外伤或者内伤，也可能改变微环境，使“友好的细菌”大量减少，而使致病真菌占据主导地位。此外，免疫受损或免疫抑制的人群，例如新生儿、癌症病人、艾滋病人以及器官移植病人等，都对真菌感染特别敏感。在这些人群中，白念珠菌可能引起严重的念珠菌病，导致浅部感染如鹅口疮、阴道炎等，也可以侵入表皮和内皮细胞进入血液到达内脏器官如肾脏、脑部等，导致败血症，甚至可以导致死亡(Kl印ser，2006， Pharmacotherapy, 26 :68S_75S ；Sudbery et al. ,2004,Trends Microbiol, 12 :317-324.)。 在美国，念珠菌属在医院的血液感染中居第四位，估计每年花费的治疗费用超过20到40亿美元(Wilson et al.，2002，Value Health，5 J6-34.)，而其引起的致死率估计在38%到 49%之间(Gudlaugsson et al.，2003，Clin Infect Dis，37 :1172-1177.)。在癌症病人中报道的各种侵入性真菌感染中，念珠菌病是最常见的感染(58% -69% ) (Rosen et al.， 2005,J Pediatr Hematol Oncol, 27 135-140 ；Wang etal. ,2005,Acta Paediatr Taiwan, 46 :149-155.)，而其中占大部分的是白念珠菌；在过去的十年中，这类人群的真菌感染发生率显著上升了 (Lehrnbecher et al. ,J Infect，61 :259-265.)。由于白念珠菌能够迅速获得对抗真菌药(例如两性霉素B、氟胞嘧啶和唑类药物)的抗药性(d’Enfert，2006，Curr Drug Targets，7 :465-470),因此需要不断的发展新的抗真菌药物。真菌特异的、对真菌的生长或者毒性非常重要的蛋白都是抗真菌药物研制的候选靶点。Brimo等人报道白念珠菌 CAS5基因缺失导致对细胞壁干扰试剂敏感性的增加以及在小鼠系统感染模型中毒性下降 (Bruno et al.，2006，PLoS Pathog, 2 :e21 ；Chamilos et al.，2009，J Infect Dis,200 152-157)。
技术实现思路
本专利技术第一方面提供一种分离的多肽，所述多肽含有SEQ ID NO :2第1 133位氨基酸，条件是，所述多肽不是SEQ ID NO :2所示的序列。在一个具体实施方式中，所述多肽选自(1) SEQ ID NO 2的含所述第1 133位氨基酸的片段；和(2)在(1)中的氨基酸序列中，在所述第1 133位氨基酸以外的氨基酸位置上经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸，同时具有转录激活功能的由(1)衍生的蛋白质。在一个具体实施方式中，所述多肽选自(1) SEQ ID NO :2 第 1 720 位氨基酸；(2) SEQ ID NO :2 第 1 420 位氨基酸；(3) SEQ ID NO :2 第 1 200 位氨基酸；(4) SEQ ID NO :2 第 1 133 位氨基酸；禾口(5) SEQ ID NO :4、6、8、10 和 12 所示的氨基酸序列。本专利技术第二方面提供一种多核苷酸序列，所述多核苷酸序列选自(1)编码本文所述的多肽的多核苷酸序列；和(2)与(1)互补的多核苷酸序列。在一个具体实施方式中，所述多核苷酸序列选自(I)SEQ ID NO 3所示的核苷酸序列或与其互补的序列；(2) SEQ ID NO 5所示的核苷酸序列或与其互补的序列；(3) SEQ ID NO 7所示的核苷酸序列或与其互补的序列；(4) SEQ ID NO 9所示的核苷酸序列或与其互补的序列；(5) SEQ ID NO 11所示的核苷酸序列或与其互补的序列；(6)编码SEQ ID NO :2第1 720位氨基酸的序列或与其互补的序列；(7)编码SEQ ID NO :2第1 420位氨基酸的序列或与其互补的序列；(8)编码SEQ ID NO :2第1 200位氨基酸的序列或与其互补的序列；和(9)编码SEQ ID NO :2第1 133位氨基酸的序列或与其互补的序列。本专利技术第三方面提供一种表达载体，所述表达载体含有本专利技术所述的多核苷酸序列。本专利技术第四方面提供一种宿主细胞，所述宿主细胞含有本专利技术所述的表达载体。本专利技术第五方面提供一种改变白念珠菌的生长和形态的方法，所述方法包括(1) 敲除所述白念珠菌中编码SEQ ID NO :2第1 133位氨基酸的核苷酸序列，或使该核苷酸序列发生突变，从而使得该核苷酸序列编码的蛋白丧失转录激酶功能；( 用本专利技术的表达载体转化该白念珠菌，从而使得该白念珠菌过表达含所述第1 133位氨基酸的蛋白。所述方法可在体外实施。本专利技术第六方面包括本专利技术所述的分离的氨基酸序列或分离的核苷酸序列在制备用于抑制白念珠菌生长用的药物中的用途。本专利技术第七方面提供一种能与本专利技术所述的多肽特异性结合的抗体。 附图说明图1显示的是白念珠菌中CAS5基因的敲除。A图显示在白念珠菌中敲除CAS5基因的策略及其染色体上的酶切图谱；B图显示在白念珠菌CAS5基因的敲除过程中各个菌株的Southern杂交图谱。图2显示的是cas5/cas5缺失株的生长缺陷。A图显示cas5/cas5缺失株的生长速度相比野生型对照菌株大大下降；B图显示cas5/cas5缺失株在固体培养基表面形成不规则的菌落，在液体培养基中呈现膨大、细胞壁异常的细胞。图3显示了 Cas5全长蛋白和各种缺失突变体的转录激活作用。利用酵母系统，将CAS5全长基因或缺失片段克隆于带有LexA DNA结合结构域的质粒，转化酵母菌株，以IacZ 作为报告基因测定半乳糖苷酶活力，检测LeXA-CaS5和LexA Cas5突变体的转录激活作用。具体实施例方式如本文所用，白念珠菌CAS5基因(SEQ ID NO 1)用斜体CAS5表示，Cas5蛋白(SEQ IDNO 2)用正体Cas5表示。白念珠菌CAS5基因缺失株用cas5/cas5表示。“分离的”是指物质从其原始环境中分离出来(如果是天然的物质，原始环境即是天然环境)。如活体细胞内的天然状态下的多聚核苷酸和多肽是没有分离纯化的，但同样的多聚核苷酸或多肽如从天然状态中同存在的其他物质中分开，则为分离纯化的。本专利技术的多肽含有SEQ ID NO :2第1 133位氨基酸，条件是，所述多肽不是SEQ IDNO :2所示的序列。在一个具体实施方式中，本专利技术的多肽选自(I)SEQ ID NO 2的含所述第1 133位氨基酸的片段；和⑵在⑴中的氨基酸序列中，在本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种分离的多肽，其特征在于，所述多肽含有SEQ ID NO :2第1 133位氨基酸，条件是，所述多肽不是SEQ ID NO :2所示的序列。2.如权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述多肽选自(1)SEQID NO 2的含所述第1 133位氨基酸的片段；和(2)在(1)中的氨基酸序列中，在所述第1 133位氨基酸以外的氨基酸位置上经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸，同时具有转录激活功能的由(1)衍生的蛋白质。3.如权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述多肽选自(1)SEQ ID NO :2第1 720位氨基酸；(2)SEQ ID NO :2第1 420位氨基酸；(3)SEQ ID NO :2第1 200位氨基酸；(4)SEQ ID NO :2第1 133位氨基酸；和(5)SEQ ID N0:4、6、8、10和12所示的氨基酸序列。4.一种分离的多核苷酸序列，其特征在于，所述多核苷酸序列选自(1)编码权利要求1 3中任一项所述的多肽的多核苷酸序列；和(2)与(1)互补的多核苷酸序列。5.如权利要求4所述的多核苷酸序列，其特征在于，所述多核苷酸序列选自(1)SEQID NO :3所示的核苷酸序列或与其互补的序列；(2)SEQ ID NO :5所示的核苷酸序列或与其互补的序列；(3)SEQ ID NO :7所示的核苷酸序...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈江野，宋文纪，王华峰，
申请(专利权)人：中国科学院上海生命科学研究院，
类型：发明
国别省市：
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