用于将GDNF和BDNF递送至中枢神经系统的融合蛋白技术方案

本发明专利技术涉及一种化合物，其包括充当穿过血脑屏障的载体的肽载体如angiopep-2，连接于胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、脑源性神经营养因子(BDNF)、或相关分子，如它们的类似物或片段。本发明专利技术的化合物可以用来治疗其中期望增加神经元存活或生长的任何疾病，例如神经变性疾病如帕金森病或肌萎缩侧索硬化。能够利用所述化合物进行治疗的其他疾病包括精神分裂症和抑郁症。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种包括肽载体和胶质细胞源性神经营养因子。(GDNF)或脑源性神经营养因子(BDNF)的轭合物(结合物或共轭物，conjugate)，及其用途。
技术介绍
与神经元损失或损伤相关的疾病是严重病症并且在世界范围内影响数百万人。尽管疗法如GDNF在治疗神经变性病如帕金森病中具有前景，但是在本专利技术之前，这样的疗法至脑的递送由于活性剂不能穿过(跨越或越过，cross)血脑屏障而是复杂的。事实上，涉及用于帕金森病的GDNF疗法的先前临床试验要求使用将药剂直接注入脑中，并且用于治疗肌萎缩侧索硬化的BDNF试验涉及药剂的胸内注射。这些方法是繁琐且困难的。由于对于其中增加神经元存活或生长是有益的各种各样的疾病的治疗性治疗存在需要，所以期望具有穿过血脑屏障的能力的基于GDNF和BDNF的治疗剂。
技术实现思路
现在本专利技术的专利技术人开发了这样的化合物，其包括轭合至GDNF、BDNF、或相关分子的肽载体(peptide vector)。这些化合物可以例举包括GDNF或BDNF序列和Angiopep-2序列的融合蛋白。在某些实施方式中，这些化合物能够穿过血脑屏障，并因此可以用作治疗具有神经变性疾病或神经元受损的对象(个体，subject)的治疗剂。因此，在第一方面，本专利技术的特征在于一种包括下式的化合物A-X-B其中A是肽载体；B是与以下基本上相同(具有统一性的，identical)的多肽：(i)GDNF、其具有至少一种GDNF活性的片段、或GDNF类似物(例如本文中描述的任一种)；或(ii)BDNF、其具有至少一种BDNF活性的片段、或BDNF类似物(例如本文中描述的任一种)；以及X是结合A与B的连接物(接头，linker)(例如本文中描述的任一种)。该化合物可以能够(例如有效地)穿过血脑屏障。该化合物可以包括GDNF的成熟形式(例如亚型1的氨基酸118-211)或BDNF的成熟形式(例如亚型A的氨基酸129-247)。GDNF片段可以包括或可以是亚型1的氨基酸78-211。该化合物可以进一步包括标签(tag)如His标签，或切割位点如凝血酶切割位点。在某些是实施方式中，该化合物具有图2或图14所示的结构。在某些实施方式中，X是肽键或X是至少一个氨基酸，其中A和B各自通过肽键共价地键接于X。在某些实施方式中，连接物是柔性连接物(例如(GGGGS)n，其中n为1、2或3)、刚性连接物(例如PAPAP和(PT)nP，其中n为2、3、4、5、6或7)，或者α-螺旋连接物(例如A(EAAAK)nA，其中n为1、2、3、4或5)。肽载体可以存在于GDNF、BDNF或相关分子的N-或C-端。本专利技术的特征还在于一种编码该化合物的核酸分子，其中X是肽键、氨基酸或肽连接物。该核酸可以是载体的一部分，并且该核酸可以可操作地(operably)连接于启动子。本专利技术的特征还在于一种通过在细胞中表达由所述载体编码的多肽，并纯化该多肽而制备一种化合物的方法。本专利技术的特征还在于一种通过在固体支撑物(固体载体，solid support)上合成所述化合物而制备该化合物的方法。在另一方面，本专利技术的特征在于一种治疗(例如预防地)具有神经变性病或神经元受损或损伤的对象(例如人)的方法，通过给予该对象有效量的本专利技术的化合物。神经变性病可以选自由多聚谷氨酰胺序列延长病(多聚谷氨酰胺扩张紊乱，polyglutamine expansion disorder)、脆性X染色体综合征、脆性XE精神发育迟缓、弗里德赖希共济失调症(Friedreich′s ataxia)、营养不良性肌强直(myotonic dystrophy)、8型脊髓小脑性共济失调(spinocerebellar ataxia type 8)和12型脊髓小脑性共济失调、亚历山大病(Alexander disease)、阿耳珀病(Alper’s disease)、阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease)、肌萎缩侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis，ALS)、运动失调性毛细血管扩张症(ataxia telangiectasia)、Batten病(Batten disease，SVSB四氏病(Spielmeyer-Vogt-Sjogren-Batten disease))、卡纳万病(Canavan disease)、Cockayne综合征(Cockayne syndrome)、皮质基底节变性(Corticobasal degeneration)、克雅二氏病(Ceutzfeldt-Jakob disease)、缺血性中风(ischemia stroke)、克拉伯病(Krabbe disease)、Lewy体痴呆(Lewy body dementia)、多发性硬化、多系统萎缩(multiple system atrophy)、帕金森病、佩-梅二氏病(Pelizaeus-Merzbacher disease)、匹克病(Pick’s disease)、原发性侧索硬化(primary lateral sclerosis)、植烷酸贮积症(Refsum’s disease)、Sandhoff病(Sandhoff disease)、谢耳德病(Schilder’s disease)、脊髓损伤(spinal cord injury)、脊髓性肌萎缩(spinal muscular atrophy)、SRO三氏病(Steele-Richardson-Olszewski disease)、以及脊髓痨(Tabes dorsalis)组成的组。多聚谷氨酰胺复发病(polyglutamine repeat disease)可以是亨廷顿氏病(HD)、齿状核红核苍白球丘脑下核萎缩(dentatorubropallidoluysian atrophy)、肯尼迪病(Kennedy’s disease)(也称为脊髓延髓肌萎缩(spinobulbar muscular atrophy))，或选自由1型、2型、3型(马-约病(Machado-Joseph disease))、6型、7型、和17型组成的组中的脊髓小脑性共济失调(spinocerebellar ataxia)。神经元损伤可以由缺血性中风、出血性中风(hemorrhagic stroke)、或脊髓受损引起。能够利用本专利技术的化合物治疗的其他疾病包括抑郁症和精神分裂症(schizophrenia)。在以上这些方面的特定实施方式中，A是Angiopep-2(SEQ ID 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2009.06.11 US 61/186,2461.一种包含下式的化合物：
A-X-B
其中，A是肽载体；B是与以下基本相同的多肽：
(i)GDNF、其具有至少一种GDNF活性的片段、或GDNF
类似物；或
(ii)BDNF、其具有至少一种BDNF活性的片段、或BDNF
类似物；以及
X是将A结合于B的连接物。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中，所述化合物能够穿过血脑屏
障。
3.根据权利要求1所述的化合物，其中，所述B包括GDNF或BDNF
的成熟形式。
4.根据权利要求1所述的化合物，其中，A包括与选自由Angiopep-2
(SEQ ID NO：97)、反向Angiopep-2(SEQ ID NO：117)、Angiopep-1
(SEQ ID NO：67)、cys-Angiopep-2(SEQ ID NO：113)和
Angiopep-2-cys(SEQ ID NO：114)组成的组中的序列至少70％相同
的氨基酸序列。
5.根据权利要求4所述的化合物，其中，所述序列同一性为至少90％。
6.根据权利要求5所述的化合物，其中，A包括选自由Angiopep-2(SEQ 
ID NO：97)、反向Angiopep-2(SEQ ID NO：117)、Angiopep-1(SEQ 
ID NO：67)、cys-Angiopep-2(SEQ ID NO：113)和Angiopep-2-cys(SEQ 
ID NO：114)组成的组中的氨基酸序列。
7.根据权利要求6所述的化合物，其中，A由选自由Angiopep-2(SEQ 
ID NO：97)、反向Angiopep-2(SEQ ID NO：117)、Angiopep-1(SEQ 
ID NO：67)、cys-Angiopep-2(SEQ ID NO：113)和Angiopep-2-cys(SEQ 
ID NO：114)组成的组中的氨基酸序列构成。
8.根据权利要求1所述的化合物，其中，X是肽键。
9.根据权利要求1所述的化合物，其中，X是至少一个氨基酸；并且
A和B各自通过肽键共价键接于X。
10.根据权利要求9所述的化合物，其中，X选自由以下构成的组：
(GGGGS)n，其中n为1、2或3；PAPAP；(PT)pP，其中p为2、3、
4、5、6或7；以及A(EAAAK)qA，其中q为1、2、3、4或5。
11.根据权利要求1所述的化合物，其中，A是Angiopep-2(SEQ ID 
NO：97)；X是肽键；以及B是hGDNF78-211；其中A通过X结合于
B的N-端。
12.根据权利要求1所述的化合物，其中，A是Angiopep-2(SEQ ID 
NO：97)；X是肽键；以及B是hGDNF78-211；其中A通过X结合于
B的C-端。
13.根据权利要求1所述的化合物，其中，A是反向Angiopep-2(SEQ ID 
NO：117)；X是肽键；以及B是hGDNF78-211；其中A通过X结合于
B的N-端。
14.根据权利要求1所述的化合物，其中，A是Angi...

【专利技术属性】
技术研发人员：米歇尔·德默勒，多米尼克·波依温，让保罗·卡斯泰恩，
申请(专利权)人：安吉奥开米公司，
类型：发明
国别省市：