冰结晶化抑制物质制造技术

本发明专利技术的目的在于提供一种冰结晶化抑制物质，其具有能够实用的优异的冰结晶化抑制活性，能够通过可用于食品制造的安全工序，简单、高效、廉价地制造。此外，本发明专利技术的目的在于提供一种该冰结晶化抑制物质的制造方法、作为该冰结晶化抑制物质活性部分的多肽、以及包含该冰结晶化抑制物质或多肽的冰结晶化抑制组合物、食品、生物体试样保护剂及化妆品。本发明专利技术涉及的冰结晶化抑制物质，其特征在于，其来源于植物，并且，通过凝胶过滤色谱法测定的分子量为400kDa以上。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及冰结晶化抑制物质、该冰结晶化抑制物质的制造方法、作为该冰结晶化抑制物质的活性部分的多肽、以及包含该冰结晶化抑制物质或多肽的冰结晶化抑制组合物、食品、生物体试样保护剂及化妆品。
技术介绍
作为生物体在低温时的防御物质的一种，已知有冰结晶化抑制蛋白质。冰结晶化抑制蛋白质也被称为“抗冻蛋白”或“Anti-Freeze Protein”。以下，将它们简称为“AFP”。在水冷冻的冰点下的温度区域中，AFP具有吸附在细胞内生成的冰结晶的表面阻止冰结晶的生长、从而防止细胞冻结的功能。这样的AFP从例如鱼类、昆虫、植物、菌类、微生物等中被发现。对于鱼类、昆虫来源的AFP的研究不断发展，已经知道了数种不同类型的AFP。I型AFP例如从鲽科、杜父鱼科鱼类等中发现。作为I型AFP已有报道有如下的物质：含有连续的Ala残基并形成为单链α螺旋结构，分子量为3.3～5.0kDa(非专利文献1)。例如在亚洲胡瓜鱼(キュウリウオ)、大西洋鲱(タイセイヨウニシン)中发现了II型AFP。作为II型AFP，已经报道有如下的物质：该物质具有S-S键，与钙依赖型凝集素的糖识别区域具有高同源性，分子量为14kDa以上(非专利文献1)。III型AFP是获得较多三维结构信息的球状蛋白质，其分为与阴离子交换树脂结合的III型AFP和与阳离子交换树脂结合的III型AFP。例如，在Macrozoarces americanus中所发现的。作为III型AFP，有报道其是分子量为6～7kDa的物质(非专利文献1)。IV型AFP富含Glu和Gln，其显示与载脂蛋白E3的高同源性，并且含有大量α螺旋结构。在IV型AFP的存在下形成的冰结晶的特征为六方偏四面体型。作为IV型AFP，已经报道有如下的物质：例如包含108残基的，分子量为12kDa的杜父鱼科的多刺床杜父鱼(Myoxocephalus octodecemspinosus)来源的物质(非专利文献1)。有报道称：β螺旋型AFP由在特定的位置含有-Thr-Xaa-Thr-(式中、“Xaa”表示任意的氨基酸)和Cys的12个残基～13个残基的重复氨基酸序列构成，并显示高热滞效应。在例如黄粉虫(チャイロコメノゴミムシダマシ)的幼虫和谷物害虫的幼虫等中所发现的。作为β螺旋型AFP，已经报道了分子量为约9kDa的物质(非专利文献1)。已知抗冻糖蛋白(AFGP)主要由-Ala-Ala-Thr-重复构成，Thr的侧链被与冰结晶结合相关的二糖所修饰。是在例如南极鱼科(ノトセニア科)鱼类中发现的。作为抗冻糖蛋白，已经报道了分子量为2.2～33kDa的物质(非专利文献1)。作为植物来源的AFP，已知有冬黑麦(冬ライ麦)、胡萝卜来源的物质等。已知例如冬黑麦来源的AFP含有葡聚糖酶、几丁质酶、奇异果甜蛋白类蛋白质，其形成复合体，亚基的分子量为16～35kDa(非专利文献2)。已知胡萝卜来源的AFP以分子量36kDa的单体形式存在(非专利文献3)。作为菌类来源的AFP，已知有例如Typhula ishikariensis、南极蘑菇(Flammulina belutipes KUAF-1)等担子菌类来源的物质。这些AFP为细胞外分泌蛋白质。已经报道了Typhula ishikariensis来源的AFP的分子量为15～30kDa(专利文献1、2)。作为微生物来源的AFP，已知有例如黄杆菌属(Flavobacterium)来源的AFP。已经报道了其分子量为19kDa，其显示0.5℃以上的高热滞活性(专利文献3)。已知由恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)GR12-2分泌的抗冻蛋白是分子量为164kDa的新的脂糖蛋白(リポ糖タンパク質)(非专利文献4)。但是，在利用目前所报道的含AFP的鱼类、植物、昆虫、菌类、细菌等时，存在如下问题：在生物体内仅含有微量的AFP，由此从生物体中提取AFP的效率较差，或者，即使在该生物体内含有大量AFP，对这样的生物的捕获和培养较为困难。由此，在上述这些生物中，没有可用于工业生产食品用途的AFP的生物。有报道显示针对鱼类或昆虫类的AFP，使用基因重组技术可以提高生产性(专利文献4、5)。但是，目前的现状是即使不利用这样的重组技术，也需要通过更为简单的方法来实现高效，廉价地提供AFP的方法。鉴于这样的情况，仅利用以往公知的冰结晶化抑制物质是不充分的，强烈需要开发新的有用的冰结晶化抑制物质。现有技术文献专利文献专利文献1：日本特开2004-24237号公报专利文献2：日本特开2004-275008号公报专利文献3：日本特开2004-161761号公报专利文献4：国际公开WO92/16618号小册子专利文献5：国际公开WO97/28260号小册子非专利文献非专利文献1：生物物理，2003，Vol.43，No.3，pp.130-135非专利文献2：Plant Physiology，1999，Vol.119，pp.1361-1369非专利文献3：Biochem.J.，1999，Vol.340，pp.385-391非专利文献4：Can.J.Microbiol.，1998，Vol.44，p.64
技术实现思路
专利技术要解决的问题本专利技术的目的在于提供一种冰结晶化抑制物质，其具有能够实用的优异的冰结晶化抑制活性，能够通过可用于食品制造的安全工序，简单、高效、廉价地制造。此外，本专利技术的目的在于提供一种该冰结晶化抑制物质的制造方法、作为该冰结晶化抑制物质活性部分的多肽、以及包含该冰结晶化抑制物质或多肽的冰结晶化抑制组合物、食品、生物体试样保护剂及化妆品。解决问题的方法本专利技术人等为了解决上述问题进行了深入的研究。其结果发现，可以通过植物容易地获得，并利用工业上极其简便的方法、高效地制造的冰结晶化抑制物质，从而完成了本申请的专利技术。本专利技术涉及的冰结晶化抑制物质，其特征在于，其来源于植物，并且，通过凝胶过滤色谱法测定的分子量为400kDa以上。本专利技术涉及的上述冰结晶化抑制物质的制造方法，其特征在于，包含：使用截留分子量为5000以上的分离膜，从植物分离冰结晶化抑制物质的工序。本专利技术涉及的多肽，其特征在于，该多肽是上述冰结晶化抑制物质的一部分，并且具有冰结晶化抑制活性。本专利技术涉及的冰结晶化抑制组合物、食品、生物体试样保护剂及化妆品，其特征在于，包含上述冰结晶化抑制物质和/或上述多肽。具体实施方本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2009.06.09 JP 2009-1384591.一种冰结晶化抑制物质，其特征在于，其来源于植物，并且，通过
凝胶过滤色谱法测定的分子量为400kDa以上。
2.根据权利要求1所述的冰结晶化抑制物质，其是由多个亚基构成的
物质。
3.根据权利要求2所述的冰结晶化抑制物质，其中，通过SDS-PAGE
测定，其至少1个亚基的分子量为34000±500Da或71000±1000Da。
4.根据权利要求1～3中任一项所述的冰结晶化抑制物质，其中，所述
植物是选自属于十字花科、伞形科、百合科及菊科植物中的1种以上的植物，
或它们的类似品种或改良品种。
5.根据权利要求4所述的冰结晶化抑制物质，其中，属于十字花科的
植物是选自白菜、萝卜、西兰花、青菜、油菜、芜菁、大阪白菜、野泽菜、
广岛菜、水菜、及芥菜中的1种以上的植物，或它们的类似品种或改良品种。
6.根据权利要求5所述的冰结晶化抑制物质，其中，属于十字花科的
植物是Brassica juncea种的芥菜，或它的类似品种或改良品种。
7.根据权利要求1～6中任一项所述的冰结晶化抑制物质，其是在pH8
时吸附于阴离子交换柱的物质。
8.根据权利要求7所述的冰结晶化抑制物质，其中，阴离子交换柱是
DEAE柱。
9.根据权利要求7所述的冰结晶化抑制物质，其中，阴离子交换柱是
Q柱。
10.根据权利要求1～9中任一项所述的冰结晶化抑制物质，其是在pH6
时未吸附于阳离子交换柱的物质。
11.根据权利要求10所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：毛笠秀昭，荒井直树，友野润，横田真一，河原秀久，
申请(专利权)人：株式会社钟化，
类型：发明
国别省市：