神经元的生成、再生和保护制造技术

本发明专利技术证实，与凋亡性狂犬病病毒G蛋白相反，某些非凋亡性狂犬病病毒G蛋白，例如CVS-NIV株的G蛋白，具有神经突生长促进效应。本发明专利技术还证实，该神经突生长促进效应是由于所述非凋亡性狂犬病病毒G蛋白的胞质尾区，更具体而言是它们的PDZ-BS，所述PDZ-BS与凋亡性狂犬病病毒G蛋白的PDZ-BS相比具有单点突变。本发明专利技术提供了诱导和/或刺激神经突生长的方法，其可用于例如在神经系统瘤的治疗中诱导神经元分化、以及用于例如在神经退行性疾病、病症或疾病状态的治疗中或在微生物感染的治疗中使受损的神经元再生、或用于保护神经元免受神经毒性剂或氧化应激的影响。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】专利
本专利技术涉及神经元的产生、再生和保护，本专利技术更特别涉及神经突生长。本专利技术提供了诱导和/或刺激神经突生成效应的方法，这在医学领域中，尤其在神经系统病症的治疗和/或缓解和/或预防中是有用的。更具体而言，本专利技术提供了诱导和/或刺激神经突生长的方法，这可用于例如在神经系统瘤的治疗中诱导神经元分化，以及用于例如在神经退行性疾病、病症或疾病状态的治疗中或微生物感染的治疗中再生受损的神经元、，或用于保护神经元免受神经毒性剂或氧化应激的影响。本专利技术的方法基于某些非凋亡性狂犬病病毒G蛋白，更具体是基于它的胞质尾区。专利技术背景在神经系统的发育过程中，神经元将轴突延伸出很远的距离，以便以合适的方式支配它们的靶标。这涉及刺激细胞中能刺激生长锥活性的特定的信号通路。尽管发育的神经系统，特别是发育的中枢神经系统的可塑性很高，但是成年人的神经系统，特别是成年人的脑的修复能力较为有限。因此，神经突-轴突生长和针对退变的保护被认为是改善神经退行性疾病、病症或疾病状态的结果的重要因素，例如神经系统的急性损伤或慢性神经退行性病症。能诱导神经突从所述神经元细胞生长的产品会为这类疾病、病症或疾病状态带来非常有用的治疗和/或预防和/或缓解的解决办法。在神经元发育过程的另一方面，不会分化成为成熟的神经元结构的神经元前体细胞的增殖会产生神经系统瘤。能诱导神经突从这类前体细胞生长的产品会为这类瘤带来治疗和/或预防和/或缓解的解决办法。大体上，当嗜神经病毒感染神经元细胞是，它对神经元的形态，特别是对神经突生长没有正性影响。事实上，有很多例子显示嗜神经病毒导致神经元细胞通过凋亡而死亡。这既涉及诸如疱疹病毒的DNA病毒，又涉及诸如甲病毒、本雅病毒和副粘病毒的有包膜RNA病毒或诸如小核糖核酸病毒和呼吸道肠道病毒的无包膜RNA病毒。狂犬病病毒，特别是减毒的狂犬病病毒株，也被描述为能诱导神经元凋亡。例如，WO 03/048198涉及狂犬病病毒G蛋白及其至少100个氨基酸的片段，它们能导致神经元细胞完整性被破坏和凋亡小体的形成。这些凋亡小体能刺激体液免疫应答，特别是B细胞依赖性体液免疫应答。WO 03/048198证实：-减毒的狂犬病病毒株(例如减毒的ERA株)诱导其感染的细胞发生凋亡性破裂；-由此产生的凋亡小体刺激体液免疫应答，特别是刺激B细胞依赖性体液免疫应答；-狂犬病病毒株诱导的凋亡由其G蛋白的性质决定；-含有来自减毒狂犬病病毒株(例如减毒ERA株)的G蛋白的狂犬病病毒能引发人类细胞的凋亡，而来自致病性狂犬病病毒(例如攻击病毒标准CVS株)的G蛋白的表达则不会引发凋亡(参见，具体为WO 03/048198的实施例5和图19和20)。还可参见Lay et al.2003和Préhaud et al.2003。因此，已知凋亡性狂犬病病毒株的G蛋白，例如减毒ERA株的G蛋白，可用于刺激体液应答，特别是B细胞依赖性体液免疫应答。由于这些特定的G蛋白诱导其感染的细胞发生凋亡，所以它们还被建议作为通过对靶细胞进行凋亡破裂来去除不需要的细胞的候选剂。还描述了狂犬病病毒株的致病性与其诱导凋亡的能力负相关(参见WO 03/048198；Ugolini 1995；Sarmento et al.2005；Ugolini 2008；Jackson et al.2008)。因此，狂犬病病毒株的毒力越大，其致凋亡能力越小。诸如CVS株的毒性狂犬病病毒株不能诱导神经元凋亡，并进而能逃避体液探测，这解释了为什么在疾病的指征和症状出现之前，毒性狂犬病病毒株能在CNS中广泛传播。进行了进一步的研究来分析由嗜神经病毒感染所诱导的基因表达模式的改变，所述嗜神经病毒例如狂犬病病毒或I型单纯疱疹病毒(HSV-I)。这些研究已经表明，在不存在神经胶质的条件下，有丝分裂后的人神经元具有检测病毒感染的内在机制，并且诸如致病性狂犬病病毒或HSV-I的嗜神经病毒能诱导细胞因子从有丝分裂后的人神经元释放(Préhaud et al.2005)。该细胞因子释放被认为进一步促进神经元逃避凋亡，并促进这类嗜神经病毒的进一步传播。因此，神经元细胞死亡机制以及病毒感染时神经元产生免疫应答的能力已经得到彻底的研究。然而，对神经生成、神经再生和神经保护所涉及的过程，特别是对从有丝分裂前神经元(例如神经元前体细胞或瘤性神经元)或从退变神经元的神经突生长所涉及的过程还知之甚少。对于关注狂犬病病毒的研究人员，目前所知的概况是减毒狂犬病病毒株由于能诱导凋亡而被认为具有医疗用途，并且毒性狂犬病病毒株已知不能诱导凋亡，但是相反，能并保持促进它们的传播的神经元网络。尽管毒性狂犬病病毒株被描述成能保持神经元网络的完整性，但是据报道它们对神经元形态，特别是神经突生长具有负性影响，或者最起码没有正性影响。例如，出版物Guigoni and Coulon 2002描述，毒性狂犬病病毒株CVS-Gif-sur-Yvette不能诱导大鼠运动神经元的神经突生长(参见例如，该出版物的图5A和5B)。对神经突生长的负性影响也有报道。例如，出版物Scott et al.，2008报道了致病性CVS-11狂犬病病毒株诱导树突和轴突出现串珠(beading)，即形成空泡，这是负面胁迫影响的特征。本专利技术提供了神经元生成、再生和保护的方法，其源于某些致病性狂犬病病毒株，并且显示出惊人且出人意料的特性。专利技术概述本专利技术证实，一些致病性(和非凋亡性)狂犬病病毒G蛋白具有神经突生长促进效应，即一些非凋亡性狂犬病病毒G蛋白诱导和/或刺激神经突生成。凋亡性狂犬病病毒G蛋白没有表现出该效应。并不是所有的非凋亡性狂犬病病毒G蛋白都表现出该效应。本专利技术人鉴定出了一亚类非凋亡性(和毒性)狂犬病病毒株，其G蛋白对神经突生长具有显著的正性效应。如下文所描述并展示的，该亚类的代表性株是CVS-NIV株。该非凋亡性(和毒性)株的G蛋白与凋亡性(和减毒)ERA株(CNCM I-2760)的G蛋白仅有6个氨基酸不同。本专利技术还证实，该神经突生长促进效应是由于所述非凋亡性狂犬病病毒G蛋白的胞质尾区，特别是由于它们的PDZ结合位点(PDZ-BS)和/或由于位于CVS-NIV株的G蛋白序列中第491位的氨基酸，更特别是由于它们的PDZ-BS。本专利技术涉及多肽、核酸、载体、细胞和药物组合物或药物，所述多肽是某些本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2009.04.07 EP 09290257.61.产品，其选自如下所述的多肽、编码上述多肽的核酸、包含上述
核酸的载体、包含上述多肽和/或上述核酸和/或上述载体的细胞或者包含
上述多肽、核酸、载体和细胞中至少一种的药物组合物或药物；
其中所述多肽包含SEQ ID NO：6序列、或被称为变体序列A的序列、
或被称为变体序列B的序列、或所述SEQ ID NO：6序列或所述变体序列
A或所述变体序列B的片段，
其中所述被称为变体序列A的序列：
为34-54个氨基酸，
与所述SEQ ID NO：6序列在它们两个中最短的序列的全长上的
同一性为至少94％，并且
包含PDZ-BS序列，其中在该PDZ-BS序列中，
X1是除了E之外的任何氨基酸(优选Q)，且
X2是T或S或I(优选不是I，更优选为T)，且
X3是任何氨基酸(优选R)，且
X4是L或V(优选L)
(SEQ ID NO：14)，
其中所述被称为变体序列B的序列：
为44个氨基酸，
与所述SEQ ID NO：6序列的同一性为至少94％，
包含PDZ-BS序列，并且
在第11位不包含氨基酸L，
其中在该PDZ-BS序列中，
X1是E，且
X2是T或S或I(优选不是I，更优选为T)，且
X3是任何氨基酸(优选R)，且
X4是L或V(优选L)
(SEQ ID NO：13，其中X1＝E)，
其中所述SEQ ID NO：6序列或所述变体序列A或所述变体序列B的
片段为至少34个氨基酸，并且分别保留有所述SEQ ID NO：6序列或所
述变体序列A或所述变体序列B的PDZ-BS序列；
所述产品通过刺激和/或诱导神经系统中神经元的神经突生长和/或
神经突发芽和/或轴突生长和/或树突树延伸而用于治疗和/或缓解和/或预
防影响神经系统的疾病或病症，其中所述产品用作所述刺激和/或诱导的
有效要素。
2.如权利要求1所述的产品，其用于刺激和/或诱导突触发生和/或神
经传递和/或神经元可塑性。
3.如权利要求1-2中任一项所述的产品，其用作神经生成剂和/或神
经再生剂和/或神经保护剂。
4.如权利要求1-3中任一项所述的产品，其用于非免疫原性用途和/
或所述产品不是免疫原性试剂或佐剂。
5.如权利要求1-4中任一项所述的产品，其中所述变体序列A的
PDZ-BS序列是QTRL(SEQ ID NO：10)。
6.如权利要求1-5中任一项所述的产品，其中所述变体序列A为44
个氨基酸，并且在第11位为氨基酸H或L，优选H。
7.如权利要求1-6中任一项所述的产品，其中所述变体序列B的
PDZ-BS序列是ETRL(SEQ ID NO：12)。
8.如权利要求7所述的产品，其中所述变体序列B在第11位为氨基
酸H。
9.如权利要求1-8中任一项所述的产品，其中所述片段是SEQ ID NO：
6序列的片段11-44。
10.如权利要求1-9中任一项所述的产品，其中所述多肽是狂犬病病
毒株的G蛋白的胞质片段或该胞质片段的子片段，或者所述多肽包含狂
犬病病毒株的G蛋白的胞质片段或该胞质片段的子片段。
11.如权利要求10所述的产品，其中所述狂犬病病毒株是保藏于
CNCM、保藏号为I-4140、I-4142或I-4143的病毒株。
12.如权利要求1-11中任一项所述的产品，其中所述多肽还包含将
所述多肽锚定于细胞、特别是神经元细胞、更特别是人神经元细胞的内
质网膜和/或高尔基体膜中的氨基酸序列，所述锚定序列优选位于所述
SEQ ID NO：6序列或变体序列A或变体序列B的N末端，最优选与所述
SEQ ID NO：6序列或所述变体序列A或所述变体序列B的N末端的第一
个氨基酸直接连接。
13.如权利要求1-12中任一项所述的产品，其中所述多肽还包含如
下所述的序列：
狂犬病病毒株的G蛋白的跨膜结构域序列，特别是非凋亡性狂犬病
病毒株的G蛋白的跨膜结构域序列，或
由于至少一个氨基酸取代和/或缺失和/或添加、优选由于氨基酸取代
和/或缺失、更优选由于氨基酸取代而不同于所述狂犬病病毒G跨膜结构
域序列的序列，但是该序列保留有将SEQ ID NO：6的多肽(当...

【专利技术属性】
技术研发人员：克里斯托夫·佩奥德，莫尼克·拉冯，马赛厄斯·约翰尼斯·施奈尔，
申请(专利权)人：巴斯德研究所，托马斯杰斐逊大学，
类型：发明
国别省市：