本发明专利技术属于油菜分子育种技术领域，具体涉及一种与甘蓝型油菜亚麻酸含量紧密连锁的共显性SNP分子标记的制备，及其作为标记在辅助选择低亚麻酸甘蓝型油菜中的应用。用引物扩增低亚麻酸甘蓝型油菜品系甲A254和高亚麻酸甘蓝型油菜品系甲A177基因组DNA，分别得到两个DNA扩增片段，然后对所述4个DNA扩增片段进行克隆、测序、核苷酸序列比对；根据序列的差异，将正向引物和反向引物的3’端的第2个碱基同时进行错配处理，设计了引物对YQ-fad32-1和YQ-fad32-2。将引物对YQ-fad32-1和YQ-fad32-2进行PCR扩增，PCR扩增和群体检测效果分析，进而得到与甘蓝型油菜低亚麻酸基因连锁的共显性SNP分子标记，本发明专利技术的为油菜分子育种提供了一种新标记，其核苷酸序列如序列表SEQ?ID?NO：7和8所示。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术是申请号为200910273437. 1申请案的分案申请。本专利技术属于油菜分子育种
，具体涉及一种甘蓝型油菜低亚麻酸分子标记的制备及应用。所述的分子标记可以作为低亚麻酸甘蓝型油菜育种标记辅助选择，为培育遗传稳定的低亚麻酸油菜新品种提供新的分子标记。
技术介绍
油菜种子中脂肪酸组成直接决定着菜籽油的品质和对人的营养价值。亚麻酸是高度不饱和脂肪酸中氧化比率最高的脂肪酸，与空气、光、热等接触后极易发生氧化形成恶臭氧化物，使菜油变质而不耐贮藏。更为严重的是亚麻酸的氧化产物对人体有害， 可以弓丨起心血管粥样硬化(Chang 等，Effects of the ratio of polyunsaturated and monounsaturated fatty acid on rat plasma and liver lipid concentration. Lipids, 1998,33 :481-487)。不饱和脂肪酸的双链断裂后，比较容易形成自由基，即出现脂质过氧化反应，从而会损伤细胞与细胞膜的结构与功能(孔祥瑞，必需微量元素的营养生理及临床意义.合肥安徽科学出版社.1982 :3-60)，直接影响细胞的分裂、生长发育、繁殖和遗传。菜籽油中α-亚麻酸氧化后还会使油脂带有较强的辛辣味。因此，降低菜籽油中亚麻酸含量是育种家在甘蓝型油菜品质育种方面的长期目标(Rachael karth等，Designer oil canola—a review of new food-grade Brassica oils with focus on high oleic， low linolenic types,10th Int. Rapeseed Congress，1999)0目前国内外低亚麻酸遗传资源还很缺乏，在将低亚麻酸性状导入到高产的高亚麻酸品种时主要利用传统的表型选择方法。由于甘蓝型油菜中亚麻酸含量受多基因控制，存在育种周期长、效率低等缺点。现代生物技术中的分子标记辅助选择技术，与传统表型选择相比有诸多优点。分子标记辅助选择可在任何生长期进行，不受环境条件影响，可排除非等位基因相互作用而造成的干扰，具有快速、经济，效率高、准确性强的特点。在甘蓝型油菜低亚麻酸育种过程中将分子标记技术与回交育种相结合，可借助分子标记对性状的基因型进行直接而快速进行前景选择，以排除环境和外界因素的影响。同时可利用分子标记对背景进行选择，从而加快遗传背景恢复速度，缩短育种年限和减轻连锁累赘。而开展这些工作的前提之一是开发高效的分子标记。在低亚麻酸目的性状的定位方面，国内外的研究者已经取得很多的研究成果。 Somers等(Somers 等，Identification of Molecular Markers Associated with Linoleic Acid Desaturation in Brassica napus， Theoretical andApplied Genetics，1998， 96. 897-903)利用BSA法在由115基因型组成的DH群体中，找到16个与亚麻酸含量有关的RAPD标记，位于3个连锁群，分别解释32%，14%和5%的表型变异，甘蓝型油菜fad3基因定位于解释14%变异的这个连锁群上。三个QTLs间表现加性效应，共解释51%的变异。 HU 等(Hu J 等，Mapping of a gene determining linolenic acid content in rapeseed with DNA based markers. Theor Appl Genet 1995,90 :258-262)也找到一个与亚麻酸含量相关的RAPD显性标记，该标记扩增片段大小为650bp。他们进一步将此片段克隆、测序， 转化为显性的 SCAR 标记。(Hu J 等，SCAR and RAPD marker associated with 18-carbon fatty acids in rapeseed,Brassica napus. Plant Breeding，1999，118 :145—150)oGheung 等(Cheung Molecular mapping of seed quality traits in(Brassica juncea L.) czern. and coss. Acta Horticulturae，1998，459 :139-147)发现两个控制亚麻酸含量的 QTLs 一个位于 fael 位点一个位于 fad3 位点。Jourdren 等(Jourdren 等，Specific molecular marker of the genes controlling linolenic acid content in rapeseed. Theor Appl Genet，1996b，93 :512-518)定位了两个与亚麻酸含量有关的QTLs和fad3基因紧密相关丄ionneton等(Lionneton等，Development of an AFLP-based linkage map and localization of QTLs for seed fatty acid content in condiment mustard(Brassica juncea) Genome 2002,45 :1203-1215)发现对于亚麻酸含量位于LG2上的一个QTL位点可解释41. 2%的表型变异。F. Javidfar 等(F. Javidfar 等，Identification of molecular markers associated with oleic and linolenic acid in spring oilseed rape(Brassica napus). Plant Breeding, 2006,125 :65-71)用一个高油酸，低亚麻酸品种(C18:l > 79%, C18:3 < 2% )T099-5318-20 与一个高油酸，高亚麻酸(C18:l = 68%,C18:3 > 7% )DH 系 DH12075杂交。得到8个与油酸和亚麻酸含量关联的RAPD标记，其中RAPD标记UBC2830对油酸和亚麻酸含量变异的贡献率分别为43%和13%。RAPD标记UBC153550对亚麻酸含量变异的贡献率为19%。标记UBa830被变换成SCAR标记。Somers等(Daryl Somers，US 2003/0150020Al,Aug. 7,2003 ；Daryl Somers,US 7081564, July 25，2006)获得于低亚麻酸含量的 SNP 标记，Hu 等(Hu 等，Mapping ofthe loci controlling oleic and linolenic acid contents and development of fad2 and fad3 allele-specific markers in canola (Brassica napus L.). Theor Appl Genet，2006，1本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：周永明，傅廷栋，杨庆勇，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：
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