用于生产脂解酶的方法技术

本发明专利技术涉及用于在里氏木霉中产生脂解酶的方法以及可从所述方法获得的所述脂解酶。此外，本发明专利技术涉及木霉属用于表达脂解酶的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于在里氏木霉(Trichoderma reesei)中生产脂解酶的方法以及可从该方法获得的脂解酶。此外，本专利技术涉及木霉属(Trichoderma)用于表达脂解酶的用途。
技术介绍
脂肪酶(EC 3. 1. 1. 3)(可定义为催化酰基甘油水解的羧酸酯酶)是在生理上十分重要的酶，是与淀粉酶和蛋白酶一起的三种主要消化酶之一。它们将脂质水解为甘油和脂肪酸，但也可在酯化反应或转酯反应中起作用。脂肪酶在若干工业加工如油脂和脂肪的加工、去污剂生产、纸加工中以及在乳酪制备和烘焙工业中有应用。WO 98/4M53公开了源于丝状真菌塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)的脂解酶(及其变体)。该酶有时候称为“脂肪酶3” WO 98/45453表征了酯酶3的若干物理化学特性。还描述了该脂解酶用于改善面包的性质的用途，特别是，用于改善面包的性质。WO 98/4M53还描述了酯酶3及其变体在塔宾曲霉中的克隆和表达。据发现，该脂解酶可在塔宾曲霉中过表达，然而该酶在塔宾曲霉中被过糖基化，这在某些情况中可降低其活性。存在对用于在商业规模上生产酯酶3及其变体和其他脂解酶以及利用可提供高的蛋白质表达水平和产量的表达宿主的方法的需要。此外，还需要克服由于脂解酶的过糖基化而引起的酶活性降低的问题，脂解酶的过糖基化例如在其于塔宾曲霉中过表达时发生。
技术实现思路
出乎意料的是，发现里氏木霉是脂解酶-特别是脂肪酶3及其变体以及其他脂解酶的高效表达宿主。因此，在本专利技术的第一个方面，提供了生产脂解酶的方法，该方法包括如下步骤(i)提供里氏木霉细胞，该细胞包含a)至少一条编码脂解酶的异源核苷酸序列，所述脂解酶包含SEQ ID NO 1或SEQ ID NO :2所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO :1或SEQ ID NO :2具有至少40%序列同一性的氨基酸序列；和/或b)至少一条编码脂解酶的异源核苷酸序列，其中该核苷酸序列包含SEQ ID NO 3 或SEQ ID NO :4所示的核苷酸序列或与SEQ ID NO :3或SEQ ID NO :4具有至少40%序列同一性的核苷酸序列；和/或c)至少一条编码脂解酶的异源核苷酸序列，其中该核苷酸序列包含在严格条件下与如下序列杂交的核苷酸序列SEQ ID NO :3或SEQ ID NO :4或与SEQ ID NO :3或SEQ ID NO 4具有至少40%序列同一性的核苷酸序列或它们中任一者的互补序列；以及(ii)在允许编码所述脂解酶的所述异源核苷酸序列表达的条件下培养该细胞。在本专利技术的另一个方面，本专利技术提供了生产脂解酶的方法，该方法包括如下步骤(i)用如下序列转染或转化里氏木霉细胞a)至少一条编码脂解酶的异源核苷酸序列，所述脂解酶包含SEQ ID NO :1或SEQ ID NO :2所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO :1或SEQ ID NO :2具有至少40%序列同一性的氨基酸序列；和/或b)至少一条编码脂解酶的异源核苷酸序列，其中该核苷酸序列包含SEQ ID NO 3 或SEQ ID NO :4所示的核苷酸序列或与SEQ ID NO :3或SEQ ID NO :4具有至少40%序列同一性的核苷酸序列；和/或c)至少一条编码脂解酶的异源核苷酸序列，其中该核苷酸序列包含在严格条件下与如下序列杂交的核苷酸序列SEQ ID NO :3或SEQ ID NO :4或与SEQ ID NO :3或SEQ ID NO 4具有至少40%序列同一性的核苷酸序列或它们中任一者的互补序列；(ii)在允许编码所述脂解酶的所述异源核苷酸序列表达的条件下培养该细胞。在本专利技术的另一个方面，本专利技术提供了生产脂解酶的方法，该方法包括如下步骤(i)用如下序列转染或转化里氏木霉细胞a)至少一条编码脂解酶的异源核苷酸序列，所述脂解酶包含SEQ ID NO :1或SEQ ID NO :2所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO :1或SEQ ID NO :2具有至少40%序列同一性的氨基酸序列；和/或b)至少一条编码脂解酶的异源核苷酸序列，其中该核苷酸序列包含SEQ ID NO 3 或SEQ ID NO :4所示的核苷酸序列或与SEQ ID NO :3或SEQ ID NO :4具有至少40%序列同一性的核苷酸序列；和/或c)至少一条编码脂解酶的异源核苷酸序列，其中该核苷酸序列包含在严格条件下与如下序列杂交的核苷酸序列SEQ ID NO :3或SEQ ID NO :4或与SEQ ID NO :3或SEQ ID NO 4具有至少40%序列同一性的核苷酸序列或它们中任一者的互补序列；(ii)在该细胞上重复步骤⑴以依序用至少一条⑴(a)、⑴(b)或⑴(C)中所定义的额外异源核苷酸序列(例如，如编码脂解酶的异源核苷酸序列，该脂解酶包含SEQ ID NO :1或SEQ ID NO :2所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO :1或SEQ ID NO :2具有至少40% 序列同一性的氨基酸序列)转染或转化所述细胞；以及(iii)在允许编码所述脂解酶的所述异源核苷酸序列表达的条件下培养该细胞。本专利技术还进一步提供了可通过本专利技术方法获得的脂解酶。本专利技术还提供了用于人消费的食品，该食品包含可通过本专利技术获得的所述脂解酶。本专利技术还进一步提供了转化的或转染的里氏木霉细胞，该细胞包含a)至少一条编码脂解酶蛋白的异源核苷酸序列，该脂解酶蛋白与SEQ ID NO 1或 SEQ ID NO 2具有至少40%的序列同一性；和/或b)至少一条编码脂解酶的异源核苷酸序列，其中该核苷酸序列包含SEQ ID NO 3 或SEQ ID NO :4所示的核苷酸序列或与SEQ ID NO :3或SEQ ID NO :4具有至少40%序列同一性的核苷酸序列；和/或c)至少一条编码脂解酶的异源核苷酸序列，其中该核苷酸序列包含在严格条件下与如下序列杂交的核苷酸序列SEQ ID NO :3或SEQ ID NO :4或与SEQ ID NO :3或SEQ ID NO 4具有至少40%序列同一性的核苷酸序列或它们中任一者的互补序列。在另一个方面本专利技术提供了表达载体，该表达载体包含i)至少一条核苷酸序列，该核苷酸序列a)编码与SEQ ID NO :1或SEQ ID NO :2具有至少40%序列同一性的脂解酶蛋白； 和/或b)编码脂解酶并且包含SEQ ID NO :3或SEQ ID NO :4所示的核苷酸序列或与SEQ ID NO 3或SEQ ID NO 4具有至少40%序列同一性的核苷酸序列；和/或c)编码脂解酶，其中该核苷酸序列包含在严格条件下与如下序列杂交的核苷酸序列SEQ ID NO :3 或 SEQ ID NO :4 或与 SEQ ID NO :3 或 SEQ ID NO :4 具有至少 40%序列同一性的核苷酸序列或它们中任一者的互补序列；和ii)至少一个纤维二糖水解酶启动子，其中所述至少一条核苷酸序列处于所述至少一个纤维二糖水解酶启动子的控制下。在本专利技术的另一个方面，提供了里氏木霉细胞在如下序列的表达中的用途a)至少一条编码脂解酶的异源核苷酸序列，所述脂解酶包含SEQ ID NO :1或SEQ ID NO :2所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO :本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：S·M·马德里，C·林，M·R·扎尔加希，R·H·罗伦特森，M·F·伊萨克森，M·沃德，
申请(专利权)人：丹尼斯科有限公司，
类型：发明
国别省市：