一种米非司酮诱导的caspase-1-ES细胞系制造技术

本发明专利技术涉及一种米非司酮诱导的caspase-1-ES细胞系，所述的caspase-1-ES细胞系的保藏号为CCTCCC201193。本发明专利技术还提供这种细胞系的制备方法和应用。本发明专利技术优点在于：首次将caspase-1转入ES细胞，且不影响该细胞分化潜能。首次在ES细胞内高表达caspase-1，证实caspase-1激活后通过引发DNA损伤导致体外未分化的caspase-1-ES细胞死亡，降低ES细胞移植成瘤的风险；首次发现在分化的ES细胞内高表达caspase-1对细胞无显著影响，有助于维持ES细胞治疗的疗效；既提高了胚胎干细胞移植的安全性又保留治疗帕金森病和其他神经疾病的效果，可以在干细胞移植中广泛应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种细胞系，具体地说，是一种米非司酮诱导的caspase-1-ES细胞系及其制备方法和应用。
技术介绍
帕金森病(Parkinson’ s disease, PD)是发病率居第二位的常见的神经系统变性疾病，其病理特征主要表现为黑质多巴胺能神经元的丢失和路易小体的形成。常用的治疗策略仅仅局限于对症治疗，尽量减轻患者的临床症状，这类治疗手段并不能够从根本上逆转PD的发生和发展。胚胎干细胞(Embryonic stem cells，ES细胞)是具有多种分化潜能的细胞，能够诱导分化成为特定的细胞类型，这种特性使其在细胞替代治疗方面具有广阔的前景。ES细胞移植有望应用于治疗PD，但是混入移植物的少量未分化ES细胞可能在体内形成肿瘤，这对患者是很大的威胁。肿瘤是ES细胞移植常见的风险，这是由移植细胞中混入的幼稚细胞造成的。最常见的自杀基因治疗是将一个对细胞自身无害的酶的基因转入细胞，但这个酶能将无毒的药物前体转变为有毒的形式杀死该细胞，例如HSVtk/GCV系统。转入HSVtk的ES细胞会被 GCV诱导死亡。但是考虑到细胞毒效应和旁观者效应，尚不能证实GCV存在时所需的分化成熟的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种米非司酮诱导的caspase-1-ES细胞系，其特征在于，所述的caspase-1-ES细胞系的保藏号为CCTCC C201193。2.一种米非司酮诱导的caspase-1-ES细胞系的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括以下步骤a、pSwitch质粒线性化后用Lipofectamine2000转染入CGR8细胞，用Hygromycin筛选出pSwitch稳转株；b、PCR反应扩增caspase-Ι的全长cDNA；C、对caspase-1 cDNA和pGene载体进行双酶切，酶切产物以Solution I连接后转化入大肠杆菌；d、从大肠杆菌中抽提质粒，线性化后用Lipofectamine2000转染入pSwitch稳转株， 用kosin筛选稳转株；e、挑单克隆进行扩增，用RT-PCR和westernblot鉴定。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤b中caspase-Ι的全长 cDN...

【专利技术属性】
技术研发人员：乐卫东，王颐，杨德华，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院附属瑞金医院，
类型：发明
国别省市：