一种鉴定纸张制成时间的方法技术

本发明专利技术涉及一种鉴定纸张制成时间的方法，本发明专利技术构思是纸张中的成份主要是纤维素，当纤维素和纤维素酶发生反应时，能够反应得到葡萄糖，所以根据反应液中葡萄糖的含量来进行纸张制成时间的测定。本发明专利技术与现在技术相比提供了一种新的生物学鉴定纸张制成时间或者制成时间的方法，该方法更加科学合理，对制成相对时间间隔较小的纸张也能轻易根据本发明专利技术的方法做出准确的鉴定。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及。
技术介绍
在法庭科学中，纸张常作为各种信件、证书、契约等文件字迹和印章的载体。在各类案件中，作案人或当事人常常在事后伪造文件来冒充原文，谎称该文件的制成时间。因此要求对可疑文件纸张的生产年代进行鉴定，它是文件真伪的重要依据。纸张的主要成分是纤维素、半纤维索和木质素，均具有易氧化变质的性质；造纸过程中使用松香、明矾上胶， 使纸张带酸性，也会造成纸张的老化。表现出随着时间的推移出现发黄、变脆边缘部分被降解、纸张中间出现色斑等情况，致使纸张无法使用、记载文字丢失等，并且随时间的增长更加严重，因而通常通过检验纸张的老化程度来鉴定纸张的形成年代。目前用于纸张纤维老化的方法主要有PH测定法、红外光谱法、电镜法及毛细管电泳法等物理和化学方法，用生物分析的方法未见相关报道。并且已有的分析方法用于测定纸张的制成时间上，精确度不高，例如间隔半年以上的纸张的相对制成时间就不是很准确，所以急需一种可靠并且清确度高的生物学鉴定方法。
技术实现思路
本专利技术提供了一种测定纸张制成时间准确的方法，其技术方案如下，其包含以下步骤(1)将待测的纸张样品经处理后制成绝干纸浆；(2)制备各种浓度的标准葡萄糖溶液，并测定各种浓度的标准葡萄糖溶液的吸光值，绘制出葡萄糖浓度与吸光度之间的曲线关系；(3)将待测纸张制成的绝干纸浆与纤维素酶进行反应，将反应液过滤得到的清液进行吸光度测定，然后对照葡萄糖和吸光度的曲线读出它的含糖量，根据含糖量计算出绝干纸浆的还原糖量；(4)按照上述(1) (3)步骤测定已知的纸张的还原糖量和纸张制成时间的曲线图；(5)将待测纸张样品经过(1) ( 步骤后的含糖量在含糖量和纸张制成时间曲线图上找出对应的纸张制成时间。如上所述的鉴定纸张制成时间的方法，其中在步骤(1)中的取待测纸样，在去离子水中浸泡后打浆成悬浊液，抽滤后的滤饼置于沸水浴中，抽滤将热水洗涤后的纸浆样品冷却，置于封闭的容器中，放入冰箱中平衡水分，取纸浆试样在烘箱中烘干至恒重，测纸浆质量。如上所述的鉴定纸张制成时间的方法，其中在步骤O)中用分光光度计在540nm 处测得葡萄糖溶液的吸光值，以吸光度为纵坐标，葡萄糖含量为横坐标，绘制葡萄糖标准曲线。如上所述的鉴定纸张制成时间的方法，其中在步骤(3)中，取绝干纸浆样品放人已预热的含40 60mL纤维素酶液的三角瓶中；另取上述纸样分别放入已预热IOmin的含40 60mL缓冲溶液的三角瓶中，搅拌至悬浊状，用保鲜膜封口，在30°C 70°C下反应 30 240分钟，将达到反应终点的反应悬浊液过滤，分别取澄清滤液加入比色管中，沸水浴灭活，迅速冷却；另取一比色管加去离子水，然后与含有绝干纸浆样品的比色管均加入DNS 试剂摇勻，沸水浴显色，迅速冷却，定容后，在540nm处测吸光值，根据还原糖质量=含糖质量X样品稀释倍数算出还原糖质量；其中含糖质量，由葡萄糖标准曲线直接读出。如上所述的鉴定纸张制成时间的方法，其中所用的纸张样品为不含油墨的普通纸张。如上所述的鉴定纸张制成时间的方法，其中所述的待测纸张样品在三角瓶中的反应温度为50°C。如上所述的鉴定纸张制成时间的方法，其中所述的待测纸张样品的反应液中PH =4. 8。如上所述的鉴定纸张制成时间的方法，其中所述的的待测张张样品反应时间为60 分钟。本专利技术与现在技术相比提供了一种新的生物学鉴定纸张制成时间或者制成时间的方法，该方法更加科学合理，对制成相对时间间隔较小的纸张也能轻易根据本专利技术的方法做出准确的鉴定。附图说明图1为酶解温度对相对酶活力的影响。图2为PH值对相对酶活力的影响。图3为酶解反应时间曲线。图4为用酶量对酶解反应的影响。图5为纸张还原糖量与纤维制成时间的关系曲线图。具体实施例方式下面将结合具体实施例对本专利技术的技术方案进行详细的解释本具体实施例中所采用的试剂、仪器的名称和来源为纤维素酶，肇东市日成酶制剂有限公司；酒石酸钾钠，国营烟台葡萄酿酒公司；3， 5-二硝基水杨酸，北京化工厂；冰乙酸、葡萄糖，天津市科密欧化学试剂开发中心；重蒸酚， 沈阳试剂一厂；HH恒温水浴锅，余桃市检测仪表厂；Unic-72k可见光分光光度计，上海精密科学仪器有限公司；电子天平，上海精密科学仪器有限公司；打浆机，博朗电子。鉴定纸张制成时间的方法具体实施例— .样品处理步骤(1)样品来源随机选取8张制成时间不同(制成时间分别为 5月、7月、17月、19月、25月、31月、33月、41月)的凸版印刷纸，按制成时间由短至长分别编号Al A8作为样品进行测定。(2)样品预处理取待测纸样20g，在500mL去离子水中浸泡10h，加去离子水 IOOOmL,打浆5min成悬浊液。抽滤，滤饼置于沸水浴中30min，抽滤将热水洗涤后的纸浆样品冷却，置于封闭的容器中，放入4°C冰箱中平衡水分10h。取纸浆试样lg，在105°C烘箱中烘干至恒重生成绝干纸浆，测纸浆质量。(3)分析纸样样品的制备制备含Ig绝干浆的待测纸样称取待测滤饼质量，密封，放人4°C冰箱保存。应称取的待测滤饼质量=l/10m。m为绝干纸浆质量，单位g。二 .葡萄糖标准曲线的测定配制羧甲基纤维素钠(CMC)溶液、DNS溶液和标准葡萄糖溶液，用分光光度计在540nm处测得吸光值。以吸光度为纵坐标，葡萄糖含量为横坐标，绘制葡萄糖标准曲线，得到曲线方程为y = 0. 5066X-0. 0102。三.纤维素酶活力的测定纤维素酶液配制以HAc-NaAc缓冲溶液为体系，准确称取所取得纤维素酶固体粉末，溶于缓冲溶液，定容至刻度。纤维素酶活力测定取0. 9mL CMC溶液加入比色管，在所需反应温度下预热5min， 加入0. ImL酶液，反应20min。沸水浴灭活15min，迅速冷却，加入lmLDNS，沸水浴显色5min， 迅速冷却，蒸馏水定容至10mL，540nm下测吸光值。参比以蒸馏水代替酶液，空白以ImL蒸馏水加ImLDNS代替，酶活力定义为在50°C、pH4. 8条件下，ImL酶液水解羧甲基纤维素溶液 20min，产生Ig还原糖的用酶量为一个酶活力单位。酶活力=ΔOD · Α/Κ · V · t相对酶活力一待测酶活力/标准条件下的酶活力X 100式中，Δ 0D，待测样OD值与参比样OD值之差；K，葡萄糖标准曲线斜率；Α，酶液体积与纤维素固体酶质量之比(mL/ g) ；V，酶液添加量，mL ;t，反应时间，min。四.纤维素酶酶解纸张分析方法(1)分别取含Ig绝干纸浆老化程度不同的两种样品分别放人已预热IOmin的含40mL酶液的三角瓶中；另取上述纸样分别放人已预热 IOmin的含40mL缓冲溶液的三角瓶中，搅拌至悬浊状，用保鲜膜封口，在一定温度下反应。①反应温度对酶解反应有一定影响，选择的温度梯度为30、40、50、60、70°C，在 PH4. 8条件下分别按“步骤三”中的方法测定相对酶活，定义pH = 4. 8、50°C条件下相对酶活力为100，横坐标为反应温度，纵坐标为相对酶活力，实验结果见图1。由图可见，当温度为40 50°C时，纤维素酶相对酶活力接近100 ；小于30°C和大于60°C处显著下降。因此实施例选用50°C作为反应温度。②因为pH值影响酶解反应的反应程度，设定pH梯度为2. 6,3. 8,4. 4,4. 8,5. 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：丁国才，
申请(专利权)人：上海海帝园艺有限公司，
类型：发明
国别省市：