一种月季花托愈伤组织的诱导方法技术

本发明专利技术涉及一种月季花托愈伤组织的诱导方法。该方法包括如下步骤：选取花托外植体并进行预处理及常规消毒；将无菌花托在启动培养基上进行诱导培养，首先暗培养一周，然后转至弱光下培养30～50d，产生初始愈伤组织；将初始愈伤组织，转接到增殖培养基中进行增殖培养。采用本发明专利技术所述方法，可快速获得大量花托愈伤组织，诱导率高达100％，从而攻克了月季愈伤组织诱导率低、诱导质量差这一技术难题，为月季品种改良和生物技术育种奠定了良好的基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物组织培养
，具体涉及。
技术介绍
月季(Rosa hybrida L.)是我国最重要的园林植物之一。作为大地景观绿化的重要材料，月季在鲜切花生产与应用中也占有重要位置。在一些重要的观赏植物如兰花上，组织培养技术已开始应用，并大规模商品化生产，同时利用转基因技术向棉花等作物中导入目的基因已经培育出转基因新品系，这为利用转基因技术获得抗逆性强、花色特异的月季新品系提供了可能。自上世纪90年代以来月季组织培养的研究在国内外蓬勃开展，但是至今未能获得根本性的突破。研究表明月季组培苗形成途径主要以愈伤组织脱分化为主，而愈伤组织的质量是脱分化的基础。过氧化物酶是植物体内重要的呼吸酶类，其活性高低与酚类物质代谢、植物抗性密切相关，也有可能与愈伤组织的形成有关。月季体内由于存在较高的过氧化物酶含量，存在愈伤组织较难诱导、诱导率低，形成的愈伤组织质量差等问题， 导致月季愈伤组织诱导与再生的研究进展缓慢。截至目前，以月季的叶片、叶柄、茎段为外植体进行愈伤组织的诱导取得了一些定的进展，但在离体诱导月季花托愈伤组织方面尚未见报道，因此，以花托为外植体，提高月季愈伤组织诱导率及诱导质量，将在很大程度上促进月季产业的发展，带来巨大的经济效益。
技术实现思路
本专利技术是为了克服现有技术的不足，建立，提高月季愈伤组织的诱导率及诱导质量，为深入开展月季生物技术育种研究提供一种新的技术平台。本专利技术所采用的技术方案如下首先，选取适合的月季花托外植体，进行预处理及常规消毒；然后，对外植体进行初始愈伤组织的诱导，获得初始愈伤组织；最后，对初始愈伤组织进行增殖培养，以达到使愈伤组织快速增殖的目的。本专利技术所述月季花托愈伤组织的诱导方法具体包括如下步骤1)花托外植体的选取与消毒选取直径为0. 4 0. 6cm的花蕾，4°C冰箱预处理 1 3d后，常规消毒，剥取无菌花托；2)启动培养将所述无菌花托在启动培养基上进行暗培养7d，然后转至弱光下培养30 50d，产生初始愈伤组织；其中所述暗培养的培养温度为25士 1°C ；所述弱光下培养的培养条件为培养温度25士 1°C，光照14h/d，光照强度800 IOOOLx ；所述启动培养基为 MS+2，4-D 4 5. 5mg/L+6-BA 0 0. 5mg/L ；3)增殖培养将所述初始培养获得的愈伤组织，转接到增殖培养基中进行增殖培养；所述增殖培养基为 MS+2，4-D 2. 0 3. Omg/L+6-BA 0. 1 0. 3mg/L+NAA 1. 5 2. 5mg/L ；培养条件为培养温度25 士 1°C，光照14h/d，光照强度1500Lx ；。作为一种优选方案，所述步骤2)中，所述启动培养基为MS+2，4-D 5. Omg/L+6-BA 0. 5mg/L。作为一种优选方案，所述步骤3)中，所述增殖培养基为MS+2，4-D 2. Omg/L+6-BA 0. 2mg/L+NAA 2. Omg/L。上述各种培养基，均以MS为基本培养基，含琼脂5. 4g/L、蔗糖30g/L，培养基灭菌前pH为5. 8 6.0。本专利技术的有益效果在于采用本专利技术所述方法，可快速获得大量花托愈伤组织，诱导率高达100%，从而攻克了月季愈伤组织诱导率低、诱导质量差这一技术难题，为月季品种改良和生物技术育种奠定了良好的基础。附图说明图1为月季花托在启动培养基上获得的初始愈伤组织。 具体实施例方式以下实施例用来说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的保护范围。以下各实施例中，实验材料均为月季“粉和平”和“红帽子”’，两种月季品种的实验结果一致。基本培养基为MS，含琼脂5. 4g/L，蔗糖30g/L，培养基灭菌前pH为5. 8 6. 0。 培养条件为(另有说明的除外)培养温度25士 1°C，光照14h/d，光照强度1500Lx。实施例1花托外植体的选取与消毒在4 10月份，选取田间直径为0. 4 0. 6cm、含苞欲放的月季花蕾，4°C冰箱预处理1 2d，流水冲洗1 浊，超净工作台上将花蕾放入70%乙醇30s，再转入0. 1% HgCl2 溶液中8min，无菌水冲洗3 4次，剥去花萼、花瓣、雄蕊群及雌蕊群，取下花托切成4块备用。实施例2 启动培养中不同浓度2，4-D和6-BA组合对愈伤组织诱导的影响将月季的无菌花托切块接种到含有不同浓度6-BA (0,0.3,0. 5mg/L)和2， 4-D(4.5，5，5. 5mg/L)组合的MS启动培养基上先暗培养7d，然后转至弱光下(800 lOOOLx)培养。30d后比较外源激素对愈伤组织诱导的影响。其结果如表1所示各启动培养基的诱导效果有显著差异，其中以培养基MS+2，4-D 5. Omg/L+6-BA 0. 5mg/L的诱导率最高，诱导质量最好，愈伤组织呈黄绿色、松散颗粒状(如图1所示)，且随培养时间的延长逐渐增多，可培养至50d。因此，月季花托愈伤组织诱导的最适启动培养基为MS+2，4-D 5. 0mg/L+6-BA0. 5mg/L，适合的诱导时间为弱光下培养30 50d。表1不同浓度2，4-D和6-BA组合对愈伤组织诱导的影响权利要求1.，其特征在于，包括如下步骤1)花托外植体的选取与消毒选取直径为0.4 0. 6cm的花蕾，4°C冰箱预处理1 3d 后，常规消毒，剥取无菌花托；2)启动培养将所述无菌花托在启动培养基上进行暗培养7d，然后转至弱光下培养 30 50d，产生初始愈伤组织；其中所述暗培养的培养温度为25士 1°C ；所述弱光下培养的培养条件为培养温度25士 1°C，光照14h/d，光照强度800 IOOOLx ；所述启动培养基为 MS+2，4-D 4 5. 5mg/L+6-BA 0 0. 5mg/L+ 蔗糖 30g/L+ 琼脂 5. 4g/L ；3)增殖培养将所述初始愈伤组织，转接到增殖培养基中进行增殖培养；所述增殖培养基为 MS+2，4-D 2. 0 3. Omg/L+6-BA 0. 1 0. !3mg/L+NAA 1. 5 2. 5mg/L+蔗糖 30g/ L+琼脂5. 4g/L ；所述增殖培养的培养条件为培养温度25士 1°C，光照14h/d，光照强度 1500Lx。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中，所述启动培养基为MS+2， 4-D5. Omg/L+6-BA 0. 5mg/L+ 蔗糖 30g/L+ 琼脂 5. 4g/L。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤幻中，所述增殖培养基为MS+2， 4-D2. Omg/L+6-BA 0. 2mg/L+NAA 2. Omg/L+ 蔗糖 30g/L+ 琼脂 5. 4g/L。全文摘要本专利技术涉及。该方法包括如下步骤选取花托外植体并进行预处理及常规消毒；将无菌花托在启动培养基上进行诱导培养，首先暗培养一周，然后转至弱光下培养30～50d，产生初始愈伤组织；将初始愈伤组织，转接到增殖培养基中进行增殖培养。采用本专利技术所述方法，可快速获得大量花托愈伤组织，诱导率高达100％，从而攻克了月季愈伤组织诱导率低、诱导质量差这一技术难题，为月季品种改良和生物技术育种奠定了良好的基础。文档编号A01H4/00GK102405830SQ201110150420公开日2012年4月11日本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘会超，贾文庆，郭丽娟，尤扬，刘磊，齐安国，杜晓华，王少平，徐小博，
申请(专利权)人：河南科技学院，
类型：发明
国别省市：