一种质粒型腺病毒载体pAd-NRIP1及其构建方法技术

构建含秦川牛NRIP1(nuclear?receptor?interacting?protein?1)基因的重组腺病毒载体，可应用于秦川牛NRIP1基因功能研究、鉴定和对种子细胞进行改造，调控肌肉、脂肪、生殖等组织相关基因的代谢。方法是将秦川牛NRIP1基因插入pAdTrack-CMV腺病毒穿梭质粒的CMV启动子之下，构建重组穿梭质粒pAdTrack-CMV-NRIP1。PmeI线性化后转化含有pAdEasy-1质粒的E.coli?BJ5183感受态细胞，利用E.coli?BJ5183内Cre重组酶高效的同源重组系统，在细菌中完成pAdTrack-CMV-NRIP1和pAdEasy-1的同源重组。将正确的重组腺病毒质粒命名为pAd-NRIP1。pAd-NRIP1经PacI酶切线性化后，脂质体转染293A细胞产生并获得重组病毒颗粒。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种含有NRIPl基因的质粒型腺病毒载体，该质粒型腺病毒载体腺病毒载体的构建以及在改造种子细胞和牛NRIPl功能鉴定的应用。
技术介绍
AdEasyTM系统是由T. C. He等(1998)构建的用来代替传统腺病毒重组系统的一个快捷系统。在这个系统中，只需二步即可产生重组腺病毒先将表达盒装入转移载体，然后再通过同源重组插入腺病毒基因组。将外源基因插入腺病毒的最有效途径是通过同源重组，原因是1)腺病毒DNA是大型的线性分子，含有几乎所有的内切酶切位点；2)基因组过大(361Λ)，难于操作。在AdEasyTM载体系统中，含有大部分腺病毒基因组的载体为超螺旋质粒，而不是线性DNA，同源重组则在大肠杆菌进行。相对于传统系统而言，这两点改进使病毒DNA操作更容易，同时由于利用了大肠杆菌的高效率同源重组特性而使重组载体的筛选更为简单。 在本系统中，首先将基因cDNA插入一个转移载体，将得到的质粒用PmeI线性化，然后在大肠杆菌BJ5183中与病毒DNA质粒pAdEasy-Ι进行同源重组。pAdEasy-Ι缺失了 El和E3 区，其El区功能将在细胞中得到互补。重组子通过卡那霉素筛本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈宏，刘栋，马伟，李密杰，蓝贤勇，潘传英，
申请(专利权)人：西北农林科技大学，
类型：发明
国别省市：