本发明专利技术提供了一种用HPLC指纹图谱鉴别铁皮石斛真伪的方法，包括以下步骤：(1)铁皮石斛HPLC指纹图谱的建立：a.精密称取铁皮石斛药材粉末，加水或一元醇提取，浓缩，有机溶剂萃取，回收浓缩，定容，过滤，得供试品溶液；b.用高效液相色谱法分析上述供试品溶液，得铁皮石斛药材的指纹图谱。(2)铁皮石斛标准指纹图谱的建立：对20批铁皮石斛药材进行分析比较，得到了铁皮石斛标准指纹图谱和铁皮石斛药材相似度；相似度均在0.8以上。(3)相同步骤测定铁皮石斛伪品/代用品的指纹图谱，并与标准指纹图谱比较，计算相似度，其相似度均在0.6以下。利用标准指纹图谱和相似度可以有效监控铁皮石斛真伪和药材质量。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种中药材指纹图谱的建立方法，具体涉及一种HPLC指纹图谱鉴别铁皮石斛药材真伪的方法，为铁皮石斛的鉴定提供了一种特征性强、准确简便的现代鉴定方法，属于药物分析
技术介绍
铁皮石斛为兰科植物铁皮石斛Dendrobi μ m officinale Kimura et MIgo干燥茎。具有益胃生津，滋阴清热之功效，临床主要用于治疗阴伤津亏，口干烦渴，食少干呕，病后烦热，目暗不明等。石斛属植物是我国重要的传统中药材，药用价值历代为人们所推崇，而铁皮石斛为石斛之上品，因其特殊的生存环境和卓著的滋补功效而名列“中华九大仙草”之首。由于铁皮石斛种植难以普及，铁皮石斛原料产量与市场需求存在一定缺口，部分企业只能以原料供应量来定生产量。在产品生产和质量方面铁皮石斛类原料缺乏科学、可控性强的质量标准及检验检测手段。而且铁皮石斛与其近缘的种存在性状交叉现象，分类区别比较困难； 其中作为代用品的有齿瓣石斛、细茎石斛、肿节石斛等，并且出现了细叶石仙桃等与铁皮石斛功效不尽相同的非药典收载的混淆品。因此鉴定铁皮石斛及其代用品和伪品，将具有重大的理论意义和现实意义。目前，以外观性状和显微鉴别石斛原料和以粗多糖为主要指标，仍然是石斛类药材的主要鉴定方法，但由于受到专业性和经验性的限制而难以推广应用，此外对于特征差异较小的品种、药材粉末、中成药的鉴定还存在不足。既难以辨别制成品中是否含有铁皮石斛成分，又难以测定铁皮石斛有效成分的含量；特别是各级质量检测机构缺乏铁皮石斛专属性的检验方法，给鱼龙混杂以可乘之机。铁皮石斛类产品的标识和声称与内在品质不一致。一些标识为铁皮石斛(枫斗)的产品并非铁皮石斛，而是其它种类的石斛产品，损害了消费者利益。而在质量控制方面，2010年版《中国药典》对铁皮石斛药材的质量控制仍停留在性状和糖的含量测定，这远远不能实现对铁皮石斛药材进行全面的质量控制，也不利于中药的现代化和产业管理的规范化。针对以上情况，寻找一种特征性强、准确简便的现代鉴定方法，对于铁皮石斛药材的鉴定及其药材和产品质量进行控制具有十分重要的意义。中药指纹图谱法则是借助于色谱、光谱法得到能够标示该中药材或中成药特性的特征峰、特征组峰、共有峰的图谱。中药指纹图谱强调的是作为药用植物物种的“共同特征性”，体现其两个基本属性“整体性”和“模糊性”，作为一个整体来考虑而不需要将复杂的化学成分逐个分离出来。整体或部分整体地表征中药材或中成药复杂的中药化学信息，通过分析比较不同物种间中药化学信息的差异，依靠特征峰、特征组峰、特征相关峰、以及相对峰强度等特征来达到中药鉴定和鉴别真伪或产地及质量控制等目的。因此，在铁皮石斛有效成分不完全明确的前提下，制定中药的指纹图谱对于有效的控制其质量，具有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种铁皮石斛药材指纹图谱的构建方法，以及由此方法得到的铁皮石斛标准指纹图谱，并利用相似度判断铁皮石斛真伪。此专利技术对于铁皮石斛药材的鉴定及其药材和产品的质量控制具有十分重要的意义。本专利技术通过下述技术方案予以实现本专利技术包括以下步骤(1)供试品的制备将不同石斛药材干燥，粉碎后过筛，精密称取药材粉末，加水或一元醇提取，浓缩到一定体积，有机溶剂萃取，回收，甲醇定容，微孔滤膜过滤，滤液作为供试品溶液；(2)铁皮石斛药材HPLC指纹图谱的建立色谱分离柱为反相C18柱；流动相为乙腈 /甲醇-酸水，梯度洗脱；检测波长270士20nm ；柱温25 40°C ；在此条件下分析供试品溶液，得到铁皮石斛药材指纹图谱；(3)标准指纹图谱的建立对20批铁皮石斛药材建立HPLC指纹图谱，通过分析比较，得到铁皮石斛标准指纹图谱和铁皮石斛药材相似度；(4)以上述相同的步骤测定待测铁皮石斛样品和铁皮石斛伪品/代用品的指纹图谱；(5)将待测铁皮石斛样品和铁皮石斛伪品/代用品的指纹图谱与标准指纹图谱比较，计算相似度，确定样品真伪。本专利技术所述的步骤⑴的具体过程是1)精密称取过30 200目筛的铁皮石斛药材，按1 20 1 100的比例(以干品计)加提取溶剂提取0. 5 池，提取液减压回收至一定体积。提取溶剂为水或一元醇或两种溶剂按一定配比的混合溶剂；石斛药材是指不同生长年限或不同产地的鲜品、干燥品以及枫斗；提取方式是指回流提取、超声提取、索式提取、加速溶剂提取和微波提取；2)用等体积的有机溶剂萃取2 5次，有机溶剂可以为乙醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇、氯仿等或上述溶剂按一定配比的混合溶剂系统；3)回收有机溶剂萃取液，甲醇定容，0. 22 μ m或0. 45 μ m滤膜过滤，滤液作为供试品溶液。本专利技术所述的步骤(2)的具体过程是1)流动相为乙腈/甲醇-酸水，酸可为有机酸如甲酸、乙酸或无机酸如磷酸，浓度为0. 1-0.5%，优选甲醇-磷酸，磷酸浓度优选0.2%;流动相梯度洗脱条件为0min —5min —IOmin — 25min — 45min — 60min — 75min ；甲醇 25 % — 25 % — 30 % — 40 % — 55 % — 70 % —100% ；流速 0. 8-1. 2mL/min ；2)检测波长 270 士 20nm，优选 ^Onm ；3)柱温是 25 40°C，优选 30 。本专利技术所述的步骤(3)的具体过程是按照本专利技术提供的方法，对20批铁皮石斛药材建立HPLC指纹图谱，通过分析比较，得到铁皮石斛标准指纹图谱和铁皮石斛药材相似度，20批铁皮石斛相似度均在0. 8以上。本专利技术所述的步骤(4)和步骤(5)的具体过程是以上述相同步骤测定铁皮石斛伪品/代用品(报春石斛、齿瓣石斛、大包鞘石斛、 叠鞘石斛、兜唇石斛、钩状石斛、鼓槌石斛、金钗石斛、晶帽石斛、玫瑰石斛、美花石斛、密花石斛、梳唇石斛、疏花石斛、束花石斛、细茎石斛、肿节石斛、马鞭石斛、重唇石斛、黄花石斛、 霍山石斛、刀叶石斛、广东石豆兰、细叶石仙桃等)指纹图谱，并与铁皮石斛标准指纹图谱比较，其相似度均在0.6以下。本专利技术具有以下显著的优点和用途(1)指纹图谱的建立，将铁皮石斛作为一个整体来对待，通过指纹图谱中主要特征峰相对峰面积或相对保留时间的制定，能有效的检测和控制铁皮石斛药材的质量，并利用相似度达到鉴别铁皮石斛真伪的目的，为铁皮石斛药材真伪鉴别提供了一种全新的方法。(2)本专利技术具有简便可行、直观、稳定、重现性好、易于操作等优点，是一种特征性较强的现代鉴定方法。下面结合实施实例和图谱对本专利技术做进一步的说明。 附图说明图1为本专利技术提供的铁皮石斛药材的对照指纹图谱；图2为市售铁皮石斛药材的指纹图谱；图3为齿瓣石斛的指纹图谱；图4为肿节石斛的指纹图谱；图5为玫瑰石斛的指纹图谱。具体实施例方式本专利技术的实施方式具体如下实施例一1.仪器与试药1. 1仪器=Agilent 1200高效液相色谱仪；DAD检测器。1. 2试药铁皮石斛药材及其伪品或代用品为市售或厂家提供；乙腈、甲醇为色谱纯，其余试剂为分析纯。2.铁皮石斛药材标准指纹图谱的建立(1)供试品溶液的制备精密称取鲜铁皮石斛药材10. 0g，剪碎，加200mL水回流提取lh，减压回收到一定体积，用水饱和正丁醇萃取(20mL*3次)，回收正丁醇，甲醇定容， 0. 22 μ m滤膜过滤，滤液作为供试品溶液。(2)色谱条本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：吕圭源，周桂芬，陈素红，颜美秋，
申请(专利权)人：浙江中医药大学，
类型：发明
国别省市：
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