本发明专利技术公开了一种用于确定钴60辐照灭活动物源性生物材料病毒的方法，该方法包括以下步骤：1、用指示病毒感染动物源性生物材料，然后测定材料中的病毒滴度值；2、将受病毒感染的材料进行病毒灭活处理，测定处理后材料的病毒滴度值；3、若灭活处理前后材料中的病毒滴度差值大于4LgTCID50/0.1ml，则该病毒灭活处理方法是有效的；若灭活处理前后材料中的病毒滴度差值小于或等于4LgTCID50/0.1ml，则该病毒灭活处理方法不宜采用。本发明专利技术选用指示病毒对动物源性生物材料制备过程中灭活病毒工艺进行有效评价，从而为动物源性生物材料的使用提供安全保证，消除潜在的病毒感染风险；本发明专利技术的评价方法具有操作方法简便，评价结果可靠性高等优点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医学工程领域，具体涉及一种。
技术介绍
医疗器械种类广泛，其中包括各种动物组织材料。动物组织和其衍生物在特性方面要优于无生命体材料如金属、塑料或者纺织品。动物组织材料的数量和品种也是多样的。动物组织材料可以作为医疗器械的主要组成(如猪、牛的心脏，羊肠缝合线、止血材料等)，或者是医疗器械产品外结构或者巩固体 (如肝磷脂、凝胶、胶原等)，或者用于生产加工过程(如动物脂)。所以，动物源性医疗器械产品在所有医疗器械产品中占有重要比例。目前国内市场上的动物源性医疗器械根据国家食品药品监督管理局2002年发布的医疗器械产品分类目录分为三类，三类医疗器械是植入材料，如异种皮质骨、人工骨， 骨修复材料、骨填充材料，心脏或组织修补材料，如牛或猪心包生物瓣膜、心脏补片；眼内充填材料，如医用透明质酸钠等；接触式人工器官，如人工皮肤、异体脱细胞真皮；医用卫生材料及敷料中可吸收性止血、防粘性材料，如生物蛋白胶、医用胶原膜、透明质酸；医用缝合材料中医用可吸收胶原缝合线、羊肠线等，部分含异种动物血清的体外诊断试剂， 如高密度脂蛋白胆固醇试剂盒等。对于动物来源的要求，必须是非疫区国家。根据国药监械2002号文件规定， 禁止来自疫区的牛羊组织细胞等医疗器械产品进入中国。欧盟中只有瑞典是唯一未发生过 BSE的国家。为了提高动物源性生物材料使用的安全性，尽量消除人兽共患病以及相关的潜在风险(如疯牛病，口蹄疫，禽流感等)，因此必须对动物源性生物材料制备过程中的病毒灭活(去除)工艺进行验证(评价)。但到目前为止，国家尚未有相关的技术标准出台，因此为相关企业提供有效的病毒灭活/去除的技术指导方案尤为迫切。
技术实现思路
针对目前缺乏动物源性生物材料病毒灭活效果技术标准的现状，本专利技术的目的在于提供一种。本专利技术的目的通过下述技术方案实现一种，包括以下步骤(1)用指示病毒感染动物源性生物材料，然后测定动物源性生物材料中的病毒滴度值；(2)将受指示病毒感染的动物源性生物材料进行一定剂量的钴60辐照处理，测定处理后材料的病毒滴度值；(3)若辐照处理前后动物源性生物材料中的病毒滴度差值大于4LgTCID50/0. 1ml,则采用该辐照剂量是有效的；若灭活处理前后动物源性生物材料中的病毒滴度差值小于或等于4LgTCID50/0. 1ml，则需要增大辐照剂量。所述的指示病毒可以是RNA病毒或DNA病毒，可以是有包膜病毒或无包膜病毒；所述的指示病毒优选猪伪狂犬病毒、猪细小病毒、科萨奇病毒3型或合胞病毒；当指示病毒为上述4种病毒时，本专利技术的评价方法更加准确。所述的动物源性生物材料为骨松骨。本专利技术相对于现有技术具有如下的优点及效果1、本专利技术选用指示病毒对动物源性生物材料制备过程中灭活(去除)病毒工艺进行有效评价(验证)，从而为动物源性生物材料的使用提供安全保证，消除潜在的病毒感染风险。2、本专利技术的评价方法具有操作方法简便，评价结果可靠性高等优点。 具体实施例方式下面结合实施例对本专利技术作进一步详细的描述，但本专利技术的实施方式不限于此。实施例1骨松骨钴60辐照灭活柯萨奇3型病毒效果验证，包括以下步骤(1)取0. 9g骨松骨(由广东冠吴生物科技股份有限公司提供；下同)，放入9ml柯萨奇3型病毒CVB3 (购自武汉病毒研究所)液(病毒滴度为5. 75LgTCID50/0. 1ml)中，于 4°C浸泡吸附16小时，取出；将0. 9g吸附了柯萨奇3型病毒CVB3的骨松骨分为3份，每份 0. 3g，取其中一份加入3ml无牛血清培养液研磨成10%悬液，于4000r/min离心15分钟，吸取上清，除菌过滤，测定其中柯萨奇3型病毒CVB3的滴度值(滴度测定采用96孔细胞病变法，计算按Karber法；下同)，为对照样本病毒滴度值；(2)取步骤(1)中另外2份受柯萨奇3型病毒CVB3感染的骨松骨进行钴60辐照处理，辐照剂量为20kGy ；然后用3ml无牛血清培养液研磨成10%悬液，于4000r/min离心 15分钟，吸取上清，除菌过滤，测定其病毒滴度；以上试验重复3个批次。经过钴60辐照处理后，3个批次的骨松骨中残余柯萨奇3型病毒低于最低检测限 (0. 500LgTCID50/0. 1ml)，三个批次病毒经辐照后滴度减低值分别为第一批彡4. 92TCID50/0. Iml第二批彡4. 65TCID50/0. Iml第三批彡4. 72TCID50/0. Iml ；钴60辐照处理前后样品病毒滴度值差异见表1 :表1骨松骨钴60辐照灭活柯萨奇3型病毒结果^样品经钴60辐照残余柯萨奇3型病毒滴度(UTCID50/0. Iml)(剂量为20kGy)_第一批_第二批_第三批~对照样本5A25Λ5522~钴 60 辐照后样本<0.500^0. 500^0. 500 从表1可以看出，三个批次样本辐照处理前后动物源性生物材料中的病毒滴度差值均大于4LgTCID50/0. 1ml。说明利用钴60辐照剂量为20kGy时，可以有效灭活骨松骨中科萨奇3型病毒。实施例2骨松骨钴60辐照灭活猪伪狂犬病毒效果验证，包括以下步骤(1)取0. 9g骨松骨，放入9ml猪伪狂犬病毒PRV (购自北京微生物菌种保存中心) 液(病毒滴度为6.5LgTCID50/0. 1ml)中，于4°C浸泡吸附16小时，取出；将0.9g吸附了猪伪狂犬病毒PRV的骨松骨分为3份，每份0. 3g，取其中一份加入3ml无牛血清培养液研磨成 10%悬液，于4000r/min离心15分钟，吸取上清，除菌过滤，测定其中猪伪狂犬病毒PRV的滴度值(滴度测定采用96孔细胞病变法，计算按Karber法；下同)，为对照样本病毒滴度值；(2)取步骤(1)中另外2份受猪伪狂犬病毒PRV感染的骨松骨进行钴60辐照处理，辐照剂量为20kGy ；然后用3ml无牛血清培养液研磨成10%悬液，于4000r/min离心15 分钟，吸取上清，除菌过滤，测定其病毒滴度；以上试验重复3个批次。经过钴60辐照处理后，3个批次的骨松骨中残余猪伪狂犬病毒PRV低于最低检测限(0. 500LgTCID50/0. 1ml)，三个批次病毒经辐照后滴度减低值分别为第一批彡5. 71TCID50/0. Iml第二批彡5. 87TCID50/0. Iml第三批彡5. 79TCID50/0. Iml ；钴60辐照处理前后样品病毒滴度值差异见表2 表2骨松骨钴60辐照灭活猪伪狂犬病毒结果权利要求1.一种，其特征在于包括以下步骤(1)用指示病毒感染动物源性生物材料，然后测定动物源性生物材料中的病毒滴度值；(2)将受指示病毒感染的动物源性生物材料进行一定剂量的钴60辐照处理，测定处理后材料的病毒滴度值；(3)若辐照处理前后动物源性生物材料中的病毒滴度差值大于4LgTCID50/0.1ml，则采用该辐照剂量是有效的；若灭活处理前后动物源性生物材料中的病毒滴度差值小于或等于4LgTCID50/0. 1ml，则需要增大辐照剂量。2.根据权利要求1所述的，其特征在于所述的指示病毒为猪伪狂犬病毒、猪细小病毒、科萨奇病毒3型或合胞病毒。3.根据权利要求1所述的，其特征在于所述的动物源性生物材料为骨松骨。全文摘要本专利技术公开了一种，该方法包括以下步骤1、用指示病毒感染动物源性生物材料，然后测定材料中的本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：钱垂文，王一飞，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：
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