本发明专利技术涉及三种基于铕(III)与氯磺酰化四齿β-二酮配位体形成的荧光配合物及其应用。三价铕离子与三种氯磺酰化四齿β-二酮类配位体：1，2-二(1”，1”，1”，2”，2”，3”，3”-七氟-4”，6”-己二酮-6”-基-对苄基)-4-氯磺酰基苯、1，2-二(1”，1”，1”，2”，2”-五氟-3”，5”-戊二酮-5”-基-对苄基)-4-氯磺酰基苯及1，2-二(1”，1”，1”-三氟-2”，4”-丁二酮-4”-基-对苄基)-4-氯磺酰基苯所形成的荧光配合物。三种氯磺酰化四齿β-二酮类配位体结构式为：三种探针在弱碱性缓冲溶液中与含有氨基的蛋白质、氨基酸、肽、核酸等生物分子共价键合而用于这些分子的荧光标记，用于时间分辨荧光免疫分析等生化测定。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种三种基于铕(III)与氯磺酰化四齿β - 二酮配位体形成的荧光配合物及其应用，具体地说是三种可用于生物分子标记的三价铕离子与氯磺酰化四齿β-二酮的荧光配合物的制备及其在时间分辨荧光生化检测中的应用。
技术介绍
稀土离子(包括Eu3+、Tb3+、Sm3+、Dy3+)荧光配合物具有非常特殊的荧光性质，如超长的荧光寿命，200纳米以上的Mokes位移及尖锐的荧光发射光谱，从而被作为生物分子的荧光标记探针而广泛地应用于时间分辨荧光生化分析
作为一种高灵敏度的生化分析技术，时间分辨荧光生化分析法如时间分辨荧光免疫分析法、时间分辨荧光核酸杂交分析法及时间分辨荧光生物成像分析法已在临床医学检测、生命科学及环境科学等领域得到了许多成功地的应用。在时间分辨荧光生化分析技术中，最关键的步骤之一是在测定前需要对一些生物分子如抗体、抗原、蛋白质及核酸等用稀土荧光配合物探针进行标记。到目前为止，可用于生物分子荧光标记的稀土配合物荧光探针主要包括三价铕离子与β-二酮类配位体的荧光配合物及三价铕及铽离子与芳香胺类配位体的荧光配合物(文献1 :I. Hemmila,V.-M. Mukkal a, Crit. Rev. Clin. Lab. Sci. , 2001, 38,441 ；文献 2 :J. L. Yuan, G.L.Wang, Trends Anal. Chem.，2006，25，490)。相对于三价稀土的芳香胺类配合物荧光标记探针来说，由于三价铕离子的二酮类配合物荧光标记探针具有发光效率更高，且合成比较简单及成本低廉的优点，这类探针的研制对于开拓时间分辨荧光生化分析技术的更广泛应用具有十分重要的实际意义。基于上述原因，近年来几种氯磺酰基化的四齿β-二酮类配位体包括4，4’ - 二 (1 ”，1，，，1”，2 ”，2 ”，3 ”，3 ” -七氟-4 ”，6 ” -己二酮-6 ” -基)氯磺酰基-邻二苯基苯(简称 BHHCT)(文献 3 J. L. Yuan, K. Matsumoto, H. Kimura, Anal. Chem.，1998，70，596)，4， 4，- 二 (1，，，1”，1”，2”，2”-五氟-3”，5”-戊二酮-5”-基)氯磺酰基-邻二苯基苯(简称 BPPCT)(文献 4 :R. Connally, D. Veal, J. Piper, FEMS Microbiol. Ecol.，2002，41，239)， 4，4，-bis(l”，r，，r，-三氟-2”，4”_ 丁二酮-4”-基)氯磺酰基-邻二苯基苯(简称 BTBCT)(文献 5 :F. B. Wu, C. Zhang, Anal. Biochem.，2002，311，57)，1，10-二 0”-氯磺酰基-1，，1”-联苯-4，-基)-4，4，5，5，6，6，7，7_ 八氟癸烷-1，3，8，10-四酮(简称 BCD0T) (文献 6 :J. L. Yuan, K. Matsumoto, Anal. Sci.，1996，12，695)，1，10-二(8，-氯磺酰基-二苯并噻吩-2，-基)-4，4，5，5，6，6，7，7_八氟癸烷-1，3，8，10-四酮(简称BC0T)(文献7 J. L. Yuan, K. Matsumoto, J. Pharm. Biomed. Anal.，1997，15，1397)及 1，10- 二(5，-氯磺酰基-噻吩-2，-基)-4，4，5，5，6，6，7，7-八氟癸烷-1，3，8，10-四酮(简称 BCT0T)(文献 8 F. B. Wu, S. Q. Han，C. Zhang, Y. F. He, Anal. Chem.，2002，74，5882)，被先后研制了出来。这几种配位体不仅可与三价铕离子形成稳定的强荧光性配合物，其氯磺酰基还可与含有氨基的生物分子共价键合，进而对生物分子进行荧光标记，其中最具有代表性及应用价值，并且已经被商品化的是BHHCT。申请人近年来的研究工作还表明，三价铕离子的BHHCT配合物(简称BHHCT-Eu3+)不仅在生物标记方面具有很好的直接应用价值，其在功能性纳米稀土荧光材料的制备及复杂样品的时间分辨荧光生物成像测定方面也具有很好的应用价值(文献 9 :M. Q. Tan, Ζ. Q. Ye, G. L. Wang, J. L. Yuan, J. Mater. Chem.，2004，14,2896 ；文献 10 J. Wu, Ζ. Q. Ye, G. L. Wang, D. Jin, J. L. Yuan, Y. F. Guan, J. Piper, J. Mater. Chem. ，2009,19,1258)。需要指出的是，虽然以BHHCT-Eu3+为代表的几种四齿β - 二酮-铕(III)荧光配合物生物标记探针已经被研制了出来，但现有的稀土荧光配合物生物标记探针种类仍然十分有限，商品化的探针试剂价格昂贵，很大程度上制约了时间分辨荧光生化分析技术的发展与应用。另外，如何通过对四齿二酮配位体的结构优化与改良来研制具有更好荧光性能的四齿β-二酮-铕(III)荧光配合物生物标记探针也是十分必要的。本专利技术在对配位体结构设计的基础上，合成出了三种新型氯磺酰化的四齿二酮-铕(III)荧光配合物生物标记探针，在利用探针对蛋白质分子进行标记的基础上，建立了该探针在时间分辨荧光免疫测定技术及时间分辨荧光生物成像测定技术中的应用方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供三种新型的三价铕离子与氯磺酰化四齿二酮的荧光配合物生物标记探针，并将其用于蛋白质等生物分子的荧光标记及时间分辨荧光生化测定。本专利技术的技术方案如下以三价铕离子与三种氯磺酰化四齿β - 二酮类配位体所形成的荧光配合物为生物分子标记探针，其中所述三种氯磺酰化四齿二酮类配位体的结构为第一种当R 取 C3F7 =BHHBCB, BTBBCB0 为 1，2_ 二 (1”，1”，1 ”，2 ”，2 ”，3 ”，3，，-七氟-4”，6” -己二酮-6” -基-对苄基)-4-氯磺酰基苯；第二种当 R 取 C2F5 =BPPBCB ；BPPBCB 为 1，2_ 二(1”，1”，1”，2”，2” -五氟 _3”，5 ” -戊二酮-5 ” -基-对苄基)-4-氯磺酰基苯；权利要求1.三种基于铕(III)与氯磺酰化四齿β-二酮配位体形成的荧光配合物，其特征在于 是以三价铕离子与三种氯磺酰化四齿β - 二酮配位体所形成的荧光配合物，所述三种氯磺酰化四齿β-2.应用权利要求1所述的荧光配合物，其特征在于在？11值>8的弱碱性缓冲溶液中通过氯磺酰化四齿β-二酮配位体与含有氨基的生物分子的共价结合反应而对生物分子进行标记，标记生物分子经分离纯化后进一步与三价铕离子反应得到铕(III)荧光配合物标记的生物分子，进而用于各种荧光测定。3.一种根据权利要求2所述的应用，其特征在于，三价铕荧光配合物的生物标记探针试剂或含有其标记生物分子后的试剂盒。全文摘要本专利技术涉及三种基于铕(III)与氯磺酰化四齿β-二酮配位体形成的荧光配合物及其应用。三价铕离子与三种氯磺酰化四齿β-二酮类配位体1，2-二(1”，1”，1”，2”，2”，3”，3”-七氟-4”，6”本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：袁景利，张琳，叶志强，王桂兰，
申请(专利权)人：大连理工大学，
类型：发明
国别省市：
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