【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学领域，涉及马尾松针叶总RNA和基因组DNA同时提取的方法。
技术介绍
马尾松是我国南方重要的用材树种，其常规育种取得了较大进展，但其分子育种一直进展缓慢，开展马尾松分子水平上的基础性技术开发很有必要。高效提取植物总RNA和基因组DNA是进行Northern印迹、3' -RACE,5' -RACE以及高质量cDNA文库构建和Southern杂交、PCR扩增的首要条件。虽然现在已有各种商品化的试剂盒分离植物总RNA和基因组DNA，但试剂盒只是针对总RNA或基因组DNA，分开单独提取，且价格昂贵，对于富含多糖、多酚类次生代谢物等植物也难以满足实验要求。当研究材料少或者珍贵稀有物种材料时，如果能从材料中同时提取总RNA和基因组DNA，不仅简化了实验步骤，节省植物材料，又降低实验成本和缩短时间，具有重要的现实意义。马尾松属于松科松亚属针叶树种，体内含有十分丰富的多糖多酚类次生代谢物， 严重影响到总RNA和基因组DNA的提取效果。目前虽有对松树总RNA和基因组DNA分别进行提取的方法研究的一些报道，但针对总RNA和基因组DNA同时提取的方法相关研究尚...
【技术保护点】
１．同时提取马尾松针叶总ＲＮＡ和基因组ＤＮＡ的方法，其特征在于包括以下步骤：（１）总ＲＮＡ提取：液氮研磨马尾松针叶，之后转移到预热的５ｍｌ ＣＴＡＢ缓冲液中，该ＣＴＡＢ缓冲液含有２％ＣＴＡＢ、２％ＰＶＰ、１００ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、２５ｍＭ ＥＤＴＡ、２Ｍ ＮａＣｌ、０．５ｇ／Ｌ亚精胺，使用前加入２％β－巯基乙醇，水浴加热，用的氯仿／异戊醇抽提两次，ＬｉＣｌ沉淀，上清液转移到新管，记为溶液１备用；沉淀用５００μｌ ＳＤＳ缓冲液溶解，５００μｌ氯仿／异戊醇抽提一次，乙醇沉淀，干燥后加水溶解，得总ＲＮＡ；所述ＳＤＳ缓冲液含有１．０Ｍ ＮａＣｌ、０．５％ ＳＤＳ、...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：季孔庶，王晓锋，何卫龙，夏诗宽，
申请(专利权)人：南京林业大学，
类型：发明
国别省市：84
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。