通过抑制针对沉默调节蛋白1的天然反义转录物来治疗沉默调节蛋白1(SIRT1)相关的疾病制造技术

寡核苷酸化合物调节沉默调节蛋白1(SIRT1)多核苷酸和其编码的基因产物的表达和/或功能。治疗与沉默调节蛋白1(SIRT1)有关的疾病的方法包括给患者施用设计以抑制SIRT1天然反义转录物的一种或多种寡核苷酸化合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】通过抑制针对沉默调节蛋白1的天然反义转录物来治疗沉默调节蛋白1(SIRT1)相关的疾病交叉引用本申请要求保护提交于2008年12月4日的美国临时申请第61/119,965号，和提交于2009年3月4日的美国临时申请第61/157,255号，以及提交于2009年11月6日的美国临时申请第61/259,072号的权益，所述申请案通过引用以其整体结合于本文中。专利
本专利技术的实施方案包括调节SIRT1和相关分子的表达和/或功能的寡核苷酸。专利技术背景DNA-RNA和RNA-RNA杂交对于核酸功能的许多方面(包括DNA复制、转录和翻译)而言为重要的。杂交对于探测特定核酸或者改变其表达的各种技术而言亦为主要的。反义核苷酸例如通过杂交到靶RNA来扰乱基因表达，从而干扰RNA剪接、转录、翻译和复制。反义DNA具有附加的特征，该特征为DNA-RNA杂合体充当核糖核酸酶H消化的底物，该活性存在于大多数细胞类型中。可将反义分子递送到细胞中，这与寡脱氧核苷酸(ODN)的情况一样，或者它们如RNA分子一样可由内源基因表达。FDA最近批准了一种反义药物，VITRAVENETM(用于治疗巨细胞病毒视网膜炎)，这反映了反义物具有治疗应用。专利技术概述提供本概述以呈现本专利技术的概述，从而简要地指出本专利技术的性质和实质。在理解以下的情况下提出本概述：其不会用于解释或限制权利要求的范围或含义。在一个实施方案中，本专利技术提供通过使用靶定天然反义转录物的任何区域的反义寡核苷酸来抑制天然反义转录物的作用，引起相应有义基因的增量调节的方法。本文也考虑天然反义转录物的抑制可通过siRNA、核酶和小分子来达到，认为所述siRNA、核酶和小分子在本专利技术的范围之内。一个实施方案提供在体内或体外调节患者细胞或组织中的SIRT1多核苷酸的功能和/或表达的方法，所述方法包括用长度为5-30个核苷酸的反义寡核苷酸接触所述细胞或组织，从而在体内或体外调节患者细胞或组织中的SIRT1多核苷酸的功能和/或表达，其中所述寡核苷酸与以下多核苷酸的反向互补序列具有至少50％的序列同一性，所述多核苷酸包含在SEQIDNO：2的核苷酸1-1028或SEQIDNO：3的核苷酸1-429、或SEQIDNO：4的核苷酸1-156或SEQIDNO：5的核苷酸1-593(图11)之内的5-30个连续核苷酸。在另一个优选的实施方案中，寡核苷酸靶定SIRT1多核苷酸的天然反义序列，例如如SEQIDNO：2-5所列的多核苷酸，以及其任何变体、等位基因、同源物、突变体、衍生物、片段和互补序列。反义寡核苷酸的实例如SEQIDNO：6-47所列。另一个实施方案提供在体内或体外调节患者细胞或组织中SIRT1多核苷酸的功能和/或表达的方法，所述方法包括用长度为5-30个核苷酸的反义寡核苷酸接触所述细胞或组织，其中所述寡核苷酸与SIRT1多核苷酸的反义物的反向互补序列具有至少50％的序列同一性；从而在体内或体外调节患者细胞或组织中SIRT1多核苷酸的功能和/或表达。另一个实施方案提供在体内或体外调节患者细胞或组织中SIRT1多核苷酸的功能和/或表达的方法，所述方法包括用长度为5-30个核苷酸的反义寡核苷酸接触所述细胞或组织，其中所述寡核苷酸与SIRT1反义多核苷酸的反义寡核苷酸具有至少50％的序列同一性；从而在体内或体外调节患者细胞或组织中SIRT1多核苷酸的功能和/或表达。在优选的实施方案中，一种组合物，所述组合物包含一种或多种与有义和/或反义SIRT1多核苷酸结合的反义寡核苷酸。在另一个优选的实施方案中，所述寡核苷酸包含一个或多个经修饰或取代的核苷酸。在另一个优选的实施方案中，所述寡核苷酸包含一个或多个经修饰的键。在又一个实施方案中，所述修饰核苷酸包含经修饰的碱基，该碱基包括硫代磷酸酯、甲基膦酸酯、肽核酸或锁定核酸(LNA)分子。优选地，所述修饰核苷酸为锁定核酸分子，包括α-L-LNA。在另一个优选的实施方案中，将所述寡核苷酸经皮下、肌内、静脉内或腹膜内给予患者。在另一个优选的实施方案中，将所述寡核苷酸以药物组合物形式给予。一种治疗方案，所述方案包括至少一次向患者给予反义化合物；然而，可将此治疗修改成在一段时间内包含多次给药。所述治疗可与一种或多种其它类型的疗法组合。在另一个优选的实施方案中，将所述寡核苷酸封装到脂质体中。其它方面描述于下文。通过引用的结合此说明书中提及的所有出版物、专利和专利申请书都通过引用结合于本文中，其程度如同具体且单独地指出将各个单独的出版物、专利或专利申请书都通过引用来结合一样。附图简述本专利技术的新颖特征在所附权利要求中具体地陈述。对本专利技术的特征和优点的更好理解通过参考列举说明性实施方案的以下详细描述来获得，其中利用了本专利技术的原理，以及其附图：图1显示针对SIRT反义物CV396200设计的寡核苷酸的实时PCR结果。该结果显示，HepG2细胞中SIRT1mRNA的水平在用针对sirtas设计的siRNA之一(sirtas_5，P＝0.01)处理后48h显著增加。在相同的样品中sirtasRNA的水平在用sirtas_5处理后显著减少，但在用sirtas_6和sirtas_7处理后不变，其也不影响SIRT1mRNA水平(图1B)。sirtas_5、sirtas_6和sirtas_7分别对应SEQIDNO：29、30和31。图2显示针对SIRT反义物CV396200的寡核苷酸步移(walk)的结果。实时PCR结果显示，HepG2细胞中SIRT1mRNA的水平在用针对sirtas设计的其中三种反义寡核苷酸处理后48h显著增加。CUR-0292至CUR-309分别对应SEQIDNO：6-23。图3显示HepG2(图3A)和Vero76细胞(图3B)中PS、LNA和2’OMe修饰的寡核苷酸的结果。实时PCR结果显示，HepG2细胞中SIRT1mRNA的水平在用针对SIRT1反义物的PS、LNA、2’OMe和2’OMemixmer设计反义核苷酸处理后48h显著增加。Vero细胞中SIRT1mRNA的水平在用针对SIRT1反义物的PS和LNA修饰反义寡核苷酸处理后48小时也增加。表示为CUR-0245、CUR-0736、CUR-0688、CUR-0740和CUR-0664的条分别对应SEQID24-28。图4显示猴脂肪活检的PCR结果。实时PCR结果显示，在来自施用以CUR-963(针对SIRT1反义物CV396200.1设计的寡核苷酸)的猴的脂肪活检中，SIRT1mRNA水平增加。CUR-963对应SEQID25。图5显示原代猴肝脏肝细胞的PCR结果。实时PCR结果显示，用CUR-0245(针对SIRT1反义物的寡核苷酸)处理后SIRT1mRNA水平增加。表示为CUR-0245的条对应SEQID24。图6显示针对SIRT反义物CV396200设计的寡核苷酸的结果。实时PCR结果显示，在针对SIRT1反义物CV396200设计的寡核苷酸之一中，HepG2细胞中SIRT1mRNA的水平显著增加。表示为CUR-1230、CUR-1231、CUR-1232和CUR-1233的条对应SEQIDNO：32-35。图7显示针对SIRT反义物CV428275设计的寡核苷酸的结果。实时PCR结果显示，在本文档来自技高网...

【技术保护点】
体外调节患者细胞或组织中沉默调节蛋白１（ＳＩＲＴ１）多核苷酸的功能和／或表达。性，所述多核苷酸包含在ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２的核苷酸１－１０２８或ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３的核苷酸１－４２９或ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：４的核苷酸１－１５６或ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：５的核苷酸１－５９３（图１１）之内的５－３０个连续核苷酸；从而在体内或１．一种在体内或体外调节患者细胞或组织中沉默调节蛋白１（ＳＩＲＴ１）多核苷酸的功能和／或表达的方法，所述方法包括：使所述细胞或组织与长度为５－３０个核苷酸的反义寡核苷酸接触，其中所述寡核苷酸与以下多核苷酸的反向互补序列具有至少５０％序列同一

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】US61/1199652008年12月4日1.靶定选自SEQIDNO：2的沉默调节蛋白1(SIRT1)多核苷酸天然反义物的区域的长度为约10至30个核苷酸的反义寡核苷酸在制备用于体内或体外增量调节患者细胞或组织中沉默调节蛋白1(SIRT1)多核苷酸的功能和/或表达的药物中的用途，其中所述反义寡核苷酸选自SEQIDNO：6、21-22和24-29，且其中所述寡核苷酸被以下至少一种修饰：硫代磷酸酯键、具有2’-O-甲氧基乙基的修饰糖部分和/或选自锁定核酸的修饰核苷酸。2.权利要求1的用途，其中沉默调节蛋白1(SIRT1)的表达和/或功能在体内或体外相比于对照增加。3.权利要求1的用途，其中所述反义寡核苷酸靶定核酸序列，所述核酸序列包括沉默调节蛋白1(SIRT1)多核苷酸的编码和/或非编码核酸序列。4.权利要求1的用途，其中所述反义寡核苷酸靶定与沉默调节蛋白1(SIRT1)多核苷酸有重叠和/或非重叠序列的天然反义多核苷酸。5.靶定选自SEQIDNO：2的沉默调节蛋白1(SIRT1)多核苷酸天然反义物的区域的长度为约10至30个核苷酸的反义寡核苷酸在制备用于体内或体外增量调节患者细胞或组织中沉默调节蛋白1(SIRT1)多核苷酸的功能和/或表达的药物中的用途，其中所述反义寡核苷酸选自SEQIDNO：6、21-22和24-29，并且包含一种或多种修饰，所述修饰包括：经修饰的糖部分、经修饰的核苷间键、经修饰的核苷酸和/或其组合。6.权利要求5的用途，其中经修饰的糖部分包括：2’-O-甲氧基乙基修饰的糖部分、2’-甲氧基修饰的糖部分、2’-O-烷基修饰的糖部分、或二环糖部分。7.权利要求5的用途，其中经修饰的核苷间键包括硫代磷酸酯、烷基膦酸酯、二硫代磷酸酯、烷基硫代膦酸酯、氨基磷酸酯、氨基甲酸酯、碳酸酯、磷酸三酯、氨基乙酸酯、羧甲基酯、和/或其组合。8.权利要求5的用途，其中所述寡核苷酸任选地具有至少一种经修饰的核苷酸，所述经修饰的核苷酸包括：肽核酸、锁定核酸(LNA)分子、阿糖核酸(FANA)、肽核酸(PNA)、其类似物或衍生物。9.长度为5-30个核苷酸的短干扰RNA(siRNA)寡核苷酸在制备用于体内或体外调节哺乳动物细胞或组织中沉默调节蛋白1(SIRT1)基因的表达和/或功能的药物中的用途，其中所述siRNA寡核苷酸是SEQIDNO：29。10.长度为约5-30个核苷酸的反义寡核苷酸在制备用于体内或体外增量调节哺乳动物细胞或组织中沉默调节蛋白1(SIRT1)基因的表达和/或功能的药物中的用途，所述反义寡核苷酸对编码沉默调节蛋白1(SIRT1)分子的多核苷酸的天然反义链特异，其中所述反义寡核苷酸选自SEQIDNO：6、21-22和24-29。11.一种合成的、经修饰的寡核苷酸，所述寡核苷酸的长度为约10至30个核苷酸并且特异于选自SEQIDNO：2的SIRT1基因的天然反义多核苷酸，所述寡核苷酸包含至少一种修饰，其中所述修饰包括至少一种下列核苷酸间键：烷基膦酸酯、硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、烷基硫代膦酸酯、氨基磷酸酯、氨基甲酸酯、碳酸酯、磷酸三酯、氨基乙酸酯、羧甲基酯、或其组合，其中与正常对照相比，所述寡核苷酸为在体内或体外与沉默调节蛋白1(SIRT1)分子杂交并增量调节其表达和/或功能的反义化合物，以及其中所述寡核苷酸选自SEQIDNO：6、21-22和24-29的活性寡核苷酸。12.权利要求11的寡核苷酸，其中所述修饰包括硫代磷酸酯核苷酸间键与至少一种选自下列的核苷酸间键的组合：烷基膦酸酯、二硫代磷酸酯、烷基硫代膦酸酯、氨基磷酸酯、氨基甲酸酯、碳酸酯、磷酸三酯、氨基乙酸酯、羧甲基酯、和/或其组合。13.权利要求11的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含至少一种硫代磷酸酯核苷酸间键。14.权利要求11的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含硫代磷酸酯核苷酸间键的骨架。15.权利要求11的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸任选地包含至少一种经修饰的核苷酸，所述经修饰的核苷酸包括：肽核酸、锁定核酸(LNA)分子、其类似物、衍生物和/或组合。16....

【专利技术属性】
技术研发人员：J·科拉德，
申请(专利权)人：欧科库尔纳有限责任公司，
类型：发明
国别省市：US