鉴定尿激酶型血纤蛋白溶解酶原激活剂（ｕｒｏｋｉｎａｓｅ ｔｙｐｅ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎａｃｔｉｖａｔｏｒ，ｕＰＡ）、基质金属蛋白酶９（ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ ９，ＭＭＰ９）和β－２－微球蛋白（β－２－ｍｉｃｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎ，β－２ＭＧ）为新颖的肝纤维化相关生物标记，及其在诊断肝纤维化中的用途。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于肝纤维化诊断的生物标记相关申请本申请要求2008年12月2日提交的美国临时申请61/119，077号的优先权，其内容通过全文提述并入本文。
技术介绍
肝纤维化涉及细胞外基质蛋白(extracellular matrix proteins)(例如胶原蛋白)在肝脏细胞上过度聚集而产生疤痕组织。其发生于大部分慢性肝脏疾病中，例如代谢性肝脏疾病及与那些乙肝或丙肝感染和饮酒(alcoholconsumption)相关的肝病。较严重的肝纤维化导致肝硬化(cirrhosis)、肝癌、肝衰竭(liver failure)与门静脉高压 (portal hypertension)。目前，肝活检(biopsy)是用来侦测肝纤维化和确认其严重度的最适方法。然而， 肝活检为有创性(invasive)步骤，并非理想诊断方法。基于纤维化相关血清生物标记的无创(non-invasive)血清学(serology)分析已被开发用来诊断肝脏纤维化。此分析的准确度与灵敏度非常依赖所使用的生物标记。因此， 鉴定具高灵敏度以区分纤维化患者与非纤维化人类的可靠生物标记是非常重要。
技术实现思路
本专利技术基于诊断肝纤维化的三种新颖血清生物标记，即尿激酶型血纤蛋白溶解酶原激活齐Ll (urokinase type plasminogen activator, uPA)、基质金属蛋白酶 9 (matrix metalloproteinases 9,MMP9 ；)禾Π β_2_ 微球蛋白(β -2-microglobulin, β -2MG)之非预期的鉴定。因此，本专利技术的一个方面特征为基于上列三种生物标记中一或多个的表达水平，且任选地结合一个或多个其他血清生物标记，例如谷氨酸草酰乙酸转胺酶 (glutamic oxaloacetic transaminase, GOP)、谷氨酸丙酮酸转氨酶(glutamic pyruvic transaminase, GPT)与甲胎蛋白(alpha-fetoprotein，AFP)以供诊断肝纤维化的方法。上述诊断方法包括至少四个步骤(i)自被怀疑具有肝纤维化的人类受试者(例如乙肝或丙肝病毒携带者，或具有酒精相关的肝病或代谢性肝病的患者)获得血样，(ii) 检测上述所列生物标记中的一个或多个在该血样中的表达水平，(iii)基于该表达水平计算其疾病分数，(iv)基于该疾病分数确定该个体是否具有纤维化。诊断方法在步骤(iv)之后可任选地包括另外的步骤(ν)基于该疾病分数与指示不同纤维化阶段(stage)的预先确认的截断值(cutoff value)进行比较来评估该个体的纤维化阶段。本文中使用的术语 “诊断”意指确认于受试者(例如，人类)中肝纤维化的存在与否或评估于受试者中的疾病程度。血样可为获得自血液的任何样本，如血清样本或血浆样本。该疾病分数可藉由判别函数分析(discriminant function analysis)、岭回归分析(ridge regression analysis)或对数回归分析(logistic regression analysis)对该生物标记表达水平进行分析运算。本专利技术的另一个方面特征为含有至少两种抗体(例如，完整的免疫球蛋白分子) 的诊断试剂盒，两种抗体之一为特异于uPA、MMP9或i3-2MG的抗体，而另一个则为特异于沾八、匪 9、0-21^、601\6 11或4 的抗体。此两种抗体具有不同的抗原特异性。优选地， 试剂盒基本上由上述提及的抗体所组成，即仅包含特异于待检测抗原(例如，纤维化相关生物标记)的抗体，以供诊断肝纤维化。在一个例子中，试剂盒含有抗-uPA抗体，抗-MMP9 抗体，以及抗-0-2MG抗体。本专利技术范围亦包含上述任何抗体在诊断肝纤维化中或在制造肝纤维化诊断试剂盒中的用途。本专利技术一个或多个实施方案的细节列举于以下的叙述中。自以下数个实施方案的详细叙述，以及自所附的权利要求会彰显本专利技术的其它特征或优点。具体实施方式在一方面，本专利技术与诊断肝纤维化的方法相关，其基于个体的uPA、MMP9、β _2MG、 其组合，或(a)uPA、MMP9、β-2MG中一种或多种和(b)包括一种或多种其他纤维化生物标记(例如GOP、GPT和AFP)的组合在血液中的浓度。此方法可施用于有需要的人类患者以确认该患者中肝纤维化的存在与否，或他或她的纤维化阶段。人类患者可为乙肝病毒或丙肝病毒的携带者，或具有与酒精相关的疾病(例如，脂肪肝(fatty liver)与酒精性肝炎 (alcoholich印atitis))、代谢性肝病或肝癌的患者。人类uPA具有两种同工型(isoform)，两者皆可用于本专利技术的诊断方法中。同工型1的GenBank登录号为NP_002649. 1 (18-0CT-2009)，而同工型2的GenBank登录号为 NP_001138503. 1 (18-0CT-2009)。其它两个新颖的标记，MMP9 与 β -2MG 的 GenBank 登录号分别为 NP_004985. 2 Q2-N0V-2009)和 NP_004039. 1 (25-0CT-2009)。为了实施本专利技术的方法，血样可获得自被怀疑具有肝纤维化的人类受试者且可藉由常规方法，例如ELISA与Westernblot来确定上述提及的生物标记中一个或多个的水平。对生物标记水平的数据进行合适的分析(例如，判别函数分析(discriminant function analysis)、对数回归分析(logistic regressionanalysis)、岭回归分析(ridge regression analysis) Κ 分分丰斤(principalcomponent analysis))以产生生物标记的血液分布(blood profile)的疾病分数(例如藉由数值的数字来表现)。可视需要将临床因素(例如年龄与性别)而置入考虑中。之后将疾病分数与区分肝纤维化有无的截断值(cutoff-value)，或者与区分不同纤维化阶段的一组截断值进行比较以评估该受试者是否具有肝纤维化，且若有，位于哪个病程中。截断值可藉由使用相同分析方法，分析在无纤维化的受试者中与在不同水平的肝纤维化患者中的相同生物标记的血液分布来确定。 例如，其可为介于无纤维化受试者的疾病分数与纤维化患者的疾病分数间的中点(middle point)ο下述为基于被鉴定为与不同程度纤维化相关的因素确定(determining)前述截断值的示例性步骤(1)将肝纤维化患者根据其疾病状况(例如纤维化阶段与风险因素)归类于不同群组；(2)确定在患者中可能与纤维化阶段相关的潜在因素；(3)藉由单变量分析(univariate analysis)来鉴定那些在不同患者群组间显著不同的潜在因子；(4)对这些经鉴定的因素进行判别函数分析、对数回归分析、岭回归分析或广义线性模型(generalized linear model)以评估在纤维化诊断中的各因素的独立值；(5)基于被鉴定的因素(包括纤维化相关生物标记，以及如果适用，临床因素)，建立判别、岭回归或对数回归模型(例如，公式)以计算疾病分数，和(6)基于表现各患者群组的疾病分数(例如，平均值)，与其它相关因素，例如敏感性、特异性、阳本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种在人类受试者中诊断肝纤维化（ｆｉｂｒｏｓｉｓ）的方法，包括：自被怀疑具有肝纤维化的人类受试者获得血样；检测该血样中尿激酶型血纤蛋白溶解酶原激活剂（ｕｒｏｋｉｎａｓｅ ｔｙｐｅｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ，ｕＰＡ）、基质金属蛋白酶９（ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ ９，ＭＭＰ９）和β－２－微球蛋白（β－２－ｍｉｃｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎ，β－２ＭＧ）中的一个或多个的表达水平；基于该表达水平计算疾病分数；和基于该疾病分数确定该个体是否具有纤维化。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：曾锱翎，
申请(专利权)人：财团法人工业技术研究院，
类型：发明
国别省市：71
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