抗体制造技术

本文一方面提供了会与ＴＳＨＲ结合并且会减少配体诱导的对所述ＴＳＨＲ的刺激、但对ＴＳＨＲ组成性活性没有作用的分离的人抗体分子，其中所述分离的人抗体分子具有抑制ＴＳＨ和Ｍ２２与所述ＴＳＨＲ结合的患者血清ＴＳＨＲ自身抗体的特性。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及可与促甲状腺素(TSH)受体(TSHR)反应的人单克隆自身抗体(MAb)。 一种人MAb (K1-18)具有结合TSHR并刺激TSHR环AMP活性的能力。另外一种人MAb (Kl-70) 具有结合TSHR并且阻断由TSH和TSHR刺激抗体介导的对环AMP的刺激的能力。这两种人 MAb都是从表现出甲状腺机能减退临床症状的患者的外周淋巴细胞中分离得到的。
技术介绍
甲状腺的功能由垂体分泌的TSH调节(kkudlinski MW, et al，2002. Physiological Reviews 82 :473-502)。TSH与甲状腺细胞表面上的TSHR结合，并且这是引发TSHR信号级联反应的第一步。TSH与TSHR的结合导致对甲状腺激素甲状腺素(T4)和三碘甲状腺原氨酸CH)的形成和释放的刺激。涉及循环中的T4和T3和由下丘脑分泌的促甲状腺素释放激素(TRH)的水平的反馈机制控制TSH的释放，TSH转而控制甲状腺刺激作用和甲状腺激素在血清中的水平(kkudlinski MW, et al，2002，文献见上文)。TSHR是 G蛋白偶联的受体，由三个结构域组成富含亮氨酸的重复结构域(LRD)、切割结构域(CD) 和跨膜结构域(TMD) (Nunez Miguel R，et al 2004. Thyroid 14:991-1011)。本领域详尽地记载了一些自身免疫甲状腺疾病(AITD)患者出现了可与TSHR反应的自身抗体(Rees Smith B，et al 1988. Endocrine Reviews 9:106—121)。有两种主要的 TSHR自身抗体(TRAb)类型刺激型和阻断型。甲状腺刺激型自身抗体与TSHR结合并且模仿TSH的作用从而刺激甲状腺产生高水平的T4和T3 ；这些自身抗体还被描述为具有刺激活性或 TSH激动活性的 TRAb (Rees Smith B，et al 2007. Thyroid 17 :923-938)。甲状腺功能的所述反馈控制机制在甲状腺刺激自身抗体存在下不再有效，并且患者表现出亢进甲状腺临床症状，特征是在血清中有过多的甲状腺激素及其代谢产物。这种病症被称为格雷夫斯病(Graves，s disease)。具有刺激活性的TRAb还可与眶后组织中的TSHR相互作用并且促使格雷夫斯氏病眼部症状的出现。作为强力甲状腺刺激物起作用的人单克隆自身抗体 (hMAb TSHRl ；也被称作 M22)已经在 WO 2004/050708A2 中详细描述。如 W02008/025991A1 所述，已通过χ射线结晶学在2.55人分辨率下解析了与TSHR LRD结合的M22 Fab复合物的结构。对所述TSHR-M22复合物结构的分析为参与相互作用的受体残基和刺激自身抗体残基提供了详细信息。为测量TSHR 抗体，已在 ELISA 中使用 M22(Z0phel，K et al, Clinica Chimica Acta 2009 and Zophel, K et al, Clinica Chimica Acta 2008)。阻断型TRAb比刺激性自身抗体出现在AITD患者中的频率更小。阻断型自身抗体与TSHR结合，防止TSH与所述受体结合，但是不能刺激TSHR活性。结果甲状腺激素(T4 和T3)的形成和分泌大量减少，而且具有该类型TRAb的患者可表现出甲状腺活化不足的临床症状(甲状腺机能减退)。阻断型自身抗体被称为具有阻断活性或TSH拮抗活性的 TRAb (Rees Smith B, et al 1988 文献见上文，和 Rees Smith B, 2007 et al，文献见上文)。具有阻断活性的TRAb当存在于孕妇血清中时会穿过胎盘并且可阻断胎儿甲状腺中的TSHR，导致新生儿甲状腺机能减退和严重的发育后果。此外，具有阻断活性的TRAb可存在于患病母亲的乳汁中找到并且可在婴儿中引起临床甲状腺机能减退(Evans C,et al 2004 European Journal of Endocrinology 150:265-268)。具有 TSH 拮抗活性的 TSHR 人自身抗体(5C9)已在WO 2008/099185A1中详细描述。患有AITD并具有循环TRAb的患者的临床症状与自身抗体对TSHR活性的作用即TRAb是否引起刺激或阻断有关。但是，已经提出在一些患者中刺激和阻断TRAb的混合物可同时出现，总的临床表现与一种类型的TRAb的更高的浓度和/或活性相关(Rees Smith B et al 1988文献见上文；Furmaniak J et al 1993 Springer Seminars in lmmunopathology 14 :309-321 and Schott M et al 2005 Trends in Endocrinology and Metabolism 16 :243-248)。此夕卜，朿Ij激或阻断 TRAb 的浓度和/或活性在同一患者的病程中有所变化，并且已报道，随着时间的变化，在同一患者中确实有从甲状腺机能减退到甲状腺机能亢进的症状波动(Rees Smith B et al 1988文献见上文；Furmaniak J and Rees Smith B 1993 文献见上文和 Schott M et al 2005 文献见上文)。但是，使用目前可用的生物测定来分开具有不同生物学活性的TRAb或者区分血清样本中的这些TRAb的尝试是困难的。最近，W02006/016121A1中描述的专利技术提供了用使用在R255突变的TSHR的生物测定来区分刺激型或阻断型TRAb的方法。人重组TSH (Thyrogen )是根据cGMP规范生产的重组蛋白形式的人TSH制品，并被美国FDA批准作为一种诊断残留或复发甲状腺癌的辅助物(Dimtas LH,Cooper DS 2008 Thyroid 18:509-516)。治疗后监测甲状腺癌患者包括用重组人TSH刺激甲状腺残余物或转移灶，之后进行甲状腺扫描和/或血清甲状腺球蛋白水平测量(Dimtas LH and Cooper DS 2008文献见上文)。人绒毛膜促性腺激素是在怀孕时产生的激素，具有轻微的甲状腺刺激作用(Grossmann M et al 1997 Endocrine Reviews 18 :476-501)。对刺激型或阻断型 TRAb的表征以及它们与TSHR如何相互作用对于诊断和治疗不同形式的AITD的改良方法的开发是至关重要的。此外这些研究对于开发用于治疗与对TSHR的自身免疫应答相关的疾病的新方法至关重要。重组人TSH以外的强力甲状腺刺激物的可利用性会提供检测监测和治疗甲状腺癌患者的新选择。相关的在先专利申请W02004/050708A2中描述的专利技术提供了具有强刺激活性的人单克隆自身抗体 (MAb)特性及其与TSHR的相互作用的详情。如W02008/025991A1所述，该自身抗体(M22)与所述TSHR LRD之间的相互作用已从对所述两个分子的复合物的X-射线衍射分析(2. 55 A 分辨率)中在分子水平上得到解析。W02006/016121A1公开了包括至少一个点突变的突变 TSH本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．分离的人抗体分子，所述分离的人抗体分子会与ＴＳＨＲ结合并且会减少配体诱导的对所述ＴＳＨＲ的刺激，但对ＴＳＨＲ组成性活性没有作用，其中所述分离的人抗体分子具有患者血清ＴＳＨＲ自身抗体抑制ＴＳＨ和Ｍ２２与所述ＴＳＨＲ结合的特性。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：B·瑞斯史密斯，
申请(专利权)人：RSR有限公司，
类型：发明
国别省市：GB