本发明专利技术提供与前蛋白转化酶枯草溶菌素９（ｐｒｏｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｎｖｅｒｔａｓｅｓｕｂｔｉｌｉｓｉｎ ｋｅｘｉｎ ｔｙｐｅ ９）（ＰＣＳＫ９）结合的拮抗抗体、其抗原结合部位和适体。本发明专利技术亦提供以肽为标靶的抗体，其中所述抗体与ＰＣＳＫ９结合。本发明专利技术进一步提供一种获得这些抗体及抗体编码核酸的方法。本发明专利技术另关于使用这些抗体及其抗原结合部位以减少低密度脂蛋白（ＬＤＬ）－胆固醇量及／或供治疗及／或预防心血管疾病（其包括治疗高胆固醇血症）的治疗方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及拮抗细胞外前蛋白转化酶枯草溶菌素9 (proproteinconvertase subtilisin kexin type 9) (PCSK9)的活性的抗体，例如全长抗体或其抗原结合部位)、肽及适体，所述活性包括PCSK9与低密度脂蛋白(LDL)受体(LDLR)的相互作用。更具体地说， 本专利技术涉及包含拮抗剂PCSK9抗体、肽和/或适体的组合物，及使用这些抗体和/或肽和/ 或适体以作为药物的方法。拮抗剂PCSK9抗体、肽及适体可被治疗性地使用以降低血液中 LDL-胆固醇水平，且可被用于预防和/或治疗胆固醇及脂蛋白代谢异常，包括家族性高胆固醇血症、致动脉粥样化的异常血脂症、动脉粥样硬化症及更普遍地心血管疾病(CVD)。
技术介绍
美国有数百万人面临心脏病的风险且导致心脏事件。CVD和潜在动脉粥样硬化症是所有人口族群的首要死因，尽管可提供针对其多风险因子的治疗。动脉粥样硬化症是动脉疾病，在工业化国家导致与许多死亡有关的冠状动脉心脏病。数种冠状动脉心脏病的风险因子现已被发现包括异常血脂症、高血压、糖尿病、抽烟、不良饮食、不活动及压力。最具临床相关性及常见的异常血脂症的特征为伴随高胆固醇血症的脂蛋白(极低密度脂蛋白(VLDL)和LDL)增加，不论是否有高三酸甘油脂血症(Fredrickson et al. ,1967,N Engl J Med. 276 :34-42,94-103,148-156，215-225 和 273-281)。一直以来有关 CVD 的需求明显地未被满足，因为即使使用他汀(statins)治疗(目前动脉粥样硬化症的标准治疗)仍有 60至70%的心血管事件、心脏病发作及中风发生率。另外，新的准则建议应达到更低的LDL 量以防止高风险病患发生早熟性CVD。PCSK9又名NARC-1，是在若干形式的家族性高胆固醇血症中被发现的一种基因突变蛋白质。PCSK9被合成为酶原，其于内质网中进行模体(motif)LVFAQ的自体催化处理。 族群试验显示，若干PCSK9突变是“获得功能”的突变且发生于体染色体显性高胆固醇血症的个体，然而其他“失去功能(LOF) ”的突变则与血浆胆固醇减少有关。此族群的发病率及死亡率试验清楚地显示，降低PCSK9的功能显著地减少心血管疾病的风险。在治疗CVD上具有显著重要性的是，LOF突变使人对他汀敏感化，能以较低剂量得到疗效(因此改善与安全性及耐受性有关的风险)且相较于现行治疗可能达到较低的血浆胆固醇水平。PCSK9主要由肝细胞分泌至血浆。小鼠中PCSK9的基因调节证实PCSK9具有调节血脂肪的能力，且暗示其下调(down-regulate)肝脏LDLR蛋白量的作用。PCSK9下调LDLR蛋白所凭借的机制及所发生的部位尚未被清楚建立。当过度表达时，PCSK9可在肝细胞内作用，同时可作为LDLR的分泌性配位体。强有力的证据显示，细胞外PCSK9与细胞表面LDLR结合且促使LDLR于胞内部位降解。然而，PCSK9亦有可能与 LDLR发生相互作用，当二者于内质网(ER)内翻译且经由内体结构被运往细胞膜时。马克斯韦尔等人(Maxwell et al. , 2005, Curr. Opin. Lipidol. 16 167-172)的研究显示，PCSK9 介导性LDLR内摄作用和降解不会被蛋白酶体抑制剂改变，也不会受到不同类型的溶酶体及非溶酶体蛋白酶的调节。二个天然发生的家族性高胆固醇血症突变S127R和DU9G已被报告为自加工及分泌缺陷，因为这些突变蛋白质在转染细胞培养基中的量大幅降低或无法侦测。然而这些突变显示增进下调LDLR的能力，与彼等可在高血浆LDL的个体中识别吻合(Homer et al.，2008，Atherosclerosis 196 :659-666 ；Cameron et al.，2006 Human MolecularGenetics 15 :1551-1558 ；Lambert et al. ,2006,TRENDS in Endocrinologyand Metabolism 17:79-81)。由于这些突变很明显地不会被分泌至细胞外但仍下调LDLR，因此强烈建议胞内作用部位具生理重要性。在本专利技术以前从本领域可取得的信息仍无法得知，导入以抗体、肽或适体为基础的PCSK9拮抗剂至血液循环以选择性拮抗细胞外PCSK9，是否能有效减少高胆固醇血症及相关CVD的发生率，且如果可以的话，PCSK9拮抗剂的何种性质为所述活体内有效性的所必箭ο
技术实现思路
本专利技术涉及选择性地与PCSK9相互作用且抑制PCSK9功能的拮抗剂抗体、肽及适体。本专利技术首次证明特定PCSK9拮抗剂类可于活体内有效降低血液中胆固醇。在一个实施方式中，本专利技术提供一种经分离的PCSK9拮抗剂，其包含与PCSK9相互作用且对受试对象施用时降低所述受试对象血液中LDL-胆固醇水平的抗体、肽或适体。所述拮抗剂可为抗体，例如单克隆抗体或人抗体、人源化抗体、或嵌合抗体。在另一个实施方式中，本专利技术提供一种经分离的抗PCSK9抗体，所述抗体与PCSK9 特异性结合且当利用文中所揭示的Η 7细胞的LDLR下调试验进行活体外测量时，所述抗体是PCSK9对LDLR水平的介导效应的完全拮抗剂。在另一个实施方式中，本专利技术提供一种经分离的抗体，所述抗体拮抗以活体外 PCSK9与LDLR结合所测量的PCSK9与LDLR的细胞外相互作用，且对个体施用时降低所述个体血液中LDL胆固醇水平。优选的是，所述抗体辨识人PCSK9上的表位，所述表位与和LDLR 的EGF样结构域相互作用的PCSK9表面重迭超过约75% JBKwon et al.，2008，PNAS，105 1820-1825 所述。在另一个实施方式中，本专利技术提供一种抗体，所述抗体辨识PCSK9的第一表位，所述第一表位与经单克隆抗体辨识的第二表位重迭，所述单克隆抗体选自由保藏于美国菌种保存中心(ATCC)的登录号PTA-8986的杂交瘤细胞系所产生的5A10、由保藏于美国菌种保存中心的登录号PTA-8985的杂交瘤细胞系所产生的4A5、由保藏于美国菌种保存中心的登录号PTA-8984的杂交瘤细胞系所产生的6F6)或由保藏于美国菌种保存中心的登录号 PTA-8983的杂交瘤细胞系所产生的7D4。在另一个实施方式中，本专利技术提供一种抗人PCSK9抗体，其中所述抗体辨识人 PCSK9上的表位，该表位包含PCSK9氨基酸序列SEQ IDNO 53的氨基酸残基153-155、194、 195、197、237-239、367、369、374-379和381。优选的是，该人PCSK9上的抗体表位不包含一个或多个氨基酸残基 71、72、150-152、187-192、198-202、212、214-217、220-2洸、243、 255-258、317、318、347-351、372、373、380、382 和 383。在另一个实施方式中，本专利技术提供一种与PCSK9特异性结合的抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO :8 (SYYMH)所示的氨基酸序列的VH互补决定区1(⑶Rl)、具有SEQID NO 9 (EISPFGGRTNYNEKi7KS)所示的氨基酸序列的本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种ＰＣＳＫ９的拮抗剂，其包含与ＰＣＳＫ９相互作用且对受试对象施用时降低所述受试对象血液中低密度脂蛋白（ＬＤＬ）胆固醇的经分离的抗体、肽或适体。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：梁鸿，
申请(专利权)人：瑞纳神经科学公司，
类型：发明
国别省市：US
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