本发明专利技术涉及对抗抗人源ｓｏｎｉｃ ｈｅｄｇｅｈｏｇ同系物（Ｓｈｈ）的靶向结合剂以及这种试剂的用途。更具体而言，本发明专利技术涉及定向于Ｓｈｈ的全人源单克隆抗体。所述的靶向结合剂可用于治疗与Ｓｈｈ的活性和／或过量产生有关的疾病，并且可以用作诊断工具。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及对抗sonic hedgehog同系物(Shh)的靶向结合剂以及这种试剂的用途。更具体而言，本专利技术涉及定向于Sih的全人源单克隆抗体。所述的靶向结合剂可用于治疗与Hedgehog蛋白质的活性和/或过量产生有关的疾病，并且可用作诊断工具。
技术介绍
在果蝇中，Hedgehog被鉴定为胚胎图式形成的调节剂。在哺乳动物中，hedgehog 家族有三个成员，分别是Sonic hedgehog(Shh), Indian hedgehog(Ihh)以及 Desert hedgeh0g(Dhh)，它们通过影响细胞生长和分化而指定组织的图式形成并调节器官的动态平衡。Hedgehog蛋白质为12次跨膜跨越受体latched(人类中为Ptch，小鼠中为Ptc)的配基，通常，其抑制了 GCPR类跨膜蛋白质Smoothened(SMO)的功能。当SMO与Shh结合时， 减轻了 Patched对SMO的抑制，从而使SMO通过转录因子的Gli家族的成员来进行信号传导。转录的活化使得诸如Glil和Ptch之类的多个途径的成分得以合成。Hedgehog/SMO信号传导途径的失调与肿瘤的发生有关。在基础细胞癌、成神经管细胞瘤以及横纹肌肉瘤中描述了使Ptch失活或使Smo发生构成性活化的突变。据推测，这些突变导致所述的途径发生了构成性的活化，并驱使肿瘤的发生。此外，在多种类型的肿瘤 (例如前列腺癌、胰腺癌、小细胞肺癌、结肠癌、食管癌、胃部的癌症、黑素瘤以及多发性骨髓瘤)中，描述了 Shh的过表达。在多数情况下，随着Shh的过表达，观察到了 Glil和Ptch的正相调节，从而支持了这样的结论，即，在肿瘤细胞中构成性途径的活化可能在某种程度上以配基依赖性的方式促进肿瘤的发生。这种模式得到了以下观察结果的支持，即，在体内， 在LNCaP前列腺癌细胞中Sih的异常过表达增强了肿瘤的生长(Fan 2004. Endocrinology 145 :3961)。已经提出了多种模式来解释Shh的过表达是怎样导致癌症的发展的。在第一种模式中，肿瘤细胞异常的过表达aih，其在肿瘤细胞的表面上与Ptch结合时产生了自分泌的信号，并诱导细胞增殖。在第二种模式中，肿瘤细胞所分泌的Shh活化了基质细胞中的SMO 信号传导，其转而导致会增强肿瘤细胞生长的因子的产生。已经显示出肿瘤细胞表达Sih 会诱导基质细胞中Glil的表达，这支持了上述模式(Fan et al. 2004. Endocrinology 145 3961 ；Yauch et al. 2008. Nature =455,406-410)。此外，小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)的共移植(coimplantation)促进了肿瘤的形成以及表达Shh的非最佳数量的HT19肿瘤细胞的生长(Yauch et al. 2008. Nature :455,406-410)。由于靶向删除MEF中的SMO会导致基本上更小的肿瘤，所以MEF的增强肿瘤生长的能力需要完整的Sih/SMO信号传导。最后，Shh 涉及多种组织中干细胞的增殖和分化(Taipale and Beachy. 2001. Nature 411:349-354)。 如此，已经提出Shh可以促进肿瘤发生，或通过驱使癌症干细胞自我更新而在经化疗和/或放疗之后再度恶化。在使用环巴胺(由corn Iilly得到的所述途径的天然存在的拮抗剂，其通过与 SMO定向结合起作用)的临床前模式中，已经证明了肿瘤细胞为了生长和存活而对Sih/Smo信号传导的依赖。已经报道，环巴胺会在体外和体内抑制多种肿瘤细胞系的生长，包括黑素瘤和前列腺癌、胰腺癌以及小细胞肺癌。环巴胺的抑制效果表现为特定性的，这是因为虽然它抑制了 22RV-1前列腺癌的异种移植物的生长，但是它不会抑制稳定过表达下游转录因子 Glil 的 22RV-1 肿瘤的生长(Karhadkar et al. 2004. Nature 431:707)。最近，非相关的小分子SMO拮抗剂(HhAntag)显示出会抑制同种移植物成神经管细胞肿瘤的生长，其中 SMO途径通过Ptcl的突变以及过表达Shh的人源异种移植物肿瘤而被构成性的活化(Romer et al.2004. Cancer Cell 6 :229 ；Yauch et al.2008. Nature :455,406-410)。已经描述了被激发对抗大鼠Sih的N末端信号传导结构域的抗体(其与人源Shh 会发生交叉反应)(Ericson et al. 1996. Cell 87 :661-673)。这种抗体被称为5E1，已经用于证明特定性地封阻Shh途径(其可以通过Glil报告基因来测定，与抑制得自食管、胃和胰腺的已经确立的肿瘤细胞的增殖有关)。5E1还降低了已经确立的小细胞肺癌(SCLC) 细胞系和得自一代胰腺异种移植物的肿瘤细胞在体外的生长和发育能力(Watkins et al. Nature, 422 :313-317(2003) ；Berman et al. 2003. Nature 426 :846)。最后，5E1 已经显示出会在体内抑制HT55和HT-四结肠肿瘤异种移植物的生长(Yauch et. 2008. Nature)。Sih/SMO拮抗剂作为单一的试剂除了抑制肿瘤细胞的生长和发育能力之外，还可以增强化疗和放疗的抗肿瘤活性(Chen et al. Cell Cycle, 6 :1826-1830 (2007)) Sims-Mourtada et al. (Clin Cancer Res. ,12 :6565-6572, (2006))报导了当 SEG-1 食管腺癌异种移植物在经过放疗治疗之后再次生长时，Glil阳性细胞的数量急剧增加。Glil着色细胞在Ki67阳性细胞增多之前出现，表明Shh信号传导可以促进小种群的难治性细胞(例如公认的癌症干细胞)的扩增，最终导致肿瘤的再生长。使用紫杉醇和环巴胺对SEG-I的异种移植物进行结合治疗与使用任一种单独的试剂进行的治疗相比会得到较高的效力。上文引用的证据支持了这样的基本原理，S卩，使用定向对抗Sih的中和性抗体来拮抗aih/sMo的信号传导途径对于多数的人类癌症而言可以是有效的治疗方法。因此，需要鉴定Shh信号传导的新型抑制剂。专利技术概述本专利技术涉及特异性地与Shh结合并抑制Shh的生物学活性的靶向结合剂。本专利技术的实施方案涉及特异性地与Shh结合并抑制Shh与其受体latched (例如Patched-I和/ 或f^tChed2)相结合的靶向结合剂。在一个实施方案中，本专利技术的抗体对Shh具有特异性。本专利技术的实施方案涉及特异性地与Shh结合并抑制a!h与PatChed-I和/或 Patched-2的结合的靶向结合剂。在一个实施方案中，与缺少靶向结合剂的条件下所发生的结合情况相比，所述的靶向结合剂抑制了至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25 %、至少30 %、至少35 %、至少40 %、至少45 %、至少50 %、至少55 %、至少60 %、至少 65 %、至少70 %、至少75 %、至少80 %、至少85 %、至少90 %、至少95 %的Shh与Patched-I本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种与ｓｏｎｉｃ Ｈｅｄｇｅｈｏｇ同系物（Ｓｈｈ）特异性结合的经分离的抗体，其中所述的抗体表现出一种或多种以下所述的性质，包括：通过ＢＩＡｃｏｒｅ方法，以小于１２０ｐＭ的ＫＤ与人源Ｓｈｈ相结合；抑制使用Ｓｈｈ诱导的细胞的造骨细胞分化；表现为在ｃｏｌｏ２０５异种移植物肿瘤中，将小鼠Ｇｌｉ１ ｍＲＮＡ的水平降低大于８０％；表现为在ｃｏｌｏ２０５异种移植物肿瘤中，将小鼠Ｐａｔｃｈｅｄ－１ ｍＲＮＡ的水平降低大于７０％；或者表现为不结合Ｄｅｓｅｒｔ Ｈｅｄｇｅｈｏｇ。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：D·詹金斯，
申请(专利权)人：米迪缪尼有限公司，
类型：发明
国别省市：US
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