本发明专利技术涉及使用停靠与锁技术生成细胞因子－抗体复合物的方法和组合物。在优选实施方案中，该细胞因子－ＭＡｂ ＤＮＬ复合物包含一个附加在两个ＡＤ（锚定结构域）部分上的ＩｇＧ抗体，和分别附加在一个ＤＤＤ（停靠和二聚化结构域）部分上的四个细胞因子。该ＤＤＤ部分形成结合于ＡＤ部分的二聚体，所得到ＤＤＤ比ＡＤ的比例为２∶１。该细胞因子－ＭＡｂ复合物表现出增强的药物动力学，相对于裸的细胞因子或聚乙二醇化的细胞因子有显著增长的血清半衰期。相对于单独的细胞因子、单独的抗体、未轭合的细胞因子加上抗体或者合并有不相关抗体的细胞因子－ＭＡｂＤＮＬ复合物，该细胞因子－ＭＡｂ复合物也在体内与体外表现出显著增强的效力。尽管其他抗体和细胞因子已被用于生成ＤＮＬ复合物，最优选地，该复合物包涵轭合于四个ＩＦＮ－α２ｂ部分的抗－ＣＤ２０ＩｇＧ抗体。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及保留体外活性并表现出增强的体内效力的多聚细胞因子的设计和 生成。通过将基于细胞因子的DDD部分与重组IgG进行位点特异性轭合，使用停靠与锁 (dock-and-lock, DNL)方法生成锚定于人源化单克隆抗体(MAb)的四聚细胞因子，其中该 抗体两条重链中的每条重链与一个AD部分融合，并且该DDD部分二聚体与每个AD部分结 合。在优选的实施方案中，人源化抗-⑶20MAb(hA20)与干扰素-α 2b (IFN α 2b)轭合生成 包涵四个拷贝的IFN α 2b的20-2b DNL构建物。该细胞因子-MAb构建物可用于治疗多种 疾病状态，并且相对于单独的母体MAb、单独的细胞因子、未轭合的MAb与细胞因子的组合、 以及轭合在对照MAb上的细胞因子，表现出针对靶标细胞比如肿瘤细胞更大的效力。
技术介绍
据报道干扰素-a(IFNa )在动物癌症模型 O^errantini 等，1994，J Immunol 153 4604-15)和人类癌症患者(Gutterman 等，1980，Ann Intern Med93 :399-406)中均具有 抗肿瘤活性。IFNa可发挥多种直接的抗肿瘤效应，包括下调癌基因，上调肿瘤抑制子基 因，通过增加肿瘤表面MHC I类蛋白的表达而增强免疫识别，加强凋亡，以及对化疗剂的增 敏(Gutterman 等，1994，PNAS USA 91 :1198-205 ；Matarrese 等，2002，Am J Pathol 160 1507-20 ；Mecchia 等，2000，Gene Ther 7 :167-79 ；Sabaawy 等，1999，Int J Oncol 14: 1143-51 ；Takaoka 等 2003, Nature 424 :516-23)。对于一些肿瘤，IFNa 可通过活化 STATl而具有直接和有效的抗增殖效应(Grimley等，1998Blood 91:3017-27)。间接地，IFNa 可抑制血管生成(Sidky和Borden，1987，Cancer Res 47:5155-61)以及刺激宿主免疫细 胞，其可能对整体抗肿瘤反应至关重要但却已在很大程度上被低估(Belardelli等，1996， ImmunolToday 17:369-72)。IFNa 通过对骨髓细胞(Raefsky 等 1985，J Immunol 135 2507-12 ；Luft 等 1998，J Immunol 161 :1947_53)、T 细胞(Carrero 等 2006，J Exp Med 203 933-40 ;Pilling 等，1999，Eur J Immuol 29 1041-50)、和 B 细胞(Le 等 2001，Immunity 14:461-70)的作用而对免疫反应具有多效性影响。作为先天性免疫系统的重要调节剂， IFNa诱导树突细胞的快速分化和活化(Belardelli等2004，Cancer Res 64 :6827_30 ； Paquette等，1998，J Leukoc biol 64 :358_67 ;Santini等，2000，J Exp med 191 1777-88) 并增强细胞毒性、迁移、细胞因子生成以及NK细胞的抗体依赖性细胞毒性(ADCC) (Biron 等，1999，Annu Rev Immunol 17 189-220 ；Brunda 等 1984，Cancer Res 44 :597_601)。将IFNa用作癌症疗法的期望主要因为其短暂的循环半衰期和系统毒性而受到 阻碍。聚乙二醇化形式的IFNa 2表现出增长的循环时间，从而增加其生物效力(Harris和 Chess，2003，Nat Rev Drug Discov 2 :214_21 ;0sborn 等，2002，J Pharmacol Exp Ther 303:540-8)。将IFNa融合到单克隆体(MAb)上可提供与聚乙二醇化相似的益处，包括降 低肾清除，增强可溶性和稳定性，和显著增加的循环半衰期。其即时的临床上的益处为需 要更小给药频率和更少剂量，允许了延长的治疗浓度。使用肿瘤相关抗原(TAA)的MAb将 IFNa靶向定位到肿瘤上可在限制其系统浓度的同时显著增加其肿瘤堆积和滞留，从而增 加其治疗指数。IFNa的肿瘤浓度的增加可以增强其直接抗增殖、凋亡和抗血管生成的活 性，并可初免和集中(primeand focus)自身免疫性反应。事实上，在小鼠的研究中使用同 源鼠IFNa-分泌转基因肿瘤证实了由局部集中IFNa引起的增强的免疫反应(Ferrantini 等，2007，Biochimie 89:884-93)。⑶20为使用MAb-IFN α作为B细胞淋巴瘤治疗的一种具有吸引力的候选TAA。结 合使用利妥昔单抗(rituximab)的抗CD20免疫疗法为针对淋巴瘤的最成功的疗法之一， 具有相对低的毒性(McLaughlin等，1998，J Clin Oncol 16:2825-33)。由于利妥昔单抗 是嵌合抗体，在一些患者群体中可表现出免疫原性并在初始给药时需要相当长输注时间 (Cheson等，2008，NEJM 359 :613_26)，一种对CD20靶向的更好的候选物为人源化的MAb veltuzumab (Stein 等，2004，Clin Cancer Res 10:2868-78)。现阶段处于临床评估的利妥昔单抗和IFNa联合疗法已显示出比只用利妥昔单 抗更强的效力(Kimby 等，2008，Leuk Lymphoma 49 :102_12 ；Salles 等，2008，Blood 112 4824-31)。所述研究已证实该联合疗法的一些益处和与IFNα相关的不足。除了每周输注 利妥昔单抗，通常在几个月内每周三次给患者施用IFNa，患者将忍受为IFNa疗法相关的 常见副作用的类似流感的症状，并因此限制其耐受剂量。抗CD20MAb-IFNa轭合物可以允 许以较低剂量较不频繁地施用单独药剂，限制或消除副作用，并可导致更优越的效力。本领域存在对表现出增强的体内效力、降低的毒性和更优的药物动力学性质的改 良的抗体_细胞因子轭合物的需要。专利技术概述本专利技术公开了使用停靠与锁(DNL)方法(Chang等，2007，Clin CancerRes 13 5586s-91s)制备细胞因子和抗体轭合物的方法和组合物，其生成适于体内应用的稳定并确定的轭合物。在优选实施方案中，该DNL复合物包含四个拷贝的细胞因子，比如IFN α 2b，其 分别附加在二聚化和停靠结构域(DDD)部分上。该DDD部分自发地二聚化，并且每个DDD 二聚体与一个锚定结构域(AD部分)结合。在更优选的实施方案中，AD部分附加于IgG抗 体每条重链恒定区的C末端，得到四聚的细胞因子-IgG DNL复合物。然而，本领域技术人员将会认识到，可在所要求保护的方法和组合物的范畴内构 建和使用其他类型的具有不同结构和不同细胞因子对抗体或抗体片段比例的DNL复合物， 比如2009年3月3日提交的第12/396,965号美国专利申请；2006年3月24日提交的第 11/389，358本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种细胞因子－抗体ＤＮＬ（停靠与锁）复合物，包含：ａ）附加在ＤＤＤ（二聚化和停靠结构域）部分的细胞因子部分，其中所述ＤＤＤ部分具有来自于蛋白激酶Ａ的二聚化和停靠结构域的肽序列；和ｂ）附加在ＡＤ（锚定结构域）部分的抗体部分，其中所述ＡＤ部分具有来自于ＡＫＰＡ（Ａ－激酶锚定蛋白）的锚定结构域的肽序列；其中所述ＤＤＤ部分形成结合于一个所述ＡＤ部分的二聚体以形成所述复合物。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：张健行，
申请(专利权)人：IBC药品公司，
类型：发明
国别省市：US
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