与糖尿病肾病相关的尿及血清的生物标记制造技术

尿液及血清中生物标记在诊断糖尿病肾病、评估糖尿病肾病阶段、监测糖尿病肾病发展及评估糖尿病肾病的治疗有效性中的用途。该生物标记包括尿中α－２－ＨＳ－醣蛋白前体、尿中α－１抗胰蛋白酶、尿中α－１酸性醣蛋白、尿中骨桥蛋白、血清中骨桥蛋白、前述之片段及前述之组合。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】与糖尿病肾病相关的尿及血清的生物标记相关申请本申请要求2009年1月28日提交的美国临时申请No. 61/147778的优先权，将该申请的内容通过提述以其整体并入本文。
技术介绍
糖尿病肾病(diabetic nephropathy ；DN)是伴随长期糖尿病而发展的肾脏疾病。 糖尿病肾病造成异常的液体滤过及尿中白蛋白分泌增加，最终导致肾衰竭。糖尿病肾病在早期并无症状。因此，难以侦测此疾病的开始。事实上，糖尿病肾病目前的诊断是根据微量白蛋白尿(microalbuminuria)的发展，当肾脏伤害已经发生时，微量白蛋白尿才发生。缺乏早期诊断检测，使得无法有效治疗早期阶段的糖尿病肾病。因此，鉴定出有效诊断早期糖尿病肾病的可信赖生物标记是非常重要的。
技术实现思路
本专利技术基于非预期的发现，数个尿及血清中蛋白质及其片段，不论单独或组合，相较于未患有糖尿病肾病者，在糖尿病肾病患者中有不同表现。这些蛋白质分子因此为诊断早期糖尿病肾病的有效生物标记。因此，本专利技术的一专利技术方面特征在于诊断个体中糖尿病肾病的方法。该方法包括至少两步骤(i)确认怀疑患有糖尿病肾病的个体中生物标记的程度；及(ii)根据该生物标记的程度，评估该个体是否患有糖尿病肾病。相较于未患有糖尿病肾病者，该生物标记的程度增加表示该个体患有糖尿病肾病。该诊断方法所使用的生物标记为下列的四种蛋白质分子的其中之一⑴第一尿中蛋白质分子，为尿中α-2-HS-醣蛋白前体 (precursor α-2-HS-glycoprotein)或其具有至少10个氨基酸的片段，例如成熟的尿中 α-2-HS-醣蛋白前体 VVSLGSPSGEVSHPRKT(SEQ ID NO :1)或 MGV VSLGSPSGEVSHPRKT (SEQ ID NO 2)；(ii)第二尿中蛋白质分子，为尿中α-1抗胰蛋白酶(a-lantitrypsin) 或其具有至少10个氨基酸的片段，例如KGKWERPFEVKDTEEEDF(SEQ ID NO 3)， MIEQNTKSPLFMGKVVNPTQK(SEQ ID NO 4), EDPQGDAAQKTDT SHHDQDHPTFNKITPNLAE(SEQ ID NO :5)，或EDPQ⑶AAQKTDTSHHDQDHPTFNKITPNLAEFA(SEQ ID NO 6)；(iii)第三尿中蛋白质分子，为尿中α-l酸性醣蛋白(a-Iacid glycoprotein) 或其具有至少10个氨基酸的片段，例如GQEHFAHLLILRDTKTYMLAFDVNDEKNWGLS(SEQ ID NO: 7)；及(iv)血清中蛋白质分子，为骨桥蛋白(osteopontin)或其具有至少10个氨基酸的片段，例如 YPDAVATWLNPDPSQKQNLLAPQNAVS SEETNDFKQETLPSK (SEQ ID NO 8)或 KYPDAVATW LNPDPSQKQNLLAPQTLPSK(SEQ ID NO :9)。上述之诊断方法可还包括，在前述评估步骤之后，使该生物标记程度与糖尿病肾病状态(是否为早期或晚期)形成关联的步骤。当该生物标记为(i)或(iv)蛋白质分子时，相对于未患有糖尿病肾病个体，该生物标记的程度增加表示为糖尿病肾病的晚期。对于该生物标记为(ii)或(iii)蛋白质分子，当与表示糖尿病肾病早期及晚期的生物标记预测参考程度相比，该生物标记的程度可显示糖尿病肾病的状态。另一专利技术方面，本专利技术特征在于一种评估个体(例如人患者或实验室动物)糖尿病肾病的治疗有效性的方法。该方法包括确认个体中治疗前及治疗后的(i)、(ii)、(iii) 或(iv)蛋白质分子程度，基于治疗后该生物标记的程度变化，评估该治疗的有效性。假设相较于治疗前的生物标记程度，该生物标记在治疗后的程度维持相同或下降，则表示该治疗为有效。另一专利技术方面，本专利技术特征在于一种确认糖尿病肾病阶段的方法，包括至少 4个步骤(i)取得来自怀疑患有糖尿病肾病的个体的尿液样本及任选地取得其血清样本；(ii)确认前述生物标记之一的程度；(iii)基于该生物标记的程度，计算疾病级数(score)；及(iv)基于该疾病级数与预定为不同糖尿病肾病阶段的截取值(cutoff value)之比较，评估该个体的糖尿病肾病阶段。该方法中，上述计算步骤可藉由岭回归 ^1/ (ridge regression angilysis)、@ : (factor analysis) > ^SO 0 ^ 析法(discriminant function analysis)、及逻辑回归分析法(logistic regression analysis) 。前述确认糖尿病肾病阶段的方法中使用的生物标记，由下列5种蛋白质分子中的至少两种所构成前述的(i) (iv)蛋白质分子，及蛋白质分子(v)，为前述的尿中骨桥蛋白或其片段。在一实施例中，该生物标记由前述5种蛋白质分子所组成。在另一实施例中， 该生物标记由前述(i) (iii)及(ν)蛋白质分子中的至少2种所组成。或者，该生物标记由上述5种蛋白质分子中的至少两种以及一种或多种的临床因子所组成，临床因子例如年龄、性别、HbAlc、白蛋白/肌酸酐比例(ACR)、及肾小球过滤率 (GFR)。另一专利技术方面，本专利技术提供一种监测糖尿病肾病发展的方法，基于上述任一种生物标记的程度。该方法包括在2星期至12个月的期间(例如2- 个星期或3-12个月)， 从怀疑患有糖尿病肾病的个体中取得前后2次尿液样本及任选地取得前后2次血清样本， 确认样本中该生物标记之一的程度，根据该生物标记程度计算疾病级数(disease score), 及基于该疾病级数，评估该个体中糖尿病肾病的发展。当较晚获得的样本之疾病级数高于较早获得的样本之疾病级数时，表示糖尿病肾病恶化。上述之生物标记也可用于评估糖尿病肾病的治疗有效性。如果该生物标记之一的治疗后程度，相较于相同生物标记在治疗前的程度，维持不变或降低时，则该治疗为有效。本专利技术更进一步提供试剂盒，于前述之方法使用。本专利技术的试剂盒包括2、3或4种具有不同抗原特异性的抗体。此述抗体可与⑴α -2 -HS-醣蛋白 (α -2-HS-glycoprotein)、(ii) α -1 抗胰蛋白酶(α -!antitrypsin)、(iii) α -1 酸性醣蛋白(α-lacid glycoprotein)及(iv)骨桥蛋白(osteopontin)的任一种结合。在一实施例中，该试剂盒仅包含与欲侦测的抗原(例如与糖尿病肾病相关的生物标记)特异性结合的抗体，以实施前述之任一种方法。因此，该试剂盒基本上由上述抗体所组成。本专利技术之范围也包括与下列肽其中之一特异性结合的分离的抗体MGVVSLGSPSGEVSHPRKT(SEQ ID NO :2)、KGKffERPFEVKDTEEEDF(SEQ ID NO :3)、MIEQNTKSPLFMGKVVNPTQK(SEQ ID NO :4)、EDPQ⑶AAQKTDTSHHDQDHPTFNKITPNLAEFA(SEQ ID NO :6)、GQEHFAHLLILRDTKTYMLADVNDEKNWGLS(SEQ ID NO :7)、YPDAVATffLNPDPSQKQ NLL本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种诊断个体中糖尿病肾病的方法，包括：确认怀疑为患有糖尿病肾病的个体中生物标记的程度，该生物标记选自下组：（ｉ）第一尿中蛋白质分子，为α－２－ＨＳ－醣蛋白前体（ｐｒｅｃｕｒｓｏｒα－２－ＨＳ－ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ）或其具有至少１０个氨基酸的片段；（ｉｉ）第二尿中蛋白质分子，为尿中α－１抗胰蛋白酶（α－１ａｎｔｉｔｒｙｐｓｉｎ）或其具有至少１０个氨基酸的片段；（ｉｉｉ）第三尿中蛋白质分子，为尿中α－１酸性醣蛋白（α－１ａｃｉｄ　ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ）或其具有至少１０个氨基酸的片段；及（ｉｖ）血清中蛋白质分子，为骨桥蛋白（ｏｓｔｅｏｐｏｎｔｉｎ）或其具有至少１０个氨基酸的片段；以及根据该生物标记的程度评估该个体是否患有糖尿病肾病；其中，相较于未患有糖尿病肾病个体，该生物标记的程度增加时，表示该个体患有糖尿病肾病。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：林微雅，
申请(专利权)人：财团法人工业技术研究院，
类型：发明
国别省市：71