用于增强免疫应答的方法和含有ｍＴＯＲ抑制剂的组合物技术

本发明专利技术提供了用于增强对抗原免疫反应的组合物和方法。组合物包含分离的ＣＤ８＋Ｔ细胞群和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（ｍＴＯＲ）的抑制剂。获取在个体中增强对抗原免疫应答的方法需要给予个体所述抗原和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（ｍＴＯＲ）的抑制剂。ＣＤ８＋Ｔ细胞也可用于过继细胞转移（ＡＣＴ）治疗。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术主要涉及调控免疫应答，并且更具体地，涉及采用哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)抑制剂来增强个体中细胞介导的免疫应答。
技术介绍
在临床和临床前研究中正在积极评估癌症疫苗。理论上，招募免疫系统来攻击癌症是有吸引力的。免疫系统能够识别肿瘤特异性抗原，并且消除病变细胞，而对正常组织没有影响。然而，用癌症疫苗来治疗患者的成功应用还难以实现，并且在增强癌症疫苗的功效方面的研究正在进行中，这一需求尚未得到满足。专利技术简述本专利技术提供了增强疫苗功效的组合物和方法。在一个实施方式中，本专利技术提供了一种增强个体中对一种抗原的免疫应答的方法。所述方法包括给予个体所述抗原以及mTOR 抑制剂。mTOR抑制剂和抗原可以作为或不作为同一组合物的组分给予，并且可以同时或依次给予。优选在给予抗原后给予所述mTOR抑制剂。在另一个实施方式中，本专利技术提供了一种包含分离的CD8+T细胞群和mTOR抑制剂的组合物。所述组合物还含有⑶8+T细胞所特异性针对的抗原，并且还可包含佐剂，例如 IL-12。免疫应答增强可以包括针对个体中带有所述抗原的细胞的细胞介导的免疫应答增强。应答增强可包括表现出针对带有所述抗原细胞的细胞毒性的CD8+T细胞增加。免疫应答增强也可或任选地包括表现出维持能力提高和/或对所述抗原的抗原召回应答提高的CD8+T细胞，或特异性针对所述抗原的效应CD8+T细胞的数量增加和/或活力提高。这些免疫应答的组合还可由本专利技术的组合物和方法来引发。免疫应答增强可以表现为在个体中抑制表达所述抗原的细胞的生长，表达抗原的细胞死亡，和/或通过延长个体的存活，或本领域技术人员已知的任何其他方式。在各种实施方式中，用本专利技术的方法和组合物治疗的个体是需要增强对一种抗原的免疫应答的个体。所述个体可为此前没有接受过mTOR抑制剂的个体。这种个体的例子包括但不限于已经做过针对如器官移植的免疫抑制治疗的个体。在一个实施方式中，个体为需要治疗癌症的个体。预期本专利技术可以适用于与任何mTOR抑制剂一起使用，且适用于增强针对能被递呈给CD8+T细胞的任何抗原的细胞介导的免疫应答(其可包含或不包含体液免疫应答和/或先天免疫应答)。 附图简述附图说明图1、引导天然CD8+T细胞进行I型效应细胞成熟的指令增强且维持mTOR的活力。 (A和B)评估用BOK(抗原+B7. 1) (士) IL-12刺激的OT-I细胞，(A)用ICS评估IFN- γ和(B)细胞毒性(初级，刺激后72小时；次级，二次刺激后M小时)<0. 0002。(C-E) 用抗原(Ag)(所述抗原为包含在kr lie Ile后有Asn Phe Glu、其后有Lys和Lue的肽 (OVAp)，用量为 IOnM)加 B7. 1 (100 μ g/ml)(抗原+B7. 1) (士)IL-12 Qng/ml)刺激的 0Τ-Ι 细胞，在指定时间点用ICS评估(C)磷酸化的mTOR，⑶磷酸化的S6K，以及(E)磷酸化的核糖体S6。为了抑制mTOR，在加入抗原、细胞因子前30分钟加入雷帕霉素(20ng/ml)。数据代表具有类似结果的至少3个独立实验(数据用平均值士 SEM表示)。图2、IL-12通过PII和STAT4增强抗原诱导的mTOR活性。(A和B)以ICS评估用抗原+B7. 1(士)IL-12和LY^4002(10yM)刺激的OT-I细胞， (A) 48小时时磷酸化的Akt，或⑶在指定时间点磷酸化的S6K。(C)野生型或Matf—OT-I 细胞在有或没有IL-12存在下用抗原+B7. 1刺激，在指定时间点分析磷酸化的S6K ；***p < 0.0001。所示实验代表具有类似结果的三个独立实验。(数据用平均值士 SEM表示)。图3、持续的mTOR活性是⑶8+T细胞的遗传性I型效应细胞分化所必需的。(A-C) 在抗原+B7. 1 (士)IL-12和雷帕霉素刺激的OT-I细胞中用ICS评估初级期和次级期的(A) IFN- Y ； ‘ **p < 0. 0002 ；η. s.，不显著；(B)溶细胞活力；或(e)用ICS评估72小时时的颗粒酶B表达。(D和E)用抗原+B7. 1 (士) IL-12刺激OT-I细胞，并且在刺激12小时后加入雷帕霉素，以评估细胞的(D)48小时时的S6K磷酸化，和(E)在初级期和次级期的IFN-Y 产生。所示实验代表具有类似结果的至少3个(A和B)和2个(C-E)独立实验(数据用平均值士 SEM表示)。图4、IL-12-增强的mTOR磷酸化是⑶8+T细胞的T_bet决定的I型效应细胞成熟所必需的。(A-C)用抗原+B7. 1 (士) IL-12和雷帕霉素刺激的OT-I细胞，(A)用RT-PCR评估在指定时间点的T-bet的mRNA，⑶用ICS评估在指定时间点的T_bet蛋白表达，以及(C)在抗原召回前后用ICS评估T-bet蛋白表达。**p< 0. 0035 ；***p < 0. 0005。(D)用抗原 +B7. 1 (士)IL-12刺激野生型和TbUl+ OT-I细胞，并且评估在初级期和次级期的IFN- γ 产生。***ρ < 0. 0001。(Ε和F)用抗原+Β7. 1 (士)IL-12和雷帕霉素刺激的OT-I细胞，转入 T-bet-ER逆转录病毒载体(士)4-HT (IOnM)，并且用ICS评估(E) T_bet蛋白表达，以及(F) 在次级期(168小时)的IFN-y. (G和H)用抗原+B7. 1(士)胰岛素(lU/ml)和雷帕霉素刺激的OT-I细胞，用ICS评估(G) 48小时时的S6K磷酸化以及(H) 72小时时的T_bet表达。 所示实验代表至少3个(A，B, D，E和F)和2个(C，G和H)具有类似结果的独立实验(数据用平均值士 SEM表示)。图5、抑制mTOR促进CD8+T细胞中持续的Eomes表达和记忆表型标记物。(A和B)用抗原+B7. 1 (士)IL-12和雷帕霉素刺激OT-I细胞，(A)在指定时间点用RT-PCR评估Eomes的 mRNA，以及(B)用ICS评估在72小时时的Eomes蛋白表达。Y <0. 03。(C)用抗原+B7. 1(士) IL-12和雷帕霉素刺激的OT-I细胞，转入T-bet-ER逆转录病毒载体(士)4_HT (IOnM)，并且在96小时时评估Eomes蛋白表达。(D)用抗原+B7. 1 (士)IL-12和雷帕霉素刺激OT-I细胞，并在72小时时评估CD62L、CD69、KLRGl、CD127和CD122表达。(E)在指定时间点的Bcl-2 和Bcl-3mRNA表达。(F和G)用抗原+B7. 1 (士) IL-12和雷帕霉素刺激OT-I细胞72小时， 洗涤 2 次，并且存在(F)IL-7(10ng/ml)，*p < 0.02，和(G) IL-15 (10ng/ml). *p < 0. 02 下再放置72小时，在144小时时计算细胞回收百分比(％)。所示实验代表具有相似结果的3 个独立实验(数据用平均值士 SEM表示)。图6、抑制mTOR增加了记忆CD8+T细胞产生。用抗原+B7. 1 (士)IL-12和雷帕霉素刺激OT-I细胞(Thyl. 1+)，在72小时收取细胞，并且过继本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种包含分离的ＣＤ８＋Ｔ细胞群和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（ｍＴＯＲ）的组合物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：H·金，
申请(专利权)人：健康研究股份有限公司，
类型：发明
国别省市：US