肺炎克雷伯氏菌nifH基因的克隆与表达方法技术

肺炎克雷伯氏菌nifH基因的克隆与表达方法，它涉及nifH基因的克隆与表达方法。方法：提取肺炎克雷伯氏菌的基因组DNA；PCR扩增获得目的基因nifH，与载体连接，获得重组质粒pMD18-T-nifH；提取质粒，双酶切后构建重组质粒PET28a-nifH，再转化大肠杆菌，获得含有质粒PET28a-nifH的大肠杆菌；然后接种到含卡那霉素的LB液体培养基中培养，获得培养菌液；然后加入到含卡那霉素的LB液体培养基中培养，然后加IPTG培养，进行诱导表达；通过SDS-PAGE分析，发现有特异性条带出现即完成。本发明专利技术对开发人畜无毒、环保的杀白蚁生物药剂具有重要的理论意义和现实意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及nifH基因的克隆与表达方法。
技术介绍
白蚁Termite属于节肢动物门昆虫纲有翅亚纲等翅目的昆虫，是较为古老的社会性害虫。每年因白蚁危害建筑物和农作物所造成的经济损失达千亿美元以上。现有的杀灭白蚁的药剂均为化学药剂，故都有很大的毒副作用，造成严重的环境污染。利用生物技术开发具有高效、无毒、残效期长、对环境影响小的白蚁生物防治剂成为未来白蚁防治剂的主要方向。Termite属于典型的寡氮营养型生物，其肠道固氮微生物的固氮作用是白蚁体内氮素的主要来源。目前，科学家已从白蚁科、鼻白蚁科、木白蚁科、原白蚁科的部分属中克隆得到了大量nifH基因序列。系统发育分析表明，同一属的白蚁肠道共生固氮菌nifH基因具有更近的亲缘关系，不同白蚁肠道共生固氮菌nifH基因多样性明显不同。虽然已知白蚁肠道nifH基因具有较高多样性，但仅有少量的nifH基因能够被优先转录并表达出来，大多数的nifH基因不能被表达。因此，在白蚁肠道内克隆和表达nifH基因，对于了解白蚁的固氮机制和白蚁的生物防治提供新的途径。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供。按以下步骤进行一、取3mL肺炎克雷伯氏菌HUB本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．肺炎克雷伯氏菌ｎｉｆＨ基因的克隆与表达方法，其特征在于肺炎克雷伯氏菌ｎｉｆＨ基因的克隆与表达方法按以下步骤进行：一、取３ｍＬ肺炎克雷伯氏菌ＨＵＢ－ＩＶ－００４的菌液，以１２０００ｒ／ｍｉｎ离心１ｍｉｎ，弃去上清，然后按照ＴＩＡＮＧＥＮ公司的细菌基因组ＤＮＡ提取试剂盒的操作方法提取基因组ＤＮＡ；二、以步骤一中提取的基因组ＤＮＡ为模板进行ＰＣＲ扩增，获得目的基因ｎｉｆＨ，然后与ｐＭＤ１８－Ｔ载体连接，获得重组质粒ｐＭＤ１８－Ｔ－ｎｉｆＨ；三、按照ＴＩＡＮＧＥＮ质粒小提试剂盒的操作方法提取重组质粒ｐＭＤ１８－Ｔ－ｎｉｆＨ和ｐＥＴ２８ａ质粒，然后用ＥｃｏＲ　Ｉ和Ｎｄｅ　Ｉ分别对重组质粒ｐＭＤ１８－...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：赵凯，张小燕，
申请(专利权)人：黑龙江大学，
类型：发明
国别省市：93