本发明专利技术公开了一种海洋链霉菌L131及其抗真菌活性的应用。一种海洋链霉菌L131，分离自海泥样品中，纯化培养基为Bennett培养基，海洋链霉菌L131菌落凸起，表面褶皱，有白色孢子，产淡黄色可溶性色素。本发明专利技术海洋放线菌L131经抑菌圈法测试显示其发酵液对番茄叶霉菌具有显著的抑制作用。本发明专利技术还公开了此海洋放线菌的具有对番茄叶霉菌有抑制作用的代谢物粗提物的制备方法。该制备方法通过控制海洋链霉菌L131的发酵条件，使用大孔吸附树脂对抑制番茄叶霉菌的活性物质进行分离纯化。抗菌代谢物制备简单易行，成本低，属效果较好的绿色农药。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及微生物领域，特别是海洋放线菌L131，另外还涉及菌株代谢物的制法和在生物农药研究领域的应用。
技术介绍
海洋环境占据地球总面积的70. 8%，蕴含着丰富的微生物资源，海洋独特的环境特点，如低温、低营养、高压、高盐度等，造就了海洋微生物特有的代谢方式和代谢产物，放线菌因具有复杂的形态分化过程而具有合成种类丰富的次级代谢产物的能力。近年来，随着分子生物学技术的发展，越来越多的海洋放线菌被发现，许多源于海洋放线菌的次级代谢产物也被鉴定出具有抗肿瘤，抗菌，抗疟，杀虫功能以及酶抑制剂等多种生物活性功能。海洋放线菌所产生的结构新颖、功能多样的活性物质成为天然活性产物和新药开发的重要来源。番茄是全世界栽培最为普遍的果菜之一。番茄叶霉病(/^/ria Zi^ra)是威胁保护地番茄生产的一种严重病害，番茄叶霉病主要危害叶片，严重时危害茎、花、果实等。病斑多生于叶背，出现不规则形或椭圆形淡黄色退绿斑，叶背面初生霉层，以后霉层变为灰褐色或黑褐色绒状。果实染病后，在果蒂附近形成圆形黑色病斑，硬化稍凹陷，不能食用。因此， 该病菌的感染可直接导致番茄减产，并严重影响番茄品质，此病一旦发生，会迅速蔓延，给番茄生产带来巨大的损失。针对番茄叶霉病在生产上常使用化学农药进行防治，田间喷药是控制番茄叶霉病流行的重要手段，通常采用粉尘或烟雾施药和喷雾方法。粉尘施药常用的粉尘剂有5%百菌清粉尘剂、5%加瑞农粉尘剂、7%叶面净粉尘剂、25%斯克WP等，常用的烟剂有45%百菌清烟剂。喷雾施药多用洲武夷霉素水剂150倍液、50%多菌灵可湿性粉剂500倍液、70%甲基托布津可湿性粉剂800-1000倍液、47%加瑞农可湿性粉剂600-800倍液等。化学药剂的防治效果明显，防治速度快，但长期使用会使对化学药剂的依赖性越来越大，田间一个生长季节用药次数不断增加，使病原菌对使用农药抗药性不断增强，防治效果不断下降，同时药剂残留还会造成环境的污染，影响人类的健康。因此，必须探索新的高效安全防治途径。近年来，生物防治研究逐渐成为热点，生物防治的应用日益成为综合治理植物病虫害的重要手段，但目前获得的高效、低毒、低残留的抗真菌类抗生素仍然较少，因此新的抗真菌类抗生素及高效的发酵工艺，将成为保护生态环境，实现农业可持续发展的有力保证。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一株海洋放线菌链霉菌(份r印sp. )L131，其代谢物具有显著的抑制番茄叶霉菌的作用，公开了代谢物的制备方法，及在生物防治农药中的应用。本专利技术的一株海洋放线菌链霉菌株是从辽宁大连小平岛海泥样品中分离得到的链霉菌L131，其在Bennett培养基上生长良好，菌落凸起，表面褶皱，有白色孢子，产淡黄色可溶性色素；所述Bennett培养基的组成为葡萄糖10 g，蛋白胨2 g，酵母粉1 g，牛肉膏1 g，琼脂 15 g，蒸馏水 lL，pH 7. 2，121°C湿热灭菌 20min。所述海洋链霉菌L131代谢物，通过下述制备方法制得(1)链霉菌L131的发酵A、链霉菌L131种子液的制备将平板上的菌丝和孢子接入YMG培养基中，30°C，150 rpm培养M h得到种子液；B、链霉菌L131的发酵将链霉菌L131种子液以洲的接种量接入优化的发酵用培养基中，30°C，150 r/min 条件下培养 168 h ；所述的YMG培养基组成葡萄糖4 g,麦芽提取物10 g,酵母提取物4 g,蒸馏水1 L，pH 5. 5 士 0.2;优化的发酵用培养基组成玉米粉15 g，黄豆粉15 g，酵母浸膏1.5 g, CaCO3 0.5 g，水定容至1L，121°C湿热灭菌20 min ；(2)链霉菌L131对真菌具有抑制作用的的代谢物的制备将发酵液离心，6000 r/min离心10 min，取离心后的上清液与预处理后的大孔吸附树脂AB-8以10:3(v:m)比例混合，置于摇床150 r/min吸附24 h，然后分别用等体积蒸馏水， 40%甲醇清洗，使用等体积100%甲醇解吸，150 r/min解附M h，解吸液使用真空旋转蒸发仪35°C蒸干，再以少量体积甲醇将剩余物重新溶解浓缩，其为链霉菌L131的代谢物。所述海洋链霉菌L131的代谢物在植物病害生物防治的农药中的应用。所述海洋链霉菌L131在防治番茄叶霉病农药或制剂中的应用。所述一种防治番茄叶霉菌的制剂，包括有效成分和辅助成分，其有效成分主要是海洋链霉菌L131的代谢物。本专利技术一株海洋放线菌，抑菌圈法测试显示其发酵液对番茄叶霉菌具有显著的抑制作用。本专利技术还公开了此海洋放线菌的具有对番茄叶霉菌有抑制作用的代谢物，其制备方法通过控制海洋链霉菌L131的发酵条件，使用大孔吸附树脂对抑制番茄叶霉菌的活性物质进行分离纯化，抗菌代谢物制备简单易行，成本低，具有抑制番茄叶霉病的效果，属效果较好的绿色农药。附图说明图1显示的是菌株L131的菌落形态；图2显示的是菌株L131的平板抑制番茄叶霉菌作用。图3显示的是菌株L131叶片实验结果。具体实施例方式以下结合具体实施例，对本专利技术作进一步说明。实施例1菌株L131的鉴定综合链霉菌的形态特征、生理生化特征、16S rDNA序列等，将其鉴定为链霉菌属。具体 鉴定结果如下1.菌体形态菌株L131在Bennett培养基上生长良好，菌落凸起，表面褶皱，有白色抱子，产淡黄色 可溶性色素(见图1)。2.生理生化特征菌株L131生理生化特征如下两个表格(表1、2)所示菌株L131不能产；明胶液 化成阳性；牛奶胨化反应成阴性；不能产生淀粉酶水解淀粉；可以葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、肌 醇、山梨醇、半乳糖作为唯一碳源生长。pH值在6-12的范围内能够生长，pH在7-11的范围 内生长良好并产生孢子；盐浓度在0-11%能够生长，盐浓度在0-8%生长良好并产生抱子。表1生理生化特征权利要求1.一种海洋链霉菌L131，其特征是分离自海泥样品中，纯化培养基为Bennett培养基，海洋链霉菌L131菌落凸起，表面褶皱，有白色孢子，产淡黄色可溶性色素。2.权利要求1所述一种海洋链霉菌L131，其特征是所述Bennett培养基的组成为葡萄糖10 g，蛋白胨2 g，酵母粉1 g，牛肉膏1 g，琼脂15 g，蒸馏水定容至lL，pH 7. 2，121°C 湿热灭菌20min。3.一种海洋链霉菌L131，其特征是，其16S rDNA核苷酸全序列，总长为1421bp，序列如下所示GGCGGCGTGCTTACACATGCAAGTCGAACGATGAACCGCTTTCGGGCGGGGATTAGTGGCGAACGGGTGAGT AACACGTGGGCAATCTGCCCTGCACTCTGGGACAAGCCCTGGAAACGGGGTCTAATACCGGATATGACCGTCTGCCG CATGGTGGATGGTGTAAAGCTCCGGCGGTGCAGGATGAGCCCGCGGCCTATCAGCTTGTTGGTGAGGTAGTGGCTCA CCAAGGCGACGACGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGCGACCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGG GAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGAAAGCCTGATGCAGC本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种海洋链霉菌Ｌ１３１，其特征是：分离自海泥样品中，纯化培养基为Ｂｅｎｎｅｔｔ培养基，海洋链霉菌Ｌ１３１菌落凸起，表面褶皱，有白色孢子，产淡黄色可溶性色素。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：赵心清，王玉梅，吴毅，陈德玲，谢萌，方文晶，沈俊涛，
申请(专利权)人：大连理工大学，
类型：发明
国别省市：91
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