【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
１．权利要求１所述的人源Ｓ１００Ａ４蛋白的基因优化与高效表达，其特征在于包括如下步骤：（１）人源Ｓ１００Ａ４序列的优化设计与引物合成：①根据大肠杆菌偏好密码子，利用Ｃｏｎｄｏｎｏｐｔ密码子优化软件优化从ＧｅｎＢａｎｋ中检索到的Ｓ１００Ａ４基因序列；②全部选用偏好密码子，设计合成Ｓ１００Ａ４序列的引物。③为了便于蛋白表达，在两端引物分别引入了Ｎｄｅ Ｉ和Ｘｈｏ Ｉ的酶切位点。（２）ＰＣＲ合成优化后Ｓ１００Ａ４序列ＰＣＲ法合成。（３）表达载体ｐＥＴ３２ａ－Ｓ１００Ａ４的构建①以人源Ｓ１００Ａ４基因全长片段为模板，以ｐｆｕ酶进行ＰＣＲ扩增引入酶切位点。②用Ｎｄｅ Ｉ、Ｘｈｏ Ｉ双酶切Ｓ１００Ａ４纯化后的ＰＣＲ产物，所得产物与ｐＥＴ３２ａ质粒连接并转化到表达宿主大肠杆菌Ｅ．ｃｏｌｉ ＢＬ２１（ＤＥ３）中，ＰＣＲ筛选阳性转化子。（４）在大肠杆菌Ｅ．ｃｏｌｉ ＢＬ２１（ＤＥ３）中进行高效表达①将阳性单克隆菌，接种于５ｍＬ含氨苄西林的ＬＢ培养基中，３７℃，１６０ｒ／ｍ过夜培养。②次日将过夜培养的菌液按１∶５０的比例重新转接４００ｍＬ的ＬＢ（含Ａｍｐ）培养基中。３０℃条件下，１６０ｒｐｍ振荡培养３ｈ后...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王天辉，陈昀贇，刘子泉，徐传香，王德刚，崔博，佘晓俊，陈学伟，张娜，安改红，刘洪涛，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事医学科学院卫生学环境医学研究所，
类型：发明
国别省市：12
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